Способы и композиции для доставки полезной нагрузки в виде нуклеиновых кислот и белков - RU2019121992A
Код документа: RU2019121992A
Формула
1. Молекула доставки, содержащая нацеливающий на пептид лиганд, конъюгированный с доставляемой полезной нагрузкой в виде белка или нуклеиновой кислоты, или конъюгированный с заряженным доменом полимерного полипептида, причем нацеливающий лиганд обеспечивает целевое связывание с белком клеточной поверхности.
2. Молекула доставки по п. 1, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд содержит внутренний остаток цистеина.
3. Молекула доставки по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд содержит замену или вставку цистеина в одном или нескольких внутренних положениях аминокислот по сравнению с соответствующей аминокислотной последовательностью дикого типа.
4. Молекула доставки по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд содержит остаток цистеина на N- и/или C-конце.
5. Молекула доставки по п. 4, отличающаяся тем, что остаток цистеина на N- и/или С-конце представляет собой замену или вставку по сравнению с соответствующей аминокислотной последовательностью дикого типа.
6. Молекула доставки по любому из пп. 1-5, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд имеет длину от 5 до 50 аминокислот.
7. Молекула доставки по любому из пп. 1-6, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд представляет собой фрагмент белка дикого типа.
8. Молекула доставки по любому из пп. 1-7, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд обеспечивает целевое связывание с белком клеточной поверхности, выбранным из рецептора, сопряженного с G-белком (GPCR) семейства B , рецепторной тирозинкиназы (RTK), гликопротеина клеточной поверхности и молекулы межклеточной адгезии.
9. Молекула доставки по п. 8, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд обеспечивает связывание как с доменом аллостерического сродства, так и с ортостерическим доменом GPCR семейства B, чтобы обеспечить целевое связывание и вовлечение длинных путей эндосомальной рециркуляции, соответственно.
10. Молекула доставки по п. 9, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд содержит аминокислотную последовательность, имеющую 85% или больше идентичности с аминокислотной последовательностью эксендина-4: HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS (SEQ ID NO. 1).
11. Молекула доставки по п. 10, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд содержит замену цистеина в одном или нескольких положениях, соответствующих L10, S11 и K12 аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1).
12. Молекула доставки по п. 9, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд содержит аминокислотную последовательность: HGEGTFTSDLCKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS (SEQ ID NO. 2).
13. Молекула доставки по п. 8, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд обеспечивает целевое связывание с рецепторной тирозинкиназой (RTK).
14. Молекула доставки по п. 13, отличающаяся тем, что рецепторная тирозинкиназа (RTK) представляет собой рецептор фактора роста фибробластов (FGF).
15. Молекула доставки по п. 14, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд представляет собой фрагмент FGF.
16. Молекула доставки по п. 14 или 15, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд связывается с сегментом RTK, который занят(оккупирован) во время ортостерического связывания.
17. Молекула доставки по любому из пп. 13-16, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд связывается с доменом аффинности к гепарину указанной RTK.
18. Молекула доставки по любому из пп. 13-17, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд обеспечивает целевое связывание с рецептором FGF, причем нацеливающий лиганд содержит аминокислотную последовательность, имеющую 85% или больше идентичности с аминокислотной последовательностью KNGGFFLRIHPDGRVDGVREKS (SEQ ID NO: 4).
19. Молекула доставки по любому из пп. 13-17, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд обеспечивает целевое связывание с рецептором FGF, причем нацеливающий лиганд содержит аминокислотную последовательность HFKDPK (SEQ ID NO: 5).
20. Молекула доставки по любому из пп. 13-17, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд обеспечивает целевое связывание с рецептором FGF, причем нацеливающий лиганд содержит аминокислотную последовательность LESNNYNT (SEQ ID NO: 6).
21. Молекула доставки по п. 8, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд обеспечивает целевое связывание с гликопротеином клеточной поверхности и/или фактором межклеточной адгезии.
22. Молекула доставки по п. 21, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд представляет собой фрагмент E-селектина, L-селектина или P-селектина.
23. Молекула доставки по п. 21, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд содержит аминокислотную последовательность, имеющую 85% или больше идентичности с аминокислотной последовательностью MIASQFLSALTLVLLIKESGA (SEQ ID NO: 7).
24. Молекула доставки по п. 21, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд содержит аминокислотную последовательность, имеющую 85% или больше идентичности с аминокислотной последовательностью MVFPWRCEGTYWGSRNILKLWVWTLLCCDFLIHHGTHC (SEQ ID NO: 8), MIFPWKCQSTQRDLWNIFKLWGWTMLCCDFLAHHGTDC (SEQ ID NO: 9) и/или MIFPWKCQSTQRDLWNIFKLWGWTMLCC (SEQ ID NO: 10).
25. Молекула доставки по п. 8, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд обеспечивает целевое связывание с молекулой межклеточной адгезии.
26. Молекула доставки по любому из пп. 1-7, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд обеспечивает целевое связывание с рецептором трансферрина, причем нацеливающий лиганд содержит аминокислотную последовательность, имеющую 85% или больше идентичности с аминокислотной последовательностью THRPPMWSPVWP (SEQ ID NO: 11).
27. Молекула доставки по любому из пп. 1-7, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд обеспечивает целевое связывание с α5β1-интегрином.
28. Молекула доставки по п. 27, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд содержит аминокислотную последовательность RRETAWA (SEQ ID NO: 12).
29. Молекула доставки по п. 27, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд содержит аминокислотную последовательность RGD.
30. Молекула доставки по любому из пп. 1-29, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд обеспечивает привлечение β-аррестина при связывании с белком клеточной поверхности.
31. Молекула доставки по любому из пп. 1-30, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд конъюгирован с доставляемой полезной нагрузкой в виде нуклеиновой кислоты.
32. Молекула доставки по п. 31, отличающаяся тем, что доставляемая полезная нагрузка в виде нуклеиновой кислоты представляет собой агент РНКи (RNAi).
33. Молекула доставки по п. 32, отличающаяся тем, что агент РНКи представляет собой молекулу миРНК (siRNA).
34. Молекула доставки по любому из пп. 1-30, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд конъюгирован с доставляемой полезной нагрузкой на основе белка.
35. Молекула доставки по любому из пп. 1-30, отличающаяся тем, что доставляемая полезная нагрузка представляет собой комплекс рибонуклеопротеина, и нацеливающий лиганд конъюгирован с нуклеиновой кислотой или белковым компонентом указанного комплекса.
36. Молекула доставки по любому из пп. 1-30, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд конъюгирован с заряженным доменом полимерного полипептида.
37. Молекула доставки по п. 36, отличающаяся тем, что заряженный домен полимерного полипептида конденсирован с доставляемой полезной нагрузкой на основе нуклеиновой кислоты.
38. Молекула доставки по п. 36 или 37, отличающаяся тем, что заряженный домен полимерного полипептида электростатически взаимодействует с белком.
39. Молекула доставки по любому из пп. 36-38, отличающаяся тем, что молекула доставки присутствует в композиции, которая содержит анионный полимер.
40. Молекула доставки по п. 39, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит по меньшей мере один анионный полимер, выбранный из поли(глутаминовой кислоты) и поли(аспарагиновой кислоты).
41. Молекула доставки по п. 36, отличающаяся тем, что заряженный домен полимерного полипептида молекулы доставки электростатически взаимодействует с заряженным стабилизирующим слоем наночастицы.
42. Молекула доставки по любому из пп. 36-41, отличающаяся тем, что заряженный домен полимерного полипептида представляет собой катионный домен, выбранный из RRRRRRRRR (9R) (SEQ ID NO: 15) и HHHHHH (6H) (SEQ ID NO: 16).
43. Молекула доставки по любому из пп. 36-42, отличающаяся тем, что заряженный домен полимерного полипептида содержит пептид гистонового хвоста (HTP).
44. Молекула доставки по любому из пп. 1-43, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд содержит остаток цистеина и конъюгирован с доставляемой полезной нагрузкой через остаток цистеина.
45. Молекула доставки по любому из пп. 1-44, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд конъюгирован с доставляемой полезной нагрузкой посредством сульфгидрильной химии или химии реакций с аминами.
46. Молекула доставки по любому из пп. 1-45, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд конъюгирован с доставляемой полезной нагрузкой через промежуточный линкер.
47. Молекула доставки по п. 46, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд содержит остаток цистеина и конъюгирован с линкером через остаток цистеина.
48. Молекула доставки по п. 46 или 47, отличающаяся тем, что линкер конъюгирован с нацеливающим лигандом и/или с доставляемой полезной нагрузкой посредством сульфгидрильной химии или химии реакций с аминами.
49. Молекула доставки по любому из пп. 46-48, отличающаяся тем, что линкер является жестким.
50. Молекула доставки по любому из пп. 46-48, отличающаяся тем, что линкер является гибким.
51. Молекула доставки по любому из пп. 46-48, отличающаяся тем, что линкер является эндосомолитическим.
52. Молекула доставки по любому из пп. 46-51, отличающаяся тем, что линкер представляет собой полипептид.
53. Молекула доставки по любому из пп. 46-51, отличающаяся тем, что линкер не является полипептидом.
54. Молекула доставки по любому из пп. 1-53, отличающаяся тем, что нацеливающий лиганд обеспечивает вовлечение длинных путей эндосомальной рециркуляции.
55. Способ доставки полезной нагрузки в виде нуклеиновой кислоты, белка или рибонуклеопротеина в клетку, включающий:
контактирование клетки с молекулой доставки по любому из пп. 1-54.
56. Способ по п. 55, отличающийся тем, что клетка представляет собой клетку млекопитающего.
57. Способ по п. 55 или 56, отличающийся тем, что клетка находится в условиях in vitro или ex vivo.
58. Способ по п. 55 или 56, отличающийся тем, что клетка находится в условиях in vivo.
59. Способ по любому из пп. 55-58, отличающийся тем, что клетку выбирают из Т-клеток, гемопоэтических стволовых клеток (HSC), клеток костного мозга и клеток крови.
