Эстроген-чувствительный элемент вмр-2 и способы его применения - RU2005107330A

Реферат

1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеиновую кислоту, которая соответствует регуляторной области ВМР-2, содержащей эстроген-чувствительный элемент.

2. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.1, в котором нуклеиновая кислота является функционально связанной со второй нуклеиновой кислотой.

3. Клетка-хозяин, включающая вектор по п.2.

4. Клетка-хозяин по п.3, в которой клетка дополнительно содержит рецептор эстрогена.

5. Клетка-хозяин по п.4, в которой рецептор эстрогена представляет собой рецептор α.

6. Клетка-хозяин по п.4, в которой рецептор эстрогена представляет собой рецептор β.

7. Способ идентификации лекарственного средства для профилактики и/или лечения остеопороза, предусматривающий

(a) введение в клетку вектора по п.2;

(b) контакт клетки со средством-кандидатом; и

(c) мониторинг экспрессии белка, кодируемого нуклеиновой кислотой-репортером, в котором индуцированная экспрессия белка указывает на то, что средство-кандидат представляет собой потенциальное лекарственное средство.

8. Способ по п.7, в котором на стадии (а) второй экспрессирующий вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующей рецептор эстрогена, вводят в клетку.

9. Способ по п.8, в котором рецептор эстрогена представляет собой рецептор α.

10. Способ по п.8, в котором рецептор эстрогена представляет собой рецептор β.

11. Способ регулирования экспрессии ВМР-2 у субъекта, предусматривающий стадии введения вектора по п.2, в котором указанная вторая нуклеиновая кислота кодирует BMP-2, и введения субъекту эффективного количества эстрогена или агониста эстрогена, таким образом, регулируя экспрессию BMP-2 у субъекта.

12. Способ регулирования экспрессии BMP-2 у субъекта, предусматривающий стадии введения субъекту эффективного количества клеток по п.3, где вторая нуклеиновая кислота кодирует BMP-2, и введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества эстрогена или агониста эстрогена, таким образом, регулируя экспрессию BMP-2 у субъекта.

13. Способ по п.12, в котором данная клетка представляет собой мезенхимальную стволовую клетку, клетку-предшественника или клетку, способную дифференцироваться в остеобласт.

14. Способ увеличения чувствительности клетки к эстрогену или агонисту эстрогена, предусматривающий стадию введения вектора по п.2, таким образом, увеличивая чувствительность клетки к эстрогену.

15. Способ по п.14, в котором клетка содержит рецептор эстрогена.

16. Способ по п.14, в котором данная клетка представляет собой мезенхимальную стволовую клетку, клетку-предшественника или клетку, способную дифференцироваться в остеобласт.

17. Способ усиления репарации кости у субъекта, нуждающегося в этом, содержащей стадии введения вектора по п.2 и введения субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества эстрогена или агониста эстрогена, таким образом, усиливая репарацию кости у субъекта, нуждающегося в этом.

18. Способ усиления репарации кости, предусматривающий стадии: введения субъекту эффективного количества клетки по п.3 и введения субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества эстрогена или агониста эстрогена, таким образом, усиливая репарацию кости у субъекта.

19. Способ по п.18, в котором данная клетка представляет собой мезенхимальную стволовую клетку, клетку-предшественника или клетку, способную дифференцироваться в остеобласт.

20. Способ поддержания или увеличения объема кости, качества кости или прочности кости у субъекта, нуждающегося в этом, пораженного остеопорозом, вызванным или сопровождаемым уменьшением уровня эстрогена, предусматривающий стадии введения вектора по п.2 и введения субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества эстрогена или агониста эстрогена, таким образом, поддерживая или увеличивая объем кости, качество кости или прочность кости у субъекта, нуждающегося в этом.

21. Способ поддержания или увеличения объема кости, качества кости или прочности кости у субъекта, нуждающегося в этом, пораженного остеопорозом, вызванным или сопровождаемым уменьшением уровня эстрогена, предусматривающий стадии: введения субъекту эффективного количества клетки по п.3 и введения субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества эстрогена или агониста эстрогена, таким образом, поддерживая или увеличивая объем кости, качество кости или прочность кости у субъекта, нуждающегося в этом.

22. Способ по п.21, в котором данная клетка представляет собой мезенхимальную стволовую клетку, клетку-предшественника или клетку, способную дифференцироваться в остеобласт.

23. Способ усиления репарации кости у субъекта, нуждающегося в этом, предусматривающий стадии: получения клетки от субъекта, трансфицирования клетки вектором по п.2, введения сконструированной клетки субъекту и введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества эстрогена или агониста эстрогена, таким образом, усиливая репарацию кости у субъекта, нуждающегося в этом.

24. Способ поддержания или увеличения объема кости, качества кости или прочности кости у субъекта, нуждающегося в этом, пораженного остеопорозом, вызванным или сопровождаемым уменьшением уровня эстрогена, предусматривающий стадии: получения клетки от субъекта, трансфицирования клетки вектором по п.2, введения сконструированной клетки субъекту и введения субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества эстрогена или агониста эстрогена, таким образом, поддерживая или увеличивая объем кости, качество кости или прочность кости у субъекта, нуждающегося в этом.

25. Способ по п.24, в котором стадия введения субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количество эстрогена или агониста эстрогена дополнительно увеличивает уровень экпрессированного BMP 2 в 1,5-30 раз.

26. Способ по п.24 в котором данная клетка представляет собой мезенхимальную стволовую клетку, клетку-предшественника или клетку, способную дифференцироваться в остеобласт.

27. Способ получения трансплантируемой матрицы кости, предусматривающий стадии: получения клетки, трансфицирования клетки вектором по п.2 и культивирования клетки со связанной с клеткой матрицей в течение времени, необходимого для формирования трансплантируемой матрицы кости.

28. Способ по п.27, в котором данная клетка представляет собой мезенхимальную стволовую клетку, клетку-предшественника или клетку, способную дифференцироваться в остеобласт.

29. Способ стимуляции дифференциации остеобласта, включающий стадии: введения вектора по п.2 и введения эффективного количества эстрогена или агониста эстрогена, таким образом, регулируя экспрессию стимуляции дифференциации остеобласта.

30. Способ лечения заболевания кости у субъекта, предусматривающий стадии введения вектора по п.2 и введения субъекту эффективного количества эстрогена или агониста эстрогена, таким образом, излечивая заболевание кости у субъекта.

31. Способ лечения заболевания кости у субъекта, предусматривающий стадии: введения субъекту эффективного количества клетки по п.3 и введения субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества эстрогена или агониста эстрогена, таким образом, излечивая заболевание кости у субъекта.

32. Способ по п.31, в котором данная клетка представляет собой мезенхимальную стволовую клетку, клетку-предшественника или клетку, способную дифференцироваться в остеобласт.

33. Способ идентификации соединения в образце в качестве агониста эстрогена, предусматривающий

(a) обеспечение линии клетки, экспрессирующей рецепторы для эстрогена человека, которую стабильно трансфицировали вектором, содержащим нуклеиновую кислоту-репортер, функционально связанную с выделенной нуклеиновой кислотой, соответствующей регуляторной области ВМР-2 или ее фрагменту, который содержит эстроген-чувствительный элемент, в котором указанный эстроген-чувствительный элемент может контролировать экспрессию нуклеиновой кислоты-репортера при реакции на эстроген;

(b) контакт трансфицированной линии клетки с образцом, который, как считается, содержит агонист эстрогена человека, в условиях, в которых эстроген человека мог бы вызвать увеличенную экспрессию нуклеиновой кислоты-репортера, и

(c) измерение уровня экспрессии нуклеиновой кислоты-репортера,

посредством чего агонист эстрогена человека в образце идентифицируют измерением увеличенного уровня экспрессии нуклеиновой кислоты-репортера по сравнению с уровнем, произведенным контролем в буфере.

34. Способ идентификации соединения в образце в качестве антагониста эстрогена человека, предусматривающий

(а) обеспечение линии клетки, экспрессирующей рецепторы для эстрогена человека, которую стабильно трансфицировали вектором, содержащим нуклеиновую кислоту-репортер, функционально связанную с выделенной нуклеиновой кислотой, соответствующей регуляторной области BMP-2 или ее фрагменту, который содержит эстроген-чувствительный элемент, в котором указанный эстроген-чувствительный элемент может контролировать экспрессию нуклеиновой кислоты-репортера при реакции на эстроген;

(b) контакт трансфицированной линии клетки с образцом, который, как считается, содержит антагонист эстрогена человека, к которому было добавлено некоторое количество эстрогена человека, такое, что отсутствие этого антагониста могло бы произвести измеримое увеличение в экспрессии нуклеиновой кислоты-репортера; и

(c) измерение уровня экспрессии нуклеиновой кислоты-репортера,

посредством чего антагонист эстрогена человека в образце идентифицируют измерением сниженного уровня экспрессии нуклеиновой кислоты-репортера по сравнению с уровнем, произведенным эстрогеном человека в отсутствии такого антагониста.