Производство активной высокофосфорилированной n-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы человека и ее применение - RU2013107765A

Код документа: RU2013107765A

Реферат

1. Способ очистки рекомбинантного фермента N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, при этом указанный фермент GALNS включает аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27-522 последовательности SEQ ID NO:4, и:(i) имеет чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,(ii) имеет по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в C-формилглицин (FGly), и(iii) необязательно имеет от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,и при этом по меньшей мере 97% указанного фермента GALNS представлен в форме предшественника, как это определено SDS-капиллярным гель-электрофорезом (SDS-CGE), включающий:а) фильтрацию питательной среды, содержащей фермент GALNS, секретируемый из линии клеток млекопитающего, экспрессирующей фактор модификации сульфатазы человека 1 (SUMF1) и рекомбинантный фермент GALNS человека, ультрафильтрацию/диафильтрацию профильтрованной питательной среды, и фильтрацию через активированный уголь питательной среды, прошедшей ультрафильтрацию/диафильтрацию;б) загрузку питательной среды, прошедшей фильтрацию активированным углем, ультрафильтрацию/диафильтрацию, из этапа а) в улавливающую колонку, промывание улавливающей колонки в условиях, при которых фермент GALNS удерживается в улавливающей колонке, и элюирование фермента GALNS из удерживающей колонки;в) необязательно, фильтрацию элюата из улавливающей колонки из этапа б) через фильтр для удаления вирусов;г) корректирование уровня рН элюата из улавливающей колонки из этапа б) или фильтрата �

Авторы

Заявители

СПК: A61K9/08 A61K38/00 A61K38/46 A61K38/465 A61P3/00 A61P17/00 A61P19/00 A61P25/00 A61P25/02 A61P43/00 C07K1/14 C12N9/16 C12Y301/06004

МПК: A61K38/46

Публикация: 2014-08-27

Дата подачи заявки: 2011-07-22

0
0
0
0
Невозможно загрузить содержимое всплывающей подсказки.
Поиск по товарам