Способ изменения функционального состояния мрнк, обеспечивающий ее избирательное и специфическое распознавание - RU2018117650A
Код документа: RU2018117650A
Формула
1. Способ изменения функционального состояния любой мРНК, обеспечивающий ее избирательное и специфическое распознавание и последующее избирательное вмешательство, манипулирование, ее обнаружение, количественную оценку, маркировку, предварительное таргетирование и сортировку, отличающийся тем, что мРНК нацеливают посредством конструкции, образованной, по меньшей мере, двумя последовательность-специфическими олигонуклеотидами, взаимно связанными посредством размер-специфического полимерного связывающего фрагмента, определяющего их взаимное расстояние, причем каждый из последовательность-специфических олигонуклеотидов нацелен на предварительно определенную последовательность-мишень мРНК, что приводит к образованию стабильного гетеродуплекса, и избирательно и специфически распознается на основе такого чередования мРНК.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что любая мРНК является слитой мРНК.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что каждый из партнеров по слиянию слитой мРНК-мишени таргетируют по меньшей мере одним последовательность-специфическим олигонуклеотидом.
4. Способ по п. 2, отличающийся тем, что целевые последовательности локализуют не более чем на 100 нуклеотидов с точки разрыва сайта слияния.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что последовательности отдельных последовательность-специфических олигонуклеотидов конструкции нацелены в соответствии с комплементарностью на отдельные предварительно определенные области мРНК.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что мРНК таргетируют конструкцией, содержащей по меньшей мере 3 олигонуклеотида, каждый из олигонуклеотидов нацелен на заранее определенную последовательность-мишень отдельных областей мРНК, где олигонуклеотиды взаимосвязаны через соответствующее количество размер-специфических полимерных связывающих фрагментов.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что длина размер-специфического полимерного связывающего фрагмента составляет от 5 до 1000 ангстрем.
8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что размер-специфический полимерный связывающий фрагмент присоединен к 5'-концу первого олигонуклеотида и к 3'-концу второго олигонуклеотида.
9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что размер-специфический полимерный связывающий фрагмент содержит
a) любую последовательность и количество нуклеотидов или производных/аналогов нуклеотидов, предпочтительно от 1 до 50 нуклеотидов, в любой взаимной комбинации, где полимерный связывающий фрагмент может также состоять из сахар-фосфатной основной цепи или любой химически модифицированной цепи с удаленным азотистым основанием.
b) полипептид любой последовательности
c) полисахарид
d) насыщенный или ненасыщенный углеводород (С2-С40)
e) ненуклеотидный полимер, такой как поли(мет)акрилат или модифицированный поли(мет)акрилат (предпочтительно поли(этиленокси) и 2 (N,N-диметиламино)этил (мет) акрилат), поли(виниловый спирт), поли(винилпирролидон), поли(этиленгликоль), поли(акриламид), поли(оксазолин), поли(этиленимин), поли(алкиленоксид), полимер на основе лактона, поли(акриловая кислота), поли(лактидная кислота), поли(гликолевая кислота), поли(пропилен), поли(стирол), поли(олефин), поли(амид), поли(цианоакрилат), поли(имид), поли(этилентерефталат), поли(тетраметиленгликоль), поли(уретан), полимер, полученный путем их взаимного комбинирования, опционально сочетанием с другими природными или синтетическими полимерами.
10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что длина последовательность-специфических олигонуклеотидов составляет по меньшей мере 3 нуклеотида, содержащих любые нуклеотиды или их химические производные/аналоги и могут быть взаимно объединены либо в виде блоков олигонуклеотидов с определенной химической модификацией, либо как отдельные олигонуклеотиды, состоящие из различным образом модифицированных нуклеотидов.
11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что последовательность-специфические олигонуклеотиды выбраны из ДНК, РНК, 2'-O-(2-метоксиэтил)-РНК, 2'-O-метил-РНК, 2'-О-фтор-РНК, LNA, PNA, морфолино, INA, FANA, ANA, UNA или HNA, необязательно -их комбинации.
12. Способ по п. 10, отличающийся тем, что длина последовательность-специфических олигонуклеотидов составляет от 10 до 25 нуклеотидов.
