Способ одновременного обнаружения антигенов и антител против инфекционного микроорганизма - RU2004136165A

Реферат

1. Способ обнаружения in vitro инфекции, вызванной микроорганизмом, в биологической пробе, предусматривающий одновременное обнаружение по меньшей мере одного антигена микроорганизма и одного антитела против этого микроорганизма, содержащихся в биологической пробе, включающий

а) приготовление биологической пробы, содержащей связывающее антитело против указанного микроорганизма и связывающий антиген, происходящий из указанного микроорганизма,

б) инкубацию смеси в условиях, обеспечивающих образование комплекса "антиген-антитело",

в) выявление образовавшихся комплексов "антиген-антитело", в котором в случае необходимости используется меченое детектирующее антитело, способное связываться с связавшимся антигеном микроорганизма, и/или, при необходимости, меченый детектирующий антиген, способный связываться с связавшимся антителом против микроорганизма,

и при котором связывающий антиген и/или меченый детектирующий антиген указанного микроорганизма содержит фрагмент антигена этого микроорганизма, по меньшей мере, один эпитоп которого инактивирован, а связывающее и/или детектирующее антитело узнает нативный эпитоп связавшегося антигена.

2. Способ по п.1, в котором микроорганизм выбирается из группы, включающей вирусы, бактерии и микробные паразиты.

3. Способ по п.2, в котором микроорганизмом является вирус гепатита С.

4. Способ по п.3, в котором связывающий антиген содержит фрагмент антигена капсидного белка вируса гепатита С, в котором, по меньшей мере, один эпитоп инактивирован.

5. Способ по п.3, в котором связывающий антиген содержит фрагмент антигена неструктурного белка NS3 или NS4 вируса гепатита С.

6. Способ по п.2, в котором микроорганизмом является вирус иммунодефицита человека (ВИЧ).

7. Способ по п.6, в котором ВИЧ представляет собой ВИЧ-1 и/или ВИЧ-2.

8. Способ по п.6, в котором связывающий антиген содержит фрагмент антигена белка gag ВИЧ, в котором, по меньшей мере, один эпитоп инактивирован.

9. Способ по п.7, в котором связывающий антиген содержит фрагмент антигена капсульного белка ВИЧ.

10. Способ по п.3, в котором связывающий антиген содержит, по меньшей мере, два разных инактивированных эпитопа.

11. Способ по п.3, в котором связывающий антиген содержит эпитоп, инактивированный замещением, делецией или инсерцией, по меньшей мере, одной аминокислоты.

12. Способ по п.3, в котором указанные связывающее антитело и связывающий антиген иммобилизованы на твердой фазе.

13. Способ по п.3, в котором детектирующее антитело вводится в смесь после образования комплекса "антиген-антитело".

14. Способ по п.3, в котором детектирующее антитело и/или детектирующий антиген вводятся в биологическую пробу одновременно со связывающим антителом и связывающим антигеном.

15. Способ по п.3, включающий:

а) приготовление биологической пробы, содержащей связывающее антитело против вируса гепатита С и связывающий антиген вируса гепатита С, иммобилизованные на твердой фазе,

б) инкубацию смеси в условиях, обеспечивающих образование комплексов "антиген-антитело",

в) отделение твердой фазы от жидкой,

г) контактирование твердой фазы, с одной стороны, с меченым детектирующим антителом, способным связывать связавшийся антиген вируса гепатита С, и, с другой стороны, с антителом против иммуноглобулина или против изотипа, или с меченым детектирующим антигеном, способным связывать связавшееся антитело против вируса гепатита С,

при этом связывающий антиген, детектирующий антиген и антитело против вируса гепатита С содержат фрагменты антигена капсидного белка вируса гепатита С, оба эпитопа которого инактивированы, а

связывающие и детектирующие антитела узнают каждое один из нативных эпитопов связавшегося капсидного антигена.

16. Способ по п.15, в котором связывающее и детектирующее антитела узнают каждое эпитоп, выбранный из группы эпитопов следующих последовательностей:

⁴⁴LGVR⁴⁷ (SEQ ID №19),³⁰IVGGVYL³⁶ (SEQ ID №20) и²⁹QIVGGV³⁴ (SEQ ID №21).

17. Способ обнаружения по п.6 или 7, включающий:

а) приготовление биологической пробы, содержащей связывающее антитело ВИЧ и связывающий антиген ВИЧ, иммобилизованные на твердой фазе,

б) инкубацию смеси в условиях, обеспечивающих образование комплексов "антиген-антитело",

в) отделение твердой от жидкой фазы,

г) контактирование твердой фазы с меченым детектирующим антителом, способным связывать связавшийся антиген ВИЧ, и с меченым одним или несколькими антителами против иммуноглобулина или против изотипа, способным связывать связавшееся антитело против ВИЧ,

при этом антиген, связывающий антитело против ВИЧ, содержит фрагмент антигена белка gag ВИЧ, по меньшей мере, один эпитоп которого инактивирован,

связывающие и детектирующие антитела узнают каждое один из нативных эпитопов связавшегося капсидного антигена.

18. Способ по п.17, при котором связывающие и детектирующие антитела узнают каждое один из эпитопов последовательности QASQEVKNWMTETLL (SEQ ID №24).

19. Способ по п.15, в котором приготовление биологической пробы, содержащей упомянутые связывающее антитело и связывающий антиген, иммобилизованные на твердой фазе, проводится в присутствии, по меньшей мере, одного неионного детергента.

20. Способ по п.19, при котором неионным детергентом является NP40.

21. Набор для обнаружения инфекции, вызванной микроорганизмом, в биологической пробе, содержащий связывающий или детектирующий антиген, содержащий фрагмент антигена белка микроорганизма, причем этот фрагмент содержит, по меньшей мере, один инактивированный эпитоп и полностью сохраняет способность к связыванию антител против микроорганизма, возможно присутствующих в биологической пробе, антитело против указанного нативного эпитопа белка микроорганизма.

22. Набор по п.21, в котором микроорганизмом является вирус гепатита С.

23. Набор по п.22, в котором указанное антитело является связывающим антителом для антигена вируса гепатита С, присутствующего в биологической пробе.

24. Набор по п.22, в котором антитело узнает эпитоп, выбранный из группы эпитопов следующих последовательностей:⁴⁴LGVR⁴⁷ (SEQ ID №19),³⁰IVGGVYL³⁶ (SEQ ID №20) и²⁹QIVGGV³⁴ (SEQ ID №21).

25. Набор по п.21, в котором микрорганизмом является вирус иммунодефицита человека (ВИЧ).

26. Набор по п.25, в котором вирусом иммунодефицита человека является ВИЧ-1 и/или ВИЧ-2.

27. Набор по п.25, в котором указанное антитело является связывающим антителом для антигена ВИЧ, присутствующего в биологической пробе.

28. Набор по п.25, в котором антитело узнает эпитоп последовательности QASQEVKNWMTETLL (SEQ ID №24).

29. Набор по п.22, содержащий, кроме связывающего антигена, средство для обнаружения указанных антител против вируса гепатита С, присутствующих в биологической пробе и образующих комплекс со связывающим антигеном.

30. Набор по п.25, содержащий, кроме связывающего антигена, средство для обнаружения антител против ВИЧ, присутствующих в биологической пробе и образующих комплекс со связывающим антигеном.

31. Набор по п.28, в котором детектирующее средство представляет собой меченое антитело против иммуноглобулина или против изотипа.

32. Набор по п.23, в котором связывающее антитело и связывающий антиген иммобилизованы на твердой фазе.

33. Набор по п.32, содержащий

а) связывающий антиген, содержащий фрагмент антигена белка вируса гепатита С, причем этот фрагмент содержит, по меньшей мере, два инактивированных эпитопа и полностью сохраняет способность к связыванию антител против вируса гепатита С, возможно присутствующих в биологической пробе,

б) связывающее антитело против одного из указанных нативных эпитопов белка вируса гепатита С, причем связывающие антиген и антитело иммобилизованы на твердой фазе,

в₁) меченое детектирующее антитело против другого из нативных эпитопов белка вируса гепатита С и/или

в₂) при необходимости меченый детектирующий антиген, представляющий собой фрагмент белкового антигена вируса гепатита С, причем этот фрагмент содержит, по меньшей мере, один инактивированный эпитоп и полностью сохраняет способность к связыванию антител против вируса гепатита С, возможно присутствующих в биологической пробе.

34. Набор по п.33, в котором меченый детектирующий антиген представляет собой фрагмент капсидного белка вируса гепатита С, в котором, по меньшей мере, один эпитоп инактивирован.

35. Набор по п.22, в котором связывающий антиген содержит фрагмент капсидного белка вируса гепатита С, в котором, по меньшей мере, один эпитоп инактивирован, а антитело узнает нативный эпитоп капсидного белка.

36. Набор по п.31, содержащий

а) связывающий антиген, содержащий фрагмент антигена белка вируса иммунодефицита человека, в котором, по меньшей мере, один эпитоп инактивирован, полностью сохраняющий способность к связыванию антител против вируса иммунодефицита человека, возможно присутствующих в биологической пробе,

б) связывающее антитело против одного из указанных нативных эпитопов белка ВИЧ,

причем связывающие антиген и антитело иммобилизованы на твердой фазе,

в₁) меченое детектирующее антитело против другого из нативных эпитопов белка ВИЧ и/или

в₂) при необходимости меченый детектирующий антиген, представляющий собой фрагмент антигена белка ВИЧ, в котором, по меньшей мере, один эпитоп инактивирован, полностью сохраняющий способность к связыванию антител против ВИЧ, возможно присутствующих в биологической пробе.

37. Набор по п.36, в котором связывающий антиген содержит фрагмент антигена белка gag ВИЧ, в котором инактивирован, по меньшей мере, один эпитоп.

38. Набор по п.25, в котором связывающий антиген содержит фрагмент белка gag ВИЧ, в котором, по меньшей мере, один эпитоп инактивирован, а антитело узнает нативный эпитоп белка gag.

39. Набор по п.23, содержащий дополнительно, по меньшей мере, один детергент неионного типа.

40. Набор по п.39, в котором детергентом неионного типа является NP40.

41. Пептид или полипептид капсидного белка вируса гепатита С, содержащий, по меньшей мере, один нативный эпитоп и, по меньшей мере, один инактивированный эпитоп, причем инактивированный эпитоп не способен быть узнанным антителом против капсида.

42. Пептид или полипептид по п.41, содержащий любую последовательность от SEQ ID №4 до SEQ ID №18.

43. Пептид или полипептид белка gag ВИЧ, содержащий, по меньшей мере, один нативный эпитоп и, по меньшей мере, один инактивированный эпитоп, причем инактивированный эпитоп не способен быть узнанным антителом антибелка gag.

44. Пептид или полипептид по п.43, содержащий последовательность SEQ ID №22.