Код документа: RU2104281C1
Изобретение относится к способу выделения сеннозидов A, B и A1, которые в основном свободны от сеннозидов C, D и D1 и алоэ-амодиновых компонентов, а также к получаемым по этому способу сеннозидам и фармацевтическим средствам, которые содержат эти сеннозиды.
Сеннозиды представляют собой слабительно действующие вещества, которые находятся в высушенных лекарственных растениях родов Cassia и Rheum. Высушенное лекарственное сырье сенна состоит из высушенных листьев и стручков растений сенны, например, индийской сенны (Cassia acutifolia).
Слабительно действующие сеннозиды представляют собой производные
диантронглюкозиды реина и алоэ-амодина. Важнейшими являются сеннозиды A, B, C, D и D1. Они соответствуют формуле
Сырое лекарственное сырье содержит наряду с сеннозидами также агликоны (сеннидины), полугликозидированные сеннидины, полимеры, продукты разложения сеннозидов, алоэ-эмодин и его производные и т.д., которые могут вызывать нежелательные побочные действия, как недомогания, рвота, вздутия и колики.
Способ выделения сеннозидов из высушенных лекарственных растений сенны описаны, например, в пат. ФРГ B-16 30 H 203 17 667, пат.
Франции M-6611, пат. Великобритании A-832017 81(1)B и пат. ФРГ A-3 200 131 C 07 H 15/24. Выделенные согласно этим известным способам сеннозиды содержат, каждый в зависимости от лекарственного сырья,
смесь сеннозидов с 1,5-5% сеннозидов C, D и D1. Как уже указывалось выше, они содержат в соей молекуле производную часть алоэ-эмодина формулы
Полное в основном отделение сеннозидов C, D и D1 от смеси сеннозидов согласно уровню техники на настоящий момент неизвестно.
Поэтому цель изобретения - разработка способа выделения сеннозидов A, B и A1, которые в основном свободны от нежелательных примесей, в частности, сеннозидов C, D и D1.
Цель достигнута способом,
который
отличается тем, что
а) смесь сеннозидов подвергают восстановлению до реин-9-антрон-глюкозида;
б) осуществляют жидкостно-жидкостное распределение полученных соединений между
только
частично смешивающимся с водой, полярным органическим растворителем и водной фазой и
в) содержащийся после распределения в водной фазе реин-9-антрон-8-глюкозид окисляют до сеннозидов
A, B и
A1 и его выделяют.
Стадия А.
В качестве исходного материала для способа согласно изобретению в общем используются смеси сеннозидов, которые образуются при экстракции лекарственных растений сенны по вышеупомянутым способам. Например, в качестве исходного материала пригодна смесь сеннозидов, которая получается по описанному в пат. ФРГ А-32 00 131 способу. Затем сначала экстрагируют лекарственные растения сенны водным метанолом. Остающийся после полного удаления метанола концентрат содержит сеннозиды в форме калиевой соли. Этот концентрат можно использовать в качестве исходного материала для предлагаемого в изобретении способа.
Концентрат можно еще очистить путем жидкостно-жидкостной экстракции с помощью частично растворимых в воде спиртов или кетонов (например, бутанол-2, 2-бутанон, ацетон) (рафинат). Рафинат подкисляют до pH примерно 1,5-2,0 и сеннозиды доводят до кристаллизации при внесении затравки. Полученная смесь сырых сеннозидов также пригодна в качестве исходного продукта для способа согласно изобретению. При желании смесь сырых сеннозидов также еще можно перекристаллизовать.
Альтернативно можно применять смешанный с частично растворимым в воде спиртом или кетоном, в частности, бутанолом-2, концентрат в качестве исходного материала.
При экстракции лекарственных растений сенны соотношение лекарственного сырья к растворителю для экстракции составляет предпочтительно 1:4 - 1:15, в особенности 1:4 - 1:10.
Экстракцию осуществляют предпочтительно в присутствии буфера, например, тринатрийцитрата, глицина, бикарбоната натрия или сахарозы.
Согласно предлагаемому в изобретении способу эти исходные материалы
подвергают полному
восстановлению до соответствующего реин-9-антрон-8-глюкозида (R = COOH) и соответствующего алоэ-эмодин-9-антрон-8-глюкозида (R = CH2OH) формулы
Для проведения восстановления исходный материал может быть представлен в водном растворе или суспензии и восстановитель добавляют в твердой форме или растворенным в воде. Возможно также, в частности, при применении первичного экстракта плодов сенны работать в двухфазной смеси согласно DE-A-3200131 (= водный концентрат) таким образом, что добавляют частично смешивающийся с водой полярный органический растворитель, в частности, 2-бутанол или ацетон.
Восстановление можно проводить при температуре окружающей среды или при повышенной температуре. Восстановление целесообразнее осуществлять при 40-60oC, в частности, при 50-55oC. Работают при слабокислом, вплоть до слабощелочного pH-значении исходного раствора сеннозидов, соответственно суспензии сеннозидов, предпочтительно при pH-значении 5-10,5. При желании можно осуществлять восстановление многократно, в частности, 2-10 раз.
Образовавшиеся 9-антрон-8-глюкозиды осаждают путем добавки кислоты, например, серной кислоты, вплоть до примерно pH-значения 2-4,5. При этом температура целесообразнее должна составлять не более, чем 40oC. Целесообразнее работать при осаждении антронглюкозидов и при их выделении (например, путем фильтрации) в атмосфере азота, чтобы избежать неконтролируемого окисления этих соединений.
Существенно, чтобы восстановление протекало полностью. Целесообразнее поэтому применять восстановитель в большом избытке. Дитиониты, в особенности дитионит натрия, применяют в общем в 1-4-х-кратном весовом количестве, в расчете на содержание в исходном материале сеннозидов. Кроме того, восстановителем можно воздействовать минимально 2 ч, предпочтительно минимально 3 ч. В общем восстановление осуществляют не больше, чем 10 ч. Предпочтительно проводят дополнительное восстановление в указанных условиях.
Полученный продукт перед его введением в стадию В предпочтительно переосаждают тем, что его растворяют в водном растворе за счет добавки основания (NaOH, KOH) примерно вплоть до pH-значения 6-7, водный раствор экстрагируют 2-бутанолом, 2-бутаноном или ацетоном и продукт снова осаждают за счет добавки кислоты вплоть до pH-значения 2-4.
Стадия Б.
В этой стадии удаляют алоэ-эмодиновые компоненты, в частности, алоэ-эмодин-9-антрон-8-глюкозид. Для этой цели осуществляют жидкостно-жидкостную экстракцию полученного продукта путем распределения между только частично смешивающимся с водой полярным органическим растворителем и водной фазой. Пригодными полярными органическими растворителями являются C4 -C5-спирты и ди-C1-C3 -алкилкетоны, такие как 1-бутанол, 2-бутанол, 2-бутанон и ацетон. Предпочтительно применяют 2-бутанол или ацетон.
Предпочтительно добавляют к водной фазе восстановитель, чтобы придать водной фазе во время всей жидкостно-жидкостной экстракции редокс-потенциал-210 mV или отрицательнее. Целесообразнее применять тот же восстановитель, что и в стадии А. При применении дитионита щелочного металла в качестве восстановителя в общем достаточно 2-4 мас.%-ного раствора при pH-значении 7-10,5, чтобы соблюдать упомянутые условия потенциала. pH-значения целесообразнее поддерживать в этой области путем добавки буфера.
Объемное соотношение водной фазы (тяжелая фаза) к органической фазе (легкая фаза) составляет в общем величину в области 1:5 - 1:40.
Предпочтительно осуществляют жидкостно-жидкостную экстракцию противотоком. Смесь антроновых соединений при этом подают в форме полученного после восстановления раствора или, если антроновые соединения выделяются, в форме 3-15 мас.%-ного раствора.
После экстракции желательный реин-9-антрон-8-глюкозид находится в водной фазе. Его осаждают путем кислоты вплоть до pH-значения примерно 2-4 и получают обычным образом.
Стадия B.
В этой стадии реин-9-антрон-8-глюкозид снова окисляют до соответствующих сеннозидных соединений. Пригодными окислителями для этой цели являются пероксид водорода, диоксид марганца, перманганат, ацетонилацетонат марганца-III.
Однако предпочтительно окисление осуществляют с помощью кислорода. В качестве источника кислорода может служить, например, воздух.
Так как реин-9-антрон-8-глюкозид нерастворим в воде, его для окисления переводят в растворимую форму. Это осуществляется, например, благодаря тому, что за счет добавки пригодного основания вплоть до pH-значения примерно 6-7 его переводят в соль щелочного металла или в кальциевую соль. В желательном случае можно добавлять в раствор небольшое количество (вплоть до примерно 30 об. %) только частично смешивающегося с водой растворителя, в особенности 2-бутанола.
Окисление осуществляют в по-возможности концентрированном растворе, так как таким образом благоприятствуют образованию желательных сеннозидов. Целесообразнее проводить окисление с помощью раствора, который содержит примерно 250-300 г реин-9-антрон-8-глюкозида на литр растворителя. При применении кислорода в качестве окислителя целесообразнее пропускать его через раствор.
Окисление кислородом можно облегчать за счет применения катализатора. Пригодными катализаторами являются, например, палладиевая чернь или соль железа-III, в особенности хлорид железа-III. Количество катализатора в общем составляет величину в пределах 0,2-2 мас.% в расчете на количество реин-9-антрон-8-глюкозида и в особенности в области 0,5-1 мас.%.
Альтернативно окисление можно осуществлять с помощью солей железа-III, например, Fe2(SO4)3 или FeCl3, при pH-значении 8-8,5. Предпочтительно при этом работают при 30-50oC и в присутствии тринатрийцитрата.
Окисление осуществляют до тех пор, пока более не будет обнаруживаться никакого реин-9-антрон-8-глюкозида. (Отсутствие УФ-флуоресценции антроновых соединений).
Сеннозиды получают обычным образом путем подкисления полученного раствора. Целесообразно разбавлять раствор перед добавкой кислоты с помощью подходящего растворителя (например, вода/2-бутанол) до 2-3-х-кратного имеющегося объема. Таким образом, достигают того, что образующийся в качестве побочного продукта реин-8-глюкозид при осаждении сеннозидов далее переходит в раствор.
Отделение реин-8-глюкозида также можно осуществлять через кальциевые соли, так как кальциевая соль реин-8-глюкозида нерастворима и, осаждается, тогда как кальциевая соль сеннозидов остается в растворе.
Сеннозиды осаждают путем добавки кислоты вплоть до pH-значения примерно 2-4 и затем получают обычным образом.
В случае полученных сеннозидов речь идет по существу о сеннозидах A, В и A1. Они по существу лишены сеннозидов C, D и D1 и других алоэ-эмодиновых примесей. Содержание сеннозидов C, D и D1 в получаемом согласно изобретению продукте составляет менее, чем 100 ppm (определено согласно указанному в примерах методу анализа).
Изобретение относится также к получаемой согласно изобретению смеси сеннозидов А, В и А1, а также к фармакологическому средству, которое содержит упомянутую смесь.
Область применения, используемая доза и пригодные дозировочные формы известны из упомянутых вначале публикаций.
Пример 1. Получение используемой в качестве исходного материала смеси сеннозидов. В соединенные в ряд два перколятора объемом 250 л помещают, смотря по обстоятельствам, 40 кг высушенных лекарственных растений сенны и покрывают их перфорированной стальной плитой. В качестве растворителя для экстракции применяют 70%-ный метанол, который вводится на высушенное лекарственное сырье в первый перколятор. Образовавшийся в первом перколяторе раствор направляют на лекарственное сырье, которое находится во втором перколяторе. При этом растворитель может свободно протекать через первый перколятор. Для экстракции 40 кг высушенных лекарственных растений сенны применяют в целом 160 л растворителя. После того как этот объем 70%-ного метанола пропускают через оба перколятора и получают соответствующее количество перколята, выпускной шланг перколятора соединяют с дополнительной емкостью для перколята и через перколяторы пропускают еще дополнительно 60 л 70%-ного метанола. После этого остаточный свободный растворитель из первого перколятора вводят в верхнюю часть второго перколятора и собирают дополнительный перколят до тех пор, пока в целом он не составит 120 л. Затем опорожняют первый перколятор, заполняют его снова 40 кг лекарственного сырья сенны и дополнительный перколят перекачивают на высушенные лекарственные растения, причем достаточно 120 л дополнительного перколята, чтобы покрыть высушенное лекарственное сырье в перколяторе. Затем доводят температуру раствора до +30oC. После этого оставляют стоять в течение ночи. Соединяют этот перколятор с прежде используемым для экстракции перколятором и осуществляют экстракцию, как описано выше. Смотря по обстоятельствам, из 40 кг высушенных лекарственных растений получают 160 л перколятора, из которого удаляют метанол на ротационном вакуумном испарителе, который снабжен колонкой с наполнителем. Получают примерно 30 л продукта. Этот концентрат экстрагируют с помощью такого же объема 2-бутанола, который насыщен водой. Фазы разделяют, и водную фазу перерабатывают далее.
Стадия А. Восстановление сеннозидов до реин-9-антрон-8-глюкозидов.
1,0 л проэкстрагированного концентрата доводят до pH-значения = 7,5 с помощью 48%-ного раствора гидроксида натрия. Нагревают до 60oC и при перемешивании в течение получаса в раствор добавляют 90 г дитионита натрия в твердой форме. После окончания добавления перемешивают следующий час. Затем при перемешивании добавляют концентрированную серную кислоту вплоть до pH-значения 2. В течение двух часов охлаждают до температуры окружающей среды, фильтруют выделившийся кристаллический осадок и промывают его содержащей диоксид серы водой.
В случае необходимости сырой реин-9-антрон-8-глюкозид переосаждают. Еще влажный осадок на фильтре растворяют в смеси 15 об. ч. 2-бутанола и 85 об. ч. воды, которая содержит 0,5 мас.% пиросульфита натрия, так чтобы благодаря добавке 48%-ного раствора гидроксида натрия вплоть до pH-значения = 7 получался 10%-ный раствор (вес/объем). Раствор подкисляют с помощью концентрированной соляной кислоты вплоть до pH-значения 2,8 или ниже и оставляют стоять в течение 2 ч. Выпавший осадок фильтруют и промывают содержащей диоксид серы или пиросульфит натрия водой и высушивают. Выход 90 %.
Для полученного таким образом продукта проводят новое восстановление (дополнительное восстановление) следующим образом.
3,0 г сырого высушенного реин-9-антрон-8-глюкозида или соответствующее количество влажного продукта вместе с 1,4 г дитионита натрия и 2,3 мл 5н NaOH растворяют в 15 мл воды. Затем доливают водой до 24 мл и нагревают раствор в течение 20 мин при 55oC. После этого добавляют следующие 1,5 г дитионита натрия в раствор и нагревают 20 мин при 55oC. Затем добавляют 0,9 мл 5 н NaOH и 1,5 г дитионита натрия. После нагревания в течение 20 мин при 55oC добавляют еще раз 0,9 мл NaOH. Полученный раствор вводят прямо в последующую жидкостно-жидкостную экстракцию.
Стадия Б. Отделение алоэ-эмодиновых компонентов.
Отделение алоэ-эмодиновых компонентов осуществляют путем жидкостно-жидкостной экстракции 9-антрон-8-глюкозидов в противотоке с помощью аппаратуры из 60 единиц смеситель-сепаратор (Mixer-Settler - аппаратура). В качестве водной, более тяжелой фазы применяют раствор 3,0 г дитионита натрия в 3,5 мл 5н NaOH и 96 мл воды. В качестве органической, более легкой фазы применяют (насыщенный водой) 2-бутанол или ацетон. Обе фазы пропускают через аппаратуру так, чтобы объемное соотношение более тяжелой фазы к более легкой фазе составило 1:10.
Разделяемую смесь вводят в аппаратуру в виде свежевосстановленного раствора или в форме раствора с соответствующим pH-значением и соответствующей концентрации, которые содержат полученные из стадии А 9-антрон-8-глюкозиды, а именно так, что на объемную часть разделяемой смеси используются 30 об. ч. органической фазы.
pH-значения содержащего смесь раствора поддерживают с помощью глицинового буфера при 9-9,5. Буфер из 3 об. ч. 7,5%-ного раствора глицина, 1 об. ч. 1 н NaOH добавляют в количестве 240 мл буферного раствора на 150 г сырого реин-9-антрон-8-глюкозида. Нежелательные алоэ-эмодиновые соединения обогащают органическую фазу, в то время как реин-9-антрон-8-глюкозид остается в водной фазе. Водную фазу подкисляют серной кислотой вплоть до pH-значения, равного 2,8; образовавшийся осадок фильтруют и промывают водой и ацетоном и высушивают на воздухе при температуре окружающей среды. Получают таким образом реин-9-антрон-8-глюкозид с содержанием алоэ-эмодиновых компонентов 49 ppm (определено в виде алоэ-эмодина). Выход 97 % в расчете на реин-9-антрон-8-глюкозид.
Стадия B. Окисление реин-9-антрон-8-глюкозидов.
18,8 г полученного реин-9-антрон-8-глюкозида растворяют в 56 мл воды и 11 мл 2-бутанола, причем добавляют 17 н NaOH вплоть до pH-значения 6,5. Через этот раствор в цилиндрообразном сосуде со стеклянной фриттой в течение 5 ч при перемешивали продувают воздух. Скорость потока воздуха составляет 40 мл/мин. За ходом окисления следят с помощью жидкостной хроматографии высокого давления (ЖХВД).
Если более не обнаруживают никакого реин-9-антрон-8-глюкозида, раствор разбавляют примерно до 200 мл смесью воды с бутанолом в соотношении 56/11. Добавляют концентрированную соляную кислоту вплоть до pH-значения = 1,5-2,0, перемешивают 2 ч при температуре окружающей среды, фильруют выделившиеся кристаллы и промывают их водой и ацетоном, высушивают. Получают 14,4 г (76 %) чистой смеси сеннозидов с содержанием 41 ppm алоэ-эмодиновых компонентов (определено в виде алоэ-эмодина) согласно указанному в стадии В, пример 2, способу анализа.
Пример 2. Повторяют описанный в примере 1 способ, причем, однако, окисление в
стадии В осуществляют следующим
образом. 150 г чистых реин-9-антрон-8-глюкозидов и 75 г гексагидрата хлорида железа-III растворяют в 480 мл воды и 120 мл 2-бутанола. Добавляют 48%-ный раствор
гидроксида натрия вплоть до достижения
pH = 6,5, и реин-9-антрон-8-глюкозид растворяется. Раствор вносят в сосуд с агломерированной на дне пластиной. Затем через раствор пропускают интенсивный ток
воздуха. Окисление заканчивается спустя
примерно 30 мин. После этого раствор разбавляют смесью из 120 мл 2-бутанола и 480 мл воды, добавляют 7,5 г дитионита натрия и устанавливают pH-значение раствора
= 2,0 за счет добавки
концентрированной соляной кислоты. Раствор перемешивают 18 ч. Затем фильтруют выпавший осадок, промывают 600 мл воды и 800 мл ацетона и высушивают. Содержание в продукте
антроноидных соединений
составляет 94-95%. Продукт растворяют в 200 мл 2-бутанола и доливают 800 мл воды при добавлении 5,5 г пиросульфита натрия. После фильтровывания и высушивания выпавшего осадка
получают 95,4 г продукта
из антроноидных соединений состава (согласно ЖХВД, анализ типичного опыта), %:
Реин-8-глюкозид - 1,5
Cеннозид B - 49,7
Сеннозид A1 - 13,
3
Сеннозид A
- 33,6
Сеннидин-моноглюкозиды - 1,1
Реин - 0,02
Итого - 99,22%
Сеннозиды C и D алоэ-эмодин-глюкозид нельзя более обнаружить с помощью ЖХВД.
Общее содержание
алоэ-эмодина и его производных определяют до 30 ppm согласно следующему методу. Сеннозиды C,D и алоэ-эмодин-8-глюкозид более не могут достоверно определяться в области ppm с помощью
ЖХВД-хроматографии как сеннозиды. Поэтому необходимо исследуемые вещества путем окисления с помощью хлорида железа-III при одновременном гидролизе с помощью соляной кислоты в двухфазной смеси из
водного раствора и четыреххлористого углерода переводить в реин, соответственно, алоэ-эмодин. Реин затем переводят в соль, так что его можно экстрагировать из водной фазы, а алоэ-эмодин можно
определять в органической фазе с помощью ЖХВД. Таким образом, можно указать общее содержание сеннозидов C, D и алоэ-амодин-8-глюкозидов и других алоэ-эмодиновых компонентов, выраженных в виде
алоэ-эмодинов.
Пример 3. Повторяют описанную в примере 1 экстракцию высушенных лекарственных растений сенны и восстановление сеннозидов. Дополнительное восстановление тогда осуществляют следующим образом. 14,0 г сахарозы, 4,5 г дитионита натрия (85%) и 13,3 г ацетата калия растворяют в 133 мл воды и добавляют 1,3 мл 48%-ного раствора гидроксида натрия и 17,3 г карбоната калия. Затем смешивают с 293 мл ацетона и 50 мл воды. Смесь встряхивают в делительной воронке и фазы разделяют, причем получают 375 мл верхней фазы (ацетоновая фаза) и 130 мл нижней фазы. В 98 мл нижней фазы растворяют 1,4 мл 48%-ного раствора гидроксида натрия и 10 г сырого реин-9-антрон-8-глюкозида. Нагревают до 45-50oC и выдерживают в течение 20-30 мин при этой температуре. Затем добавляют 160 мл 48%-ного раствора гидроксида натрия и 3,4 г дитионита натрия и нагревают следующие 20-30 мин при 45-50oC. После этого снова добавляют 1,0 мл 48%-ного раствора гидроксида натрия и 3,4 г дитионита натрия и нагревают 20-30 мин при 45-50oC. Отделение алоэ-эмодиновых компонентов осуществляют путем жидкостно-жидкостной экстракции восстановленного раствора противотоком к вышеупомянутой верхней фазе (ацетоновая фаза). Вытекающая, содержащая реин-9-антрон-8-глюкозид рафинатная фаза концентрируется до объема 400 мл и смешивается с 20 мл 2-бутанола или ацетона. Добавляют соляную кислоту или серную кислоту вплоть до pH-значения 4,0-4,2. Образовавшийся осадок фильтруют, промывают 40 мл воды и 30 мл ацетона и затем высушивают. Последнее окисление проводят, как описано в примере 2.
Пример 4. Полученный после экстракции высушенных лекарственных растений сенны концентрат смешивают примерно с 2 л бутанола-2. Восстановление смеси концентрата плодов сенны с бутанолом-2 осуществляют затем в 7 стадий в атмосфере азота в качестве защитного газа. После стадии восстановления 1 осуществляют осаждение реин-9-антронов-8-глюкозида.
Стадия восстановления I.
100 л смеси концентрата плодов сенны с бутанолом-2, содержащей примерно 4 кг сеннозидов, помещают в сосуд с перемешиванием и устанавливают атмосферу азота. При перемешивании последовательно добавляют 6 л 20%-ного (по весу) раствора гидроксида натрия, затем 350 л насыщенного водой бутанола-2 (например, из стадии II) и перемешивают в течение 15 мин. Смесь нагревают до 42-50oC и смешивают с 7 кг дитионита натрия. Перемешивают еще 45 мин. pH-значение поддерживают равным 7,5-8,0 с помощью 20 мас.%-ного раствора гидроксида натрия. Восстановительный потенциал (против Ag/AgCl-электрода) в случае необходимости поддерживают ниже - 630 mV за счет добавки дитионита натрия. После охлаждения до 30-35oC осаждают с помощью 10 мас.%-ного раствора серной кислоты вплоть до pH < 4 в течение 1,5 ч. Образовавшуюся суспензию перемешивают при маленькой скорости мешалки примерно в течение 10 ч при < 25oC. Образовавшийся осадок фильтруют. Осадок суспендируют в 60 л 15%-ного (по весу) бутанола-2, перемешивают 30 мин при 50-60oC и затем фильтруют. Осадок промывают с помощью 100 л деминерализованной воды. Сырой выход реин-9-антрон-8-глюкозида в расчете на используемые сеннозиды составляет более 82%.
Стадия восстановления II.
3,3 кг сырого реин-9-антрон-8-глюкозида из стадии I суспендируют в смеси из 42 л деминерализованной воды и 764 л бутанола-2. С помощью 2 л 20 мас. %-ного раствора гидроксида натрия и 9,9 кг тринатрийцитрата суспензию переводят в раствор и затем смешивают с 3,3 кг дитионита натрия и 350 л насыщенного водой бутанола-2 (например, из стадии III). Смесь нагревают до 42-45oC, pH-значение поддерживают при 8,5-9 с помощью 20 мас.%-ного раствора гидроксида натрия. Восстановительный потенциал (против Ag/AgCl-электрода) в случае необходимости поддерживают ниже - 750 mV за счет добавки дитиннита натрия. После времени выдерживания 30 мин верхнюю фазу удаляют, а нижнюю фазу перерабатывают далее в стадии III.
Стадия восстановления III.
При
использовании
нижней фазы из стадии II при добавке химикалиев повторяют описанный в стадии II восстановительно-экстракционный способ:
1,65 кг дитионита натрия,
0,8 л 20 мас.%-ного
раствора
гидроксида натрия,
350 л насыщенного бутанола-2 (например, из стадии IV).
Стадия восстановления IV-VII.
При использовании нижней фазы из предыдущей
стадии,
смотря по обстоятельствам, при добавке следующих химикалиев повторяют описанный в стадии II восстановительно-экстракционный способ:
0,825 кг дитионита натрия,
0,4 л 20
мас.%-ного
раствора гидроксида натрия,
350 л насыщенного бутанола-2 (например, из одной из последующих стадий - принцип противотока).
Отдельную в стадии VII нижнюю фазу охлаждают до 30-35oC и осаждают реин-9-антрон-8-глюкозид, как описано в стадии I. Образовавшийся осадок фильтруют и промывают с помощью 100 л деминерализованной воды. Затем заливают 10 л раствора сульфата железа III (28 кг Fe2(SO4)3 в 100 л деминеральзованной воды).
Реин-9-антрон-8-глюкозид затем переводят в сеннозиды, как описано в примере 1 или примере 2.
Пример 5.
Окисление реин-9-антрон-8-глюкозида можно осуществлять также следующим образом. 6,0 кг влажного после отфильтрования реин-9-антрон-8-глюкозида смешивают с 12,6 кг тринатрийцитрата. Эту смесь при интенсивном перемешивании растворяют в 7,0 л 1 н NaOH и смешивают с 0,7 л бутанола-2. После этого смешивают с 8,8 л раствора сульфата железа III (28 кг Fe2(SO4)3 в 100 л деминерализованной воды) и с таким количеством 20%-ного NaOH, чтобы pH-значение составило примерно 8,3. Оставляют реагировать в течение 3-4 ч примерно при 40oC, затем подкисляют с помощью 52 %-ной серной кислоты до pH-значения = 1,8-2,0 и обрабатывают, как описано в примере I.
Пример 6. Альтернативно реин-9-антрон-8-глюкозид растворяют в 50 л воды благодаря добавке раствора гидроксида кальция с сахарозой (получен путем суспендирования 7,0 г гидроксида кальция в растворе 30,0 г сахарозы в 100 мл воды и путем удаления нерастворившегося гидроксида кальция). Добавляют 20 мл бутанола-2 и в течение 90 мин пропускают интенсивный ток воздуха через раствор. Добавляют 5,0 г CaCl2• 2H2O и устанавливают pH-значение = 8,5 с помощью раствора сахарозы с гидроксидом кальция. Образовавшийся осадок фильтруют, и фильтрат разбавляют водой до 340 мл, смешивают с 60 мл бутанола-2 и с помощью концентрированной соляной кислоты доводят до pH-значения = 2,0. Дальнейшую обработку осуществляют, как описано в примере 1.
Фармакологические исследования.
Слабительное действие.
Слабительный эффект предлагаемой согласно изобретению смеси сеннозидов определяли у мышей. Использовали самцов NMRI i-мышей, которые в течение опытов содержались в ящиках из плексиглаза и которые получали стандартную кормовую смесь с водопроводной водой (1:1) в бульонообразной консистенции. Отдельная подача питьевой воды во время опытов не осуществлялась.
Животные получают 100, 200 и 400 мг/кг смеси сеннозидов в 10 мл 0,5%-ного бикарбоната натрия /кг через желудочный зонд.
После приема исследуемых соединений в течение 24 ч собирали кал и мочу животных и анализировали. Полученные результаты в расчете на кг веса тела представлены в таблице.
Отсюда вытекает, сто сеннозиды обладают хорошим слабительным действием, которое наступает относительно быстро. Время вплоть до появления первого мягкого кала (2 ч), однако, согласуется с предыдущим транзитом к толстому кишечнику и разложением сеннозидов благодаря флоре толстого кишечника. Относительные действующие дозы имеются.
Острая токсичность.
С помощью желудочного зонда самцам и самкам, по 10 особей, крыс Vistar вводят однократно сеннозиды в дозах 2000-25 000 мг/кг.
Обусловленные веществом мароскопические повреждения органов не смогли наблюдать в случае крыс.
Определенные ЛД50-значения следующие: - + 840)
самцы крыс: - 5.200-720) мг/кг - + 380)
самки крыс: - 3.530-340) мг/кг
В случае самцов и самок мышей (п=8, вид
NMRI) максимально вводимая доза 5.000 мг/кг не приводит ни к каким смертельным случаям. Диареи наступают у всех мышей,
однако, также в меньшей мере, чем у крыс. ЛД50-значения в случае
обоих полов составляет > 5.000 мг/кг.
Изобретение относится к способу выделения сеннозидов A, B и A1. Способ состоит в том, что смесь сеннозидов подвергают восстановлению до соответствующих антрон-8-глюкозидов, осуществляют жидкостно-жидкостное диспергирование антрон-8-глюкозидов для удаления алоэ-эмодиновых компонентов и полученный после экстракции реин-9-антрон-8-глюкозид окисляют до сеннозидов A, B и A1. Изобретение относится также к полученным по этому способу сеннозидам A, B и A1 и фармацевтическому средству на их основе. 2 с. и 6 з.п. ф-лы, 1 табл.