Способы предотвращения восстановления дисульфидной связи в сборе клеточной культуры - RU2020115256A
Код документа: RU2020115256A
Формула
1. Способ предотвращения восстановления дисульфидной связи в полипептиде, экспрессированном в рекомбинантной клетке-хозяине, включающий, после ферментации, добавление фосфата в раствор сбора рекомбинантной клетки-хозяина, где дисульфидная связь в полипептиде остается невосстановленной.
2. Способ по п. 1, где полипептид включает антитело.
3. Способ по п. 1, где полипептид включает биологически функциональный фрагмент антитела.
4. Способ по п. 1, где клетка-хозяин включает эукариотическую клетку.
5. Способ по п. 4, где эукариотическая клетка включает клетку млекопитающего.
6. Способ по п. 5, где клетка млекопитающего включает клетку яичника китайского хомячка (CHO).
7. Способ по п. 1, где фосфат добавляют в раствор сбора с получением конечного раствора в диапазоне 10-1000 мМ.
8. Способ по п. 1, где фосфат добавляют в раствор сбора с получением конечного раствора в диапазоне 10-300 мМ.
9. Способ по п. 1, где фосфат включает фосфатную соль, выбранную из группы, состоящей из фосфата кальция, фосфата натрия и фосфата калия.
10. Способ по п. 2, дополнительно включающий IgG антитело.
11. Способ по п. 10, где IgG антитело включает IgG2.
12. Способ по п. 10, где IgG антитело включает IgG1.
13. Способ по п. 10, где IgG антитело включает IgG4.
14. Способ по пп. 1-3, дополнительно включающий извлечение полипептида из собранной культуральной жидкости (HCCF).
15. Способ по пп. 1-3, дополнительно включающий очистку полипептида от собранной культуральной жидкости (HCCF).
16. Способ по п. 1, где указанный фосфат:
(a) находится в форме пентагидрата или в безводной форме;
(b) добавляют при концентрации между 10-1000 мМ;
(c) добавляют при концентрации между 10-300 мМ;
(d) добавляют при концентрации между 10-100 мМ; или
(e) добавляют при концентрации, по меньшей мере около в два раза превышающей концентрацию фосфата в указанной культуральной жидкости до сбора или собранной культуральной жидкости.
