Реферат
Изобретение относится к области медицины и касается способа усиления иммунного ответа при вакцинации нуклеиновой кислотой. Сущность
изобретения включает композицию для совместной доставки в клетку нуклеиновой кислоты и вспомогательного белка, содержащую везикулы, нуклеиновую кислоту и белок, где нуклеиновая кислота функционально
кодирует антигенный белок или его часть, имеющие, по меньшей мере, один общий эпитоп со вспомогательным белком, причем композиция содержит нуклеиновую кислоту и вспомогательный белок, ассоциированными
с одними и теми же везикулами. Предпочтительная форма осуществления представляет собой композицию, которая содержит липосомы, сформированные из липосомообразующих материалов, и ассоциированную с
липосомами нуклеиновую кислоту. Изобретение также включает способ формирования у животного иммунного ответа посредством введения указанной композиции, а также способ формирования липосомной
композиции. Преимущество изобретения заключается в разработке композиции, применяемой в качестве вакцины, 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 15 табл., 10 ил.
Формула
1. Композиция для совместной доставки в клетку нуклеиновой кислоты и вспомогательного белка, содержащая везикулы, представляющие собой липосомы, образованные из липосомообразующих
материалов, представляющих собой амфифильные компоненты, включающие, по меньшей мере, один положительно заряженный катионный компонент в количестве, достаточном для того, чтобы везикулы имели общий
положительный заряд, причем нуклеиновая кислота представляет собой плазмидную ДНК, которая функционально кодирует антигенный белок или его часть, который (которая) имеет, по меньшей мере, один общий
эпитоп со вспомогательным белком, при этом антигенный белок и вспомогательный белок получены из инфекционного микроорганизма, а композиция содержит нуклеиновую кислоту и вспомогательный белок,
ассоциированные с одними и теми же везикулами, в которых, по меньшей мере, часть нуклеиновой кислоты упакована во внутривезикулярном пространстве липосомы, а, по меньшей мере, часть вспомогательного
белка доступна на внешней поверхности липосомы.
2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что катионный компонент выбран из 1,
2-бис(олеоилокси)-3-(триметиламмонио)пропана (DOTAP), 1,2-бис(гексадецилокси)-3-триметиламинопропана (BisHOP), β-[1-(2,3-диолеилокси)пропил]-N,N,N-триэтиламмонийхлорида (DOTMA) и 3β
-(N′N′-диметиламиноэтан)карбамил холестерина (DC-Chol).
3. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что нуклеиновая кислота в ней содержит
более одной молекулы, каждая из которых кодирует свой антигенный белок, и в которой вспомогательный белок включает соответствующие белки, имеющие общие эпитопы с каждым таким антигенным
белком.
4. Композиция по п.3, отличающаяся тем, что молекулы нуклеиновой кислоты ассоциированы с одной и той же везикулой.
5. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что антигенный белок и вспомогательный белок получены из вируса.
6. Композиция по п.5,
отличающаяся тем, что антигенный белок и вспомогательный белок получены из вируса гриппа.
7. Композиция по п.5, отличающаяся тем, что она является
вакциной.
8. Композиция по п.7, отличающаяся тем, что она приспособлена для подкожного введения.
9.
Композиция по п.2, отличающаяся тем, что антигенный белок и вспомогательный белок получены из вируса.
10. Способ формирования у животного иммунного
ответа, включающего ответ с образованием антител, специфичных к антигенному белку и/или к вспомогательному белку, путем введения животному композиции по п.1.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что иммунный ответ включает стимуляцию цитотоксичных Т-лимфоцитов.
12. Способ по п.10, отличающийся
тем, что вызывает иммунитет против заражений инфекционным агентом.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что инфекционный агент представляет собой
вирус.
14. Способ формирования липосомной композиции для совместной доставки в клетку нуклеиновой кислоты и вспомогательного белка, включающий следующие
этапы:
(a) получение водной суспензии мелких однослойных везикул, сформированных из липосомообразующих материалов, представляющих собой амфифильные компоненты, включающие, по
меньшей мере, одно катионное соединение, причем везикулы имеют суммарный положительный заряд;
(b) приведение водной суспензии мелких однослойных везикул в контакт с нуклеиновой
кислотой, функционально кодирующей антигенный белок и полученной из инфекционного микроорганизма, с получением суспензии "мелкие однослойные везикулы-нуклеиновая кислота";
(c)
дегидратирование суспензии "мелкие однослойные везикулы-нуклеиновая кислота" путем высушивания из замороженного состояния с получением дегидратированной смеси; и
(d)
регидратацию дегидратированной смеси в водной среде для ресуспендирования с образованием суспензии липосом, содержащих нуклеиновую кислоту,
включая этап введения
вспомогательного белка, имеющего, по меньшей мере, один общий эпитоп с антигенным белком, и полученного из инфекционного микроорганизма, причем вспомогательный белок приводится в контакт с водной
суспензией мелких однослойных везикул до, в ходе или после этапа (b) и до этапа (с), посредством чего содержащие нуклеиновую кислоту липосомы ассоциируются со вспомогательным белком.
15. Способ по п.14, отличающийся тем, что липосомообразующие материалы содержат, по меньшей мере, один фосфолипид и, по меньшей мере, один стерол.
