Иммунологические анализы активности ботулинического токсина серотипа а - RU2012146463A

Реферат

1. Фармацевтическая композиция, содержащая ботулинический нейротоксин серотипа A (Bont/A), где активность в ходе изготовления фармацевтической композиции определяют с помощью следующих стадий:а) приведения в контакт клетки из устойчивой клеточной линии, экспрессирующей полипептид SNAP-25, состоящий, по существу, по меньшей мере из части человеческого SNAP-25, включающей SEQ ID NO:5, расщепляемую BoNT/A, с фармацевтической композицией, где устойчивая клеточная линия подвержена интоксикации BoNT/A при примерно или менее чем 500 пмоль BonT/А на 1 л культуральной среды, как показано путем ферментативного расщепления указанного полипептида SNAP-25 с помощью BoNT/A с получением фрагмента указанного полипептида SNAP-25, содержащего С-концевую аминокислотную последовательность SEQ IN NO:38;б) выделения полипептидов из клетки;в) приведения полипептидов в контакт с моноклональным антителом, которое специфически связывается с пептидом, имеющим последовательность SEQ ID NO:38, где указанное антитело специфически связывается с эпитопом указанного фрагмента указанного полипептида SNAP-25, содержащего С-концевую аминокислотную последовательность SEQ IN NO:38, с равновесной константой диссоциации, составляющей менее 0,45 нмоль, и где указанное антитело обладает константой скорости ассоциации для эпитопа интактного полипептида SNAP-25, включающего SEQ ID NO:5, составляющей менее 1·10М·с; иг) обнаружение присутствия комплекса антиген-антитело, содержащего антитело и фрагмент указанного полипептида SNAP-25, содержащего С-концевую аминокислотную последовательность SEQ IN NO:38, где высокое содержание обнаруживаемого комплекса антиген-антитело соответствует высокой концентрации BoNT/A �