Вектор - RU2017133854A
Код документа: RU2017133854A
Формула
1. Ретровирусный или лентивирусный вектор, имеющий вирусную оболочку, содержащую:
(i) митогенный, активирующий T-клетки трансмембранный белок, содержащий митогенный домен и трансмембранный домен; и/или
(ii) активирующий T-клетки трансмембранный белок на основе цитокинов, содержащий цитокиновый домен и трансмембранный домен,
где митогенный, активирующий T-клетки трансмембранный белок или активирующий T-клетки трансмембранный белок на основе цитокинов не являются частью гликопротеина вирусной оболочки.
2. Вирусный вектор по п.1, содержащий митогенный, активирующий T-клетки трансмембранный белок, связывающийся с CD3, CD28, CD134 или CD137.
3. Вирусный вектор по п.2, где митогенный, активирующий T-клетки трансмембранный белок содержит связывающий домен из OKT3, 15E8, TGN1412, OX40L или 41BBL.
4. Вирусный вектор по п.1, содержащий два или более митогенных, активирующих T-клетки трансмембранных белка в вирусной оболочке.
5. Вирусный вектор по п.4, содержащий первый митогенный, активирующий T-клетки трансмембранный белок, связывающийся с CD3, и второй митогенный, активирующий T-клетки трансмембранный белок, связывающийся с CD28.
6. Вирусный вектор по п.1, содержащий активирующий T-клетки трансмембранный белок на основе цитокинов, содержащий цитокин, выбранный из ИЛ-2, ИЛ-7 и ИЛ-15.
7. Вирусный вектор по п.1, содержащий гетерологичный гликопротеин вирусной оболочки, из которого получают псевдотипированный вирусный вектор.
8. Вирусный вектор по п.7, где гликопротеин оболочки получают из RD114 или одного из его вариантов, VSV-G, вируса лейкоза гиббона (GALV), или он является гликопротеином оболочки амфотропного вируса, оболочки вируса кори или оболочки ретровируса бабуина.
9. Вирусный вектор по п.1, где вирусная оболочка также содержит:
(iii) белок-метку, содержащую:
связывающий домен, связывающийся с фиксирующей молекулой; и
трансмембранный домен,
при этом белок-метка облегчает очистку вирусного вектора из клеточного супернатанта посредством связывания белка-метки с фиксирующей молекулой.
10. Вирусный вектор по п.9, где связывающий домен белка-метки содержит один или несколько стрептавидин-связывающих эпитопов.
11. Вирусный вектор по п.10, где стрептавидин-связывающий эпитоп является миметиком биотина.
12. Вирусный вектор по п.11, где миметик биотина связывается со стрептавидином с более низкой аффинностью, чем биотин, таким образом, что биотин можно использовать для элюции стрептавидин-фиксированных ретровирусных векторов, продуцируемых упаковывающей клеткой.
13. Вирусный вектор по п.12, где миметик биотина выбран из следующей группы: StreptagII (SEQ ID NO: 36), Flankedccstretag (SEQ ID NO: 37) и ccstreptag (SEQ ID NO: 38).
14. Вирусный вектор по п.1, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую T-клеточный рецептор или химерный антигенный рецептор.
15. Вирусный вектор по п.1, являющийся вирусоподобной частицей (VLP)
16. Клетка-хозяин, экспрессирующая на клеточной поверхности
(i) митогенный, активирующий T-клетки трансмембранный белок, содержащий митогенный домен и трансмембранный домен; и/или
(ii) активирующий T-клетки трансмембранный белок на основе цитокинов, содержащий цитокиновый домен и трансмембранный домен
таким образом, что ретровирусный или лентивирусный вектор, продуцируемый клеткой-хозяином, определен в любом из пп.1-8.
17. Клетка-хозяин по п.16, также экспрессирующий на клеточной поверхности:
(iii) белок-метку, содержащий:
связывающий домен, связывающийся с фиксирующей молекулой; и
трансмембранный домен,
при этом белок-метка облегчает очистку вирусного вектора из клеточного супернатанта посредством связывания белка-метки с фиксирующей молекулой,
таким образом, что ретровирусный или лентивирусный вектор, продуцируемый упаковывающей клеткой, является таким, как определено в любом из пп.9-14.
18. Упаковывающая клетка, являющаяся клеткой-хозяином по п.16 или 17, также содержащая один или несколько следующих генов: gag, pol, env и/или rev.
19. Продуцирующая клетка, являющаяся клеткой-хозяином по п.16 или 17, содержащей гены gag, pol, env и, необязательно, rev, а также содержащая ретровирусный или лентивирусный геном.
20. Способ получения клетки-хозяина по п.16 или 17, включающий стадию трансдукции или трансфекции клетки с использованием нуклеиновой кислоты, кодирующей митогенный, активирующий T-клетки трансмембранный белок и/или активирующий T-клетки трансмембранный белок на основе цитокинов.
21. Способ получения упаковывающей клетки по п.18, включающий стадию трансдукции или трансфекции клетки с использованием нуклеиновой кислоты, кодирующей митогенный, активирующий T-клетки трансмембранный белок и/или активирующий T-клетки трансмембранный белок на основе цитокинов.
22. Способ получения продуцирующей клетки по п.19, включающий стадию трансдукции или трансфекции клетки с использованием нуклеиновой кислоты, кодирующей митогенный, активирующий T-клетки трансмембранный белок и/или активирующий T-клетки трансмембранный белок на основе цитокинов.
23. Способ получения вирусного вектора по любому из пп.1-15, включающий стадию экспрессии ретровирусного или лентивирусного генома в клетке по любому из пп.17-19.
24. Способ получения активированной трансгенной T-клетки или естественного киллера (NK), включающий стадию трансдукции T- или NK-клетки с использованием вирусного вектора по любому из пп.1-15, таким образом, что T-клетку или NK-клетку активируют одним или несколькими митогенными, активирующими T-клетки трансмембранными белками и/или одним или несколькими активирующими T-клетки трансмембранными белками на основе цитокинов.
25. Набор для получения ретровирусного или лентивирусного вектора по любому из пп.1-15, содержащий:
(i) клетку-хозяина по п.16 или 17;
(ii) нуклеиновые кислоты, содержащие gag, pol, env и, необязательно, rev; и
(iii) ретровирусный геном.
26. Набор для получения ретровирусного или лентивирусного вектора по любому из пп.1-15, содержащий:
(i) упаковывающую клетку по п.18; и
(ii) ретровирусный или лентивирусный геном.
27. Набор для получения упаковывающей клетки по п.18, содержащий:
(i) одну или несколько нуклеиновых кислот, кодирующих митогенный, активирующий T-клетки трансмембранный белок и/или активирующий T-клетки трансмембранный белок на основе цитокинов; и
(ii) нуклеиновые кислоты, содержащие ретровирусные гены gag, pol, env и, необязательно, rev.
28. Набор для получения продуцирующей клетки по п.19, содержащий:
(i) одну или несколько нуклеиновых кислот, кодирующих митогенный, активирующий T-клетки трансмембранный белок и/или активирующий T-клетки трансмембранный белок на основе цитокинов;
(ii) нуклеиновые кислоты, содержащие ретровирусные гены gag, pol, и env и, необязательно, rev; и
(iii) ретровирусный или лентивирусный геном.
