Варианты ксиланазы и кодирующие их полинуклеотиды - RU2019102941A
Код документа: RU2019102941A
Формула
1. Вариант ксиланазы, предусматривающий замену в одном или нескольких положениях, соответствующих положениям 24, 26, 36, 37, 60, 71, 74, 75, 76, 124, 133, 155, 167, 208, 317, и 321 SEQ ID NO: 1, где вариант ксиланазы обладает ксиланазной активностью, и где вариант ксиланазы характеризуется последовательностью, на по меньшей мере 60%, например, на по меньшей мере 65%, на по меньшей мере 70%, на по меньшей мере 75%, на по меньшей мере 80%, на по меньшей мере 85%, на по меньшей мере 90%, на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98% или на по меньшей мере 99%, но на менее чем 100% идентичной SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 или 6.
2. Вариант ксиланазы по п. 1, который характеризуется последовательностью, на по меньшей мере 60%, например, на по меньшей мере 65%, на по меньшей мере 70%, на по меньшей мере 75%, на по меньшей мере 80%, на по меньшей мере 85%, на по меньшей мере 90%, на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98% или на по меньшей мере 99%, но на менее чем 100% идентичной SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 и/или 6.
3. Вариант ксиланазы по любому из пп. 1-2, где замена выбрана из группы, состоящей из H24W, A26E, R36L, R36T, E37T, R60N, K71T, K71I, V74L, V74I, K75N, K75L, H76L, I155M, N167E, V208L, S317D и G321A.
4. Вариант ксиланазы по любому из пп. 1-3, который представляет собой вариант исходной ксиланазы, где исходная ксиланаза характеризуется последовательностью, на по меньшей мере 60%, например, на по меньшей мере 65%, на по меньшей мере 70%, на по меньшей мере 75%, на по меньшей мере 80%, на по меньшей мере 85%, на по меньшей мере 90%, на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98%, на по меньшей мере 99% или 100% идентичной SEQ ID NO: 1.
5. Вариант ксиланазы по любому из пп. 1-4, который характеризуется улучшенным свойством по сравнению с исходной формой, где улучшенное свойство выбрано из группы, состоящей из эффективности катализа, скорости катализа, химической стабильности, устойчивости к окислению, активности при определенных значениях pH, стабильности при определенных значениях pH, удельной активности, стабильности в условиях хранения, связывания субстрата, расщепления субстрата, субстратной специфичности, стабильности в присутствии субстрата, поверхностных свойств, активности при определенных значениях температуры и термостабильности.
6. Композиция, содержащая вариант ксиланазы по любому из пп. 1-5 и средство для составления.
7. Композиция по п. 6, дополнительно содержащая
один или несколько дополнительных ферментов;
один или несколько микроорганизмов и/или
материал на растительной основе.
8. Гранула, содержащая вариант ксиланазы по любому из пп. 1-5 и средство для составления.
9. Кормовая добавка для животных, содержащая вариант ксиланазы по любому из пп. 1-5, композицию по любому из пп. 6-7 или гранулу по п. 8 и один или несколько компонентов, выбранных из группы, состоящей из:
одного или нескольких витаминов;
одного или нескольких минералов;
одной или нескольких аминокислот;
одного или нескольких средств растительного происхождения;
одного или нескольких пребиотиков;
одной или нескольких органических кислот и
одного или нескольких других кормовых ингредиентов.
10. Жидкий состав, содержащий вариант ксиланазы по любому из пп. 1-5 и необязательно от 20% до 80% (вес/вес) полиола и/или от 0,01% до 2,0% (вес/вес) консерванта.
11. Жидкий состав по п. 10, дополнительно содержащий один или несколько компонентов, выбранных из перечня, состоящего из:
одного или нескольких ферментов;
одного или нескольких микроорганизмов;
одного или нескольких витаминов;
одного или нескольких минералов;
одной или нескольких аминокислот;
одного или нескольких средств растительного происхождения;
одного или нескольких пребиотиков;
одной или нескольких органических кислот и
одного или нескольких других кормовых ингредиентов.
12. Корм для животных, содержащий вариант ксиланазы по любому из пп. 1-5, композицию по любому из пп. 6-7, гранулу по п. 8, кормовую добавку для животных по п. 9 или жидкий состав по любому из пп. 10-11 и материал на растительной основе.
13. Способ улучшения одного или нескольких параметров продуктивности животного, включающий введение одному или нескольким животным варианта ксиланазы по любому из пп. 1-5, композиции по любому из пп. 6-7, гранулы по п. 8, кормовой добавки для животных по п. 9, жидкого состава по любому из пп. 10-11 или корма для животных по п. 12.
14. Способ солюбилизации ксилана из материала на растительной основе, включающий обработку материала на растительной основе с помощью варианта ксиланазы по любому из пп. 1-5, композиции по любому из пп. 6-7, гранулы по п. 8, кормовой добавки для животных по п. 9 или жидкого состава по любому из пп. 10-11.
15. Способ высвобождения крахмала из материала на растительной основе, включающий обработку материала на растительной основе с помощью варианта ксиланазы по любому из пп. 1-5, композиции по любому из пп. 6-7, гранулы по п. 8, кормовой добавки для животных по п. 9 или жидкого состава по любому из пп. 10-11.
16. Способ улучшения пищевой ценности корма для животных, включающий добавление к корму, содержащему материал на растительной основе, варианта ксиланазы по любому из пп. 1-5, композиции по любому из пп. 6-7, гранулы по п. 8, кормовой добавки для животных по п. 9 или жидкого состава по любому из пп. 10-11.
17. Применение варианта ксиланазы по любому из пп 1-5, композиции по любому из пп. 6-7, гранулы по п. 8, кормовой добавки для животных по п. 9, жидкого состава по любому из пп. 10-11 или корма для животных по п. 12:
в корме для животных;
в кормовых добавках для животных;
при получении композиции для применения в корме для животных;
для улучшения пищевой ценности корма для животных;
для повышения усвояемости корма для животных;
для улучшения одного или нескольких параметров продуктивности у животного;
для солюбилизации ксилана из материала на растительной основе;
для высвобождения крахмала из материала на растительной основе.
18. Способ получения продукта ферментации, включающий следующие стадии:
(a) осахаривание крахмалсодержащего материала при температуре ниже начальной температуры клейстеризации с применением альфа-амилазы, глюкоамилазы и варианта ксиланазы по любому из пп. 1-5; и
(b) ферментирование с применением ферментирующего организма.
19. Способ получения теста или выпеченного продукта, приготовленного из теста, который включает введение в тесто варианта ксиланазы по любому из пп. 1-5.
20. Выделенный полинуклеотид, кодирующий вариант ксиланазы по любому из пп. 1-5, где полинуклеотид функционально связан с одной или несколькими регуляторными последовательностями, которые управляют продуцированием варианта ксиланазы в рекомбинантной клетке-хозяине.
21. Конструкция на основе нуклеиновой кислоты или вектор экспрессии, содержащие полинуклеотид по п. 20.
22. Рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая конструкцию на основе нуклеиновой кислоты или вектор экспрессии по п. 21.
23. Способ получения варианта ксиланазы, включающий:
(a) культивирование клетки-хозяина по п. 22 в условиях, подходящих для экспрессии варианта ксиланазы; и
(b) выделение варианта ксиланазы.
24. Способ получения варианта ксиланазы, включающий введение в исходную ксиланазу замены в одном или нескольких положениях, соответствующих положениям 24, 26, 36, 37, 60, 71, 74, 75, 76, 124, 133, 155, 167, 208, 317, и 321 SEQ ID NO: 1, где вариант обладает ксиланазной активностью; и выделение варианта ксиланазы.
25. Способ по п. 24, где вариант характеризуется по меньшей мере 70% идентичностью, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 85%, еще более предпочтительно по меньшей мере 90% или наиболее предпочтительно по меньшей мере 95% идентичностью SEQ ID NO: 1.
26. Способ по любому из пп. 24-25, где вариант ксиланазы характеризуется улучшенным свойством по сравнению с исходной формой, где улучшенное свойство выбрано из группы, состоящей из эффективности катализа, скорости катализа, химической стабильности, устойчивости к окислению, активности при определенных значениях pH, стабильности при определенных значениях pH, удельной активности, стабильности в условиях хранения, связывания субстрата, расщепления субстрата, субстратной специфичности, стабильности в присутствии субстрата, поверхностных свойств, активности при определенных значениях температуры и термостабильности.
27. Способ по любому из пп. 24-26, где исходная ксиланаза характеризуется по меньшей мере 70% идентичностью, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 85%, еще более предпочтительно по меньшей мере 90% или наиболее предпочтительно по меньшей мере 95% идентичностью SEQ ID NO: 1.
28. Способ по любому из пп. 24-27, где замена выбрана из группы, состоящей из H24W, A26E, R36L, R36T, E37T, R60N, K71T, K71I, V74L, V74I, K75N, K75L, H76L, I155M, N167E, V208L, S317D и G321A.
29. Вариант ксиланазы, полученный с помощью способа по любому из пп. 24-28.
