Контролирование образования дисульфидных связей в белковых растворах с помощью добавления восстанавливающих средств - RU2016151320A
Код документа: RU2016151320A
Формула
1. Способ контроля числа дисульфидных связей между полипептидами получаемого с помощью биологического способа мультимерного белка, включающий:
приведение в контакт полипептидов с кондиционированным раствором в конкретный момент времени в ходе биологического способа,
где кондиционированный раствор характеризуется одним или несколькими предварительно определенными параметрами раствора, и
инкубацию кондиционированного раствора, содержащего полипептиды, в течение предварительно определенного времени при предварительно определенной температуре;
где посредством инкубации полипептидов с кондиционированным раствором контролируют образование дисульфидных связей между полипептидами белка.
2. Способ по п.1, где число дисульфидных связей между полипептидами белка увеличивается.
3. Способ по п.1, где число дисульфидных связей между полипептидами белка уменьшается.
4. Способ по п.1, где число дисульфидных связей между полипептидами белка сохраняется.
5. Способ по п.1, где предварительно определенные параметры раствора представляют собой одно или несколько из: наименования окислительно-восстановительного реагента, концентрации окислительно-восстановительного реагента, значения рН, наименования газа, уровней содержания растворенных газов, проводимости и плотности жизнеспособных клеток.
6. Способ по п.5, где наименование окислительно-восстановительного реагента представляет собой 2-меркаптоэтиламин (2-МЕА), восстановленный глутатион, окисленный глутатион, 2-меркаптоэтанол, дитиотреитол (DTT), цистеин, цистин, дитиобутиламин или сульфит натрия.
7. Способ по п.1, где предварительно определенная температура инкубации составляет от приблизительно 2°C до приблизительно 23°C.
8. Способ по п.1, где предварительно определенная температура инкубации составляет от приблизительно 23°C до приблизительно 37°C или выше.
9. Способ по п.1, где кондиционированный раствор, содержащий полипептиды, перемешивают в ходе инкубации.
10. Способ по п.1, дополнительно включающий:
выведение полипептидов из биологического способа в конкретный момент времени в ходе биологического способа.
11. Способ по п.10, дополнительно включающий: возвращение полипептидов в биологический способ после инкубации.
12. Способ по п.1, где конкретный момент времени в ходе биологического способа представляет собой момент времени после технологической операции в биореакторе или технологической операции с периодической подпиткой культуры клеток в биологическом способе.
13. Способ по п.1, где конкретный момент времени в ходе биологического способа представляет собой момент времени, при котором полипептиды находятся в растворе, содержащем множество клеток.
14. Способ по п.1, где конкретный момент времени в ходе биологического способа представляет собой момент времени, при котором полипептиды находятся в не содержащем клеток растворе.
15. Способ по п.14, где не содержащий клетки раствор содержит элюат белка A.
16. Способ по п.1, где мультимерный белок представляет собой антитело или его фрагмент.
17. Способ контроля доли молекул полуантител в растворе, содержащем совокупность молекул антител, включающий:
приведение в контакт раствора, содержащего совокупность молекул антител, с кондиционированным раствором,
где кондиционированный раствор характеризуется предварительно определенными параметрами раствора; и
инкубацию кондиционированного раствора, содержащего молекулы антител, в течение предварительно определенного времени при предварительно определенной температуре;
где посредством инкубации молекул антител с кондиционированным раствором контролируют долю молекул полуантител в кондиционированном растворе антител.
18. Способ по п.17, где предварительно определенные параметры раствора включают выбор окислительно-восстановительного реагента, концентрацию окислительно-восстановительного реагента, значение рН, выбор газа, уровни содержания растворенных газов, проводимость, плотность жизнеспособных клеток или концентрацию белка.
19. Способ по п.16, где антитело или его фрагмент представляет собой антитело IgG4.
20. Способ по п.17, где доля молекул полуантител в кондиционированном растворе антител составляет менее 30 процентов.
