Способы предотвращения восстановления дисульфидной связи в сборе клеточной культуры с применением селенита - RU2020115258A

1. Способ предотвращения восстановления дисульфидной связи в полипептиде, экспрессированном в рекомбинантной клетке-хозяине, включающий, после ферментации, добавление селенита в раствор сбора рекомбинантной клетки-хозяина, где дисульфидная связь в полипептиде остается невосстановленной.

2. Способ по п. 1, где полипептид включает антитело.

3. Способ по п. 1, где полипептид включает биологически функциональный фрагмент антитела.

4. Способ по п. 1, где клетка-хозяин включает эукариотическую клетку.

5. Способ по п. 4, где эукариотическая клетка включает клетку млекопитающего.

6. Способ по п. 5, где клетка млекопитающего включает клетку яичника китайского хомячка (CHO).

7. Способ по п. 1, где селенит добавляют в раствор сбора в диапазоне 0,01-100 мМ.

8. Способ по п. 1, где селенит добавляют в раствор сбора в диапазоне 0,1-10 мМ.

9. Способ по п. 1, где селенит включает соль селенита, выбранную из группы, состоящей из селенита кальция, селенита натрия и селенита калия.

10. Способ по п. 1, дополнительно включающий IgG антитело.

11. Способ по п. 10, где IgG антитело включает IgG2.

12. Способ по п. 10, где IgG антитело включает IgG1.

13. Способ по п. 10, где IgG антитело включает IgG4.

14. Способ по пп. 1-3, дополнительно включающий извлечение полипептида из собранной культуральной жидкости (HCCF).

15. Способ по пп. 1-3, дополнительно включающий очистку полипептида от собранной культуральной жидкости (HCCF).

16. Способ по п. 1, где указанный селенит: (a) находится в форме пентагидрата или в безводной форме; (b) добавляют при концентрации между 0,01-100 мМ; (c) добавляют при концентрации между 0,1-10 мМ; (d) добавляют при концентрации между 0,1-4 мМ; или (e) добавляют при концентрации, по меньшей мере около в два раза превышающей концентрацию селенита в указанной культуральной жидкости до сбора или собранной культуральной жидкости.