Способ получения антибиотика тиенамицина - SU576967A3

Описание

отцоштся к обяасш щафйййае ШЕ; К raifeiOTHKa, яздяетаг Еыоокоэффектнввнм зща ннгйбЕрова1ИИ роста разлшнмх грвджоягзскйтельгзмх н ,г|®мо1|швдтея 5к5 ьйихрооргаймзш)з. Предлоз жнный шособ получения атибистиса тнешми1аша новый, в патеягаой н шучно-тахнячгсШвыо взо етвшд яоБявется а шбиошкг . Эта яосгагвЕтся там, «по шга&ш StreptOf myces caltleya NRRL Й357 культивируют в аэробных глубинных условиях в пнтателыюй среде- со1 ржап5ей источшкн угларода, азота и мишральные соли, с послвдуиицйм выделением н очисткой вгелвврго продукта. . АнтЕ&отнк тяешйшпзн формулы ЙНа-йНШ-1-г . VS-tHrt-HrNHi 0 Y получают путем вырапщвания микроорганизма Streptomyces cattleya. Этот штамм выделен из образца почвы н обозкаяен как МА-4297 в коллекция культур Мерк ендК°, Инк, Ренвей, Нью-Джер2 -. KvHbtypa ш щктокнвое хравекве в дг шгекйягп культур региошльных лабораторий Ео ЕссхшдоБакнкм, Северного отделення по айшльэовааиа нссзкйзшаиЁ к сгжрьпкй служ-оы се;5а(2сохозяйствеяных гкхзггдов11Егй отделгнЕЖ сельского хозяйства ОНА, Щар&&, Илляш:в1с а el присвоен номгр NRRL 8057. КуШ)турага)И -морфологические пркзашси шт&маа Streptomy s cattleya NRBL 8057, Морфогтатет. Сиорофоры являнпся шкггвымг етиралямн, встречзлнци.мася в вада боковых s ко1эчных ветвей та воздуяшом ша5влшн. Qio{ эднзйсондалгвьЕ до цнлк5пфн5е«жзц 0,9 х ,2 бвкм с цзяямн до 10 мкм н боже. Куяьтуралылаз признака. Агар нз томатной пасты и свежий ггукя. тзтигный рос переменный.р скевато-корвчшвыЁ плоский, пространственные, воздушньШ МНЦБЛЕ§ орхидея с белым, растворимого пягмеша ввт, Агар Чапека. Вегетативный рост бесцветный, плоский, пространственный. Воздушный миовл редкий, розовато-бельш, раство1шмого пнгмешя нет. Агар яичного альбумина. Вегетативный роет рыжевато-ко шчневый со следаяш серо-оркидейао

го, плоский, пространственный. Воздуишын мицелий - орхидея со светлыми тенями орхидеи м белого, рвстворимого 1шгмента нет.

Агар глицероля аспаргина. Вегетативный рост перемеыио рыжевато-коричневый со следами серорозового , плоский, пространственный. Воздушный Ш11|елий - орхидея с белым, створымого шгмента нет.

Агар пептон-железодрожжевого экстракта. Вегетап вньш рост рыжевато-коричневый, воздушного мицелия нет, растворимый пигмент слегка коричневатый , меланин не усваивает, HjS не образует.

Питательный агар. Вегетативаьш рост светлый рыжевато-коричневый, воздушного мицелия нет, }acTBoj Moro нигмента нет.

Агар питательного крахмала. Вегетативкьй росг кремовый до рыжевато-корич1«зого, воздушного йощелия нет, растворимый пщ-оаент огсутстзугт. Крахмал гихфолизуе умеренно.

Питательный йселатиновый агар. Взгеягагваый рост крвмоаыйз аозд щного мицелия нет. Желйзиу |жзжмй а2т уь-зерзнно.

SopOHlO yCSS2I2aST ГИЭКОЗу, iiiaSSBuIOiSs 5M5p2SJ5Ш усзаизае фрухстаэу, хсилозу маотоау, гйвжксЗУ , шхаэоэуз S уоЕШЕаез ара&шйзу, д ллкжа у, Еноэмтел, лактозу, рафш-юзу, ра «1козу.

Ойавйальйой эзйшературсй рост Esjjjisrfss 28 Cj Eps3 теьшературе 37° С pecir. умережгэй:.

Нитраты восстанавливает.

Акшбнотик тненамнцнн аолуашт а афсш.есга аэтн5быой фермвктащЕ яодходкидэй интзшяьг-х) водной арэ,дь в р8-гул; руэ лых уеж;зг-шк. :лшKyn .ssJC«5S3 оргйШ13ма Streptomycss esttSs a. Taxass q;«Ma содйржнг аеточшжа углерода, азэш н кзоргаг-шческюс золей, ассимщшруегАЫй -йткросргаш-гз}ЛОМ .

-TBSQOjsss, KBEpaMLSp offiiapg - гл;Егкозу5 фрулИ

Зу, Ый) СакЯр-ЗЗу, ксилозу р. MaiEffiED;;: Ш ДЗаТЕй;

а Tsixste KpajcMsjEsij шпкяг зер, озса, , крзлмал, кукуруз1- -ю муку, кстюгзгщг «шеяьКЭ ЙГЕ.1 в сз%,ташш э качэзЕзз ысточнгзкоз 2e sa5®ira.3eyeMsfQ уггэрода в мгшгелъкой cpsде . lCo)i5S4ecTso узжзода socyamjiae j аир-жйернс- 1-6% 0t средш.

В ка«зстБ« мсючнЕка азота Morj-r бьгк; 53ШйльiOBPJSiii; s i 3pH ;rat;, .uposc-AsaH-g н лд -эля-га м, лз/:щн ше щэойэсШр зв5Я saysa,. шюикоэал , sw cMiKssi-b каэгпй растэор- 1 ды8 гщсглляяль: кгзг ом§ий « iseta. l-kro ssECK asoim ййггойьзрв в 5.о/шчзстэе 0/2-6% от зеса зоджзй .

Прн8«еняют питательные неоргашгдаскне соли, ко Topbse 1ШОТ натрий, калий, аммогшм, кальций, фоофа сульфат, , карбошт, можж также эклгоаггь сгаедёз 8Вбтадш ®, г аярймер кобальта, магнйя, jsejs: и .

Фермсшацню щхжодят при 20-37° для полуЧЕЮ1Я овт19мальных результатов - при 22-30° С, рН mttsfKitHidi среды 6,0-8,0.

Фвр е11гащга осуществляют в глубинных условиях .

Незначительную ферментацию антибиотика проводят путем инокуляции питательной среды антибиотиком-продуцентом и после переноса в средупродуцент ферментацию проводят при постоянной температуре около 24°С в течение нескольких дней. Сосуд с посевом встряхивают при постоянной комнатной TCMnepaiype (28° С) в течение двух дней или до полутения удовлетворительного роста и некоторые из вновь культур используют для инокуляции ; второй стадии посева или среды-продуцента.

Для получеш5я юлы154х кояетеств анга5иотика ф€р1 гнтащ о проводат в баках, снабженкьи смзсятелем и средстваьй-: дпя а жр-овагшя фзpм€ rпtциo:

ной средьз. nKTaTejibHjiu cpsKy no.Tiy-ia T в баке к стерилизуют нагрзвашзем прк тгмперагуре сзсоио 4 20° С. Яри охчаждез-ии oiepasssosai-it-rjic сред} яркЕйвают предварительно п эоросиз-гм культур продуцгнта,. затем фзрьйнтйьупс прозадят в isvsims 3-5 джзй щт и-г ггмеазЕганиЕ к зэвгфовашш ьшктат злькоЁ сздь:. пс. Tiviv Hepaiypy ирмьйрко 24С.

Тнена «н11 ; огйсЕ ;:;s-jr;c2 С-глсз jESJUBCTBOj sSfrKu jsaiK-c; p-.:r3-j;o;-;j.ac.3 л .ij : зпи;-:с

р8Спг;йЕ|К5й ;- з ЙЗТЗКЭ Р. -/. jr/;r;2;;t ;3CJtViO -ОуАЭЬШОзицаЯ; ;с-огш7Сйзушибал; эглякк чгскс формузге, (чэ) 43,52 шгерсг-;, 5,92 : c-oродДг 10,23 ssora, 23,5 кислорода к 11,77 ospbi.

г. :-Я--% , 10 -;,

Sp3ai.

аэйдого фсжвалЯШС . рН ЗрГ. Нолоязтзльгйыз iCKJCio ;

гЕЗН-ГаДШКОг-г. 5О5;:375П1;:;йЗШй: :. ;S; ,«.,

ягак. :..чО5Г14Щзт отс..:. ;-;,:::t::r,a: ч-г;,т ..г-Т енайжцяЕ uCucasais is G;irJSiC-ii:i. Е е-сгь 3 зодйо;й ра jiacp ::r5;j ;:::;;a;;-;.u:vv: ; 5ЕИ;(8 У1Г/Г.1;:; ;: ., а г гг - :-;:: ;; ;-.

Oy ISSpUj p-rf j-f .ril..Sp .. V.jr/iVTJ: :,T

(pH7,9) Ери |5€ ихзет iapsot 23 дша, с. insji -ой д-з ;;C-s SKp:;.i3Si з ;

2В KSJIME Лрг2 рЕ 7,0 :Ггл;р:1С:Ц ,:огу;:асяг,е.бмодЯКЁ 3 10 Ajw Фосчга:алсго бог;:-;

период полураслада соскаляз:: гслько

, HSS3с: К1а.йьно &ге,г: ;:;-35г;;:Г1;.;й

нрогиз разлхкЕйя. rjJSS SGiiiCBcaisSEiSMj; п грамотжггштэЕьимх SfiKirepssi @ коаогг si&ss «p jeiffiKHe в

аЖДК1ЩНг.

Его 5ШОЛ 53ОЕ311. Э ЗНТНб-Щ-ШpifflHoro ирегара - дав 5яфек1щй в результате З5фай®№1я грампетюкжтельныйсн я грамотркцательнышс QsK-K ntm, , Staphyioc«xxus aureus, Proteus msrebilis, Escharidiia , KlebsisJIs pneumoniss, .а5 ssruginosa к Eutsrobaeter cSisoJs. Его можно использовать как дополнение к корму животным и как дезинфектант. Применять в водных композициях можно в концентрации 0,1-100 г антибиотика на 1 млн.ч. раствора для ингибировакня роста вредных бактерий на медицинском и зубном оборудовании и в качестве бактерицида в промышленном масштабе, нагфимер, в водных красках для ингибирования роста разрушительных бактерий. Антибиотик тиенамицин можно использовагь в различных фармацевтических рецептах в качестве ингредаента или в сочетании с одним или бопее антибиотиками или одним или более фар макалогичесхи активными веществам Антибиотик используют в форме капсул или таблеток, порошков, жидких растворов, суспензий иш эликсиров. Его можно ввод}ггь орально, топнвдски , внутривешю, внутримьшючно. Таблетки и капсулы для орального ввздеяня могут бытъ в дозировке длн одноразового применещ1Я в могуг содержать, нащжмер, связующие аганты, сироп, камедь, желатин, сорбитол, т агант, iioji i3HjSUinHpporotfiOH, ншолкктели, лакюзу , сахар, крахмал, фосфат кальция,, сорбйтол или ГЕЩик, ймсзываюпще sesjecas, mпример стеарат магякя, тальк, йогшэпызпглйколь; крем1 езем, дезеггзграторы, шпрщлер каршфельный крахг.щл, илн соответствующие сглачиваюшие аге.и.гы. нглример лаурилнатрийсртьфокат. Таблетки можно покрьшггь известным методом. смесЕ могут быть а форме воднызс или масляшк сусгшнзкй, растзоров, змульсш, сиропов, эшжс;чров ИЛИ в виде сухого продукта для растзорения с водой :-jJ3i ру утЛМй Jcидs ocтя ш. Tajoig згаздкие смеси могут содержать условные добазкй, например агенты по;г/чения суспензий, например сорбитолозый сироп, метшщеллюлозу, глюкозу (еахаркый сироп), хсеиавш, гидроксюталцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу , стеарат алюлшния в геле шш гидрогеккзованнь;е пищевые ясиры, агект-э гульгаторь - ле1Штш-1, сорбйтанмоноолеат или камедь, неводные носители, которые могуг включать ишдевые масла, waupnMsp миндальное масло, фракцио нировадшое кокосовое масло, масляные эфиры, пропилеетшжоль или зтиловый спирт, презерванты, например метил кли пропил п-гидроксибензоаты или сорбиновую кислоту. Суппозитории должны содержать достаточное котйпестзо основ, например масло какао или другае глицериды. Композиции для инъекций могут быть в одноразовых дозах в ампулах или в дозах для многоразового использования с дополнительными агентами-консервантами . Композиция могут быть в виде суспензий, растворов , змульсий в масле или водных носителях. Композиции могут быть также в виде порошка или жидких спреев или ингалянтов, лепешек или .полосканий для горла. Для закальшания в гтза или уши используют индивидуальные капсулы. Дозировка введения зависит от сосгояввя большого , веса и типа инфекции, частоты введения и яюсоба введения, при зтом парентеральное введение является предпочтительным для большинства инфекций, а оральный путь - для кншечяых ЕШфекций . Орально или парентер&пьао антибиотик вводят в кол1ркстве 2-600 мг/кг в деиь, предвочтикльно 5-1(Юмг/кг в день раздельными дозами, т.е. 3-4 раза в день. Можво применять одворезояые дозяр жки, у&прюлгр 25, 250, 500 или 1000мг активного ннгредвента с подходаионии фнзнологвчески приемлемыми носнтелями или эксцкпиентами . Полученный антибиотик имеет активность 50-400 ад/мл. Очинённый тяешмицян шлучают путем примекз .ния фнлырацнк геля через гель полнакрнлалн-ща с р23 «8ром пор, нсключгипщнм молокуль Е«сом более 1500. ПредЕЗЧ1:-11ельЭ1г.а гелзк ЕЕ-ляется биогель р ЛцсарйароваЕЕьш .зизйпопж :а xsiiiOHoc5s53-so3 гьале soдны гн рзггворзлш ай-гмстя клгг cprsK; 4eQKiix оско.зааа, напркмгр нкриднщ , UiEiOKiiHOBs лутк.щшоз, коляндйксз 51 ашскламиков . Получгнньш элкйт мокко очистить к друтягл .feiiTOflaj/m очкст;;н-. -Предпочтителы-1ы)й спсгобом o-rKCTfa восста Еозлеш-юго о&11деш сгс Пенамкщ-гкз является рропуск21шэ раствора яь.ткбиоткка, например фильтрованного ферме шг1даокнсго бульош ; pFI 4-5; через колошсу. содер;кащ ю СЕЛЬН Зд кзтнаносбмеаную смол}- с иьфоштного гнпа в шгклг натркл. ЯолзчешЕхЕ ад,с.зрбат затем nafr ходящем э/ава ггом, жпример 2%-Еым кадрг&ш ззрйднном . ЭлБйты собирают во фракяна, раз1й8р фра1сщж зависит от размера ко;юшс1. Затвм о етку а.вергшют последовательньЕчги процессами со спёд тйэдн Ароматографическнми средамк: аняоггообмгшгью смолы типа полисттфолтрнметнламмошш1 кагио} ообмешаые смолы гнпа полястыролсульфонзга , гелепроняцаекые смолы н полимерные абсорбенпг. Бнозктивнссть э.пкаюв измеряют нтутем пробы с пркмЕненкем Stsphyiococojs aureus АТСС б538Рв качестве организма пробы. Пример. Трубку с лиофилизованной культурой Streptomycas cattleya открьтают асеитично и содержимое взвешивают в трубке, содержащей 0,7 мл стерильных солей Дениса сзждующей композиции (г) СО.1Ш Девиса Цитрат натрияо,5 KjHP047,0 КН2Р043,0 ( NN4)23041,0 MgSp47H2O0,1 Дистиллированная вода1000 мл

Порцию 0,2 мл этой суспензии исгг. щш прививки косяка культуры q)eW)i А (;:гасс агар) следующей композиции (г).

Среда А

Автолиза дрожжей10,0

Глюкоза10,0

Фосфатный буфер2,0

MgSO4- 7HjO0,05

Дистиллированная вода1000 мл

(рН до 6,5 применением NaOH)

Фосфатный буферный раствор KHjPO491,0

NaHP0495,0

ДЬ1стшшированная вода1000 мл

Дня косяков добавляют агар 25,0 г/л.

Привитый косяк подвергают инкубации 8 дней при 28° С и хранят при 4° С.

Порцию спор и воздушного мицелия косяка используют для прививки колбы Эрленмейера емкостью 250 мл, содержащей 50 мл среды А (без агара). Колбу с посевом встряхивают прш 28° С на шейкере со скоростью 220 об/мкн в течение 2 дней, в течение этого времени получают удовлетворительный рост.

15 колб Эрлейнмейера по 250 мл, каждая содерашт 40 мл среды В, прививают 1 мл на колбу культуры из посева. Среда В илеет следующую ко шозицию (г).

Среда В

Кукурузная мука20,0

Барда10,0

Соевая мука15,0

Нитрат натрия4,0

CaCl22H200,5

MgS04-7H200,1

CaClj-eHjO0,01

FeS04-7H2O0,01

Поянгликоль 20000,25 об

Дистиллированная Н201СХЮмл

(рН доводят до 6,5

применением NaOH)

15 кодй с продуктом встряхивают при 28° С иа шейкере со скоростью 220 об/мин в течение 3 дней с пробами, Полуниными в процессе ферментацноииого цикла. В пробах применяют бульон, подверг нутый центрифугированкю.

Через 53 час бульоны из 13 колб сливают. ЧЬсть подвергают центрифугированию и опробированию. Оставшийся бульон фильтр}тот, доводят до рН 7 и 500 мл суиит при температуре ниже 0° С с получением 10,7 г твердого вещества. 1,5 г последнего соединяют с 25 мл смеси п-бутилового спирта и воды (1:99). рН раствора составляет 7,0. if cTSop наносят иа колонку 5 х 118 см биогеля Р 2 (200-400 меш), которую предварительно уравновешявахгт смесью л-бутклового спирта и воды. Гель щхмвляют тем же раствором со сксфостью 10 мл/мин я собяракп 650 мл головного погона с 75 фракциями, 20 мл каждая. Поток элюента на правляют записывающим дифферещшалькым

гесорактомефом . фракцию опробирукт на антибактерийнум ЕКГАЗНОСТЬ. Тиенамицин обнаружен во фракциях 34-40 с максимумом во фракции 37. 10 мл фракции 37 сушат при темкературе ниже 0°С с получением 2,0мл твердого вещества . Последнее соединяют с 5 мл воля для пробы. Пластины с пробок повергают янкуоации в течение кочи при 28° С. Пс;;учили следующие резульraroi:

Концентрация, мг/мл PasNtef эонь., мм, к

Staphyiceoccjs aureus АТСС 5533 F

8030

4025

2021

1017

П р и м е р 2. Открывают асептически трубку с лиофмлизованной культурой Streptomyces cattleya и содерхммое ззвещивают в 0,8 мл стерильных солей Девиса композиции примера 1.

Суспензию иотользуют для инокуляции косяков среды А (плюс агар) с композицией, приведенной в примере 1.

Привитые косяки подвергают иьжубации в течение недели при 28° С и затем храня прк 4° С.

спор и воздущного М15це1шя одного из косяков используют для П жвивки в колбе Эрленмейера емкостью 250мл с посевом, содержащей 50 :.. 1 pe:ibi 4. Колбу с :.iccBnvi встряхивают при 28° С со скоростью 220 об/мнн в течение 2 дней, затем получают удовлетворттельный рост.

Исгтолъзуют 15 колб Эрленмейера емкостью по 250 мл, каждую с 40 мл среды В. Каждую колбу прививают 1 мл культуры из колбы посева. Колбы ргтрячивзют при 28°с со скоростью 220 об/мин на шейкере в тече({ие 3 дней с пробами, вьшолненными в процессе ферментационного цикла. В пробах применяют плавающий бульон, прошедцшй центрифугирование . Получают следующие результаты: Возраст, час4853 72

рН6,- 6,4 5,5

Активность к Staphylococcus aureus АТСС 6538Р,

размер зоны, мм38 40 38

Через 53 час бульоны из 13 колб собирают и фильтруют. рН порцин фильтрата в 400 мл доводят до 4,8 разбавленным HCI и его адсорбируют на 140 KUi Довекс 50 х 2Na при скорости 14 мл/мин. Адсорбат промьшают 200 мл деионизированной воды и злюируют 2%-ным пиридином в воде, собирая 6 X 70 мл фракций. рН фракций доводят до 7,0 Пробы брали на всех фракциях. Пробы указьтают ш 45%-ную активность эяюатов.

Элюатную фракцию сушат при температуре ниже 0° С с получением 117 мг твердых веществ.

Последние растворяют в 1,5 мл смеси fi-бутилового спирта и воды (1:99). Раствор наносят на слой биогеля 1,4x81,5 см, который предварительно урайновешивают смес.ью л-бутилового спирта, я во

(смачивающая основа)-15,0

Барда10,0

Хлопковая среда

(фар ламедая)5,0

СоОг-бНаб0,01

СаСОз (послг регулировадаш pli)3

Полигликош, 2000ОД 5%

Ворсшроаодляя вода1000 мя

(рН доводят до 73

применением NaOH)

Температуру в баке доводят до 24° С в течен . 120 час. Добавляют не более 1% дополнительного ногасителя полкгликоля 2000. Проводят атжбактарвые пробы..

400 л бульона фильтруют на пресс-фильтре н добавляют 1,2 г натриевой соли (этилендшштрило) - тетрауксусяой кислоты к фильтрату. Фильтрат охлаждают до 6° С, доводят рН до 4,0 ±0,2 и поддерживают при 6° С. Холодный фильтрат адсорбирунгт на 38 л Довгкс 50x4Nat 20-50 меш, при скоростл 4 . / сорбат промьшазот 4G мл деионизироBSfflioS зодЫ; злкзируют 2%-ным зодным кирадйыом к три фракиди (по 19 к кая-эдая) -юбирЕКП is osipcoHpyfoT. Аншбактерийные пробы яоказываю, «jjfo элаат фракций 2 и 3 содержит 22% акгг1вностзг.. Три фракции собирают, концентрируют до 3,8 л и доводят рН до 7. 3j8 л полученного выше концентрата aj: cop6npyf;iT на 2,5 п Довекс (смола хлориднога щжла) при скорости 200 мл/мин. Смолу элюир пот деиснизировашюй водой в том же кош честве . € ракции собирают и кахсдую доводят до рН 7,0. Пробы показывают 75%-ную биоактивносга во фракщаж 5-S. Эти фракции собнрают и . руют. 3 л этого фильтрата сушат при темпэрапре ниясе , получают 1ь,6г твердых вещасд с активность 70 едУмг.

4 г BbiCjiueHHorb при температуре ниже 0°С твердого вещества соединяют с 50мл 0,1 М 2,6 лутидинлцета-шого буфера. Раствор с рН 6,3 наносят ш колонку, полученную следуиндим образом.

2,5 л Довекса 50x8 (200-4Шмеш) смоль: водородного 15нкла преобразуют в 2,6 луткдаковый цикл. Смолу уравновешивают с 5 объемамз-; колонки 2,6 лутидинацетатного буфера, 0,1 М, рН 6,3. Размеры уравновешенной смолы в елоэ . Колонку проявляют буфером (0,1 М) со скоростью 14 мл/летн.

Поток элкюнта направляют записьюающим дкф , ферекадгальным рефрактором Меккоматкк. Проявляют до получения 220 фраквдй по 20 мл каждая, Каждую следующую фракцию от 44 до 142 опробируют при разбавлении 1:50. Биоактивность наблюдается во фракциях 78-136, максимальная во фракциях 92-94. Фракции 82-116 отбирают и собирают с получением 700 мл раствора. Раствор разделяют на две порция 350 мл и сушат при температуре ниже 0° С.

Одну порцию высушенных веществ растворяют в 2,6 - лутидинадетатном буфере, 0,1 М, рН 7,0.

Раствор 27 мл наносят на колонку бногеля Р-2 (200-400 меш) 5x108 см, которую предварительно уравновешивают буфер (0,1 М). Гель затем проявляют буфером при скорости 10 мл/мин.

Поток злюента гащ авляют за1шсывавшшм ферешщальным рефрактометром Меккоматик. Проявление продолжаЕгт до повуче м 105 фракдай (20 мл каждая), фракпдя собирают, Кажцую фра;« цаю 51-90 сшро&руит щ® разбавлении 1:50. Проба показывает них feosKTSSHociB во фракциях 67-75, максимум в 70 н 71. (| ак1щк 68-75 сс рают с псзлу низм объемЕ 162 мя. К 145 мя собраайой фракция добавляют 3 мл (рН 7,0) буфера фосфата катрйя и растз кош№нтряруют до 9 мл. Концент1йт с содержанием 78% общего биовктнвного материала оскт т кояонку бзгагеяя Р-2, сушат прн тампграгуда щи:йсе 0°С с получгяне&а 185 мг. Оставпжеся 11 й«л фршсцнй S8-75 c-jfrnai прн TeMsepatjps нзсзсе 0°С с псвту Енгм 1,9кк теардых зеществ с актшзностью 10Ю ад/мг.

П р н М е р 5. Tpj-eicy с лпоф лиз-г-ванной кулыз-рой Strsptcmyces jattSsya отхрьЕВзгс-т асго13гческн и содер к1ййос гзвешгазан s Gs-S мг; -г таршхьньпс солзк Девйса кслшсзщнн прй ш 1.

Эту суспензию нспслйзугот для йнз5суляцш1 5тыргх кэсгкоз среды А (шлос агар) ксмпсзгазс: примера i.

Инок янрованные косяки подЕергаит KHscjea1ИИ в течение недели при 2 8° С и затем хранят при 4° С.

10 1Л среды А асептично nepesccsT за одян ic косякоз, споры и воздушный Еоэ шца-зт г су;т.-:пз;::: : 3,3 мл последней использутат для 5Шокуляцку . 2л терзгоро: {сзннг-§ Эряйзоёе-рс,, содержащей 5001иш ср5ДЬ 4, с Есеезсэя 3crp -x;L;ji3i при 28° С со скоростью 160 c6/M.;s т шейкзре в течение 48 fsc.

Культуру ш коябь sccgES ssstsiKsyErr длг ино1суляцго-: бака еглкостггвэ 190 п т ssjXJ sejoiKsE СТЕЛИ, .щего 160 г.-;л среды А. Te mepar py Е баке доводят до 2§° С, яеремещйваит со жоростью ISO , пропуская псугок зоз,н5тш ® Ts jggse , Пекогаситель - йолиглихэль 2СЮО эсшапь зукт в количестве ке болгз 1%. рН нзменяется следугощям образом:

Возраст, часG, 12 24

рЕ6,3 6,65,6

35 л культуры из бака посева исэользушт для инокулящи фернектерЕ (srviKocTbso 756 л) лз нерхсавеющей стали, содержэлдего 467 л среды Е кэмпоз1Щ н примера 4.

Процесс проводят прн 24° С прн скоростк язремешивання 95 об/мнн в течение . Пеногаситель - полигликоль 2000 добавляют в количестве не более 1,1%.

400 л бульона фильтруют через фильтр-пресс к порошок для фильгр-ования добавляют к 1,2 г (этнлендинитрило ) тетрауксусной кислоты, к фильтрату добавляют соль . Фильтрат охлаждают дс 6° С, доводят до рН 4,0 ± 0,2 и вьщерживают 9 ды. Гель проявляют смесью п-бутилового сгофта и воды при скорости 1 мл/мин и собирают 2 мл фракций Поток эпюента направляют записьшающим рефрактометром Меккоматик. Фракции опробируют на антибактерийную активность разбавлением 1:20. Биоактивный пик наблюдали на фракциях 44-53. Фракции 46-49 и половина фракции 50 собирают. 1 мл обраэид последних фракций снова спробнруют н остаток сушат при температуре ниже 0° С с выходом 4,2 мг частично очищенного антибнотмка. П р и м е р 3, Трубку с лиофнлизованной культурой открьтают асептнчио и содержимое взвешивают в 0,8 мл сте1жльных солей Девиса композиции примера 1. Суспензию используют для инокуляции четырех косяков среды А (плюс агар) композиции, указанН (ж в примере 1. Привитые косяки подвергают инкубации в течение недели при 28° С и хранят при 4° С. Порцию спор и воздушного мицелия одного из косяков используют для прививки трех колб Эрленмейера (250 мл) с перегородками, каждая содержит 50 мл среды А. Три колбы с посевом встряхивают при 28° С на шейкере со скоростью 220 об/мин в течение 1 дня, получают удовлетворительный рост. 12 колб Эрленмейе (2000 мл), каждая содержащая 250 мл среды С, прививают 7 мл суспензии, полученной с аптечным собиранием содержани.. 3 колб с посевом. Среда С имеет следующую композицию (ч.): Кукурузная мука20,0 г Барда 10,0 Соевая мука15,0 CaCl22HjO0,5 MgS04-7H200,1 . CoClj- бНзО0,01 FeS04-7H200,01 СаСОз4,0 Погао-ликоль 20000,25 об. Дистиллированная вода10000 мл ( рН доводюш до 6,5 применением NaOH) Три колбы встряхивают при 28° С со скоростью 220 об/мин на шейкере в течение 72 час. Бульсшы соединяют и часть центрифугируют для . Собранный бульон имеет рН 7,4, антибактерийная проба с применением плавающего 1 нтрифугованногр бульона - 43 мм. Бульон фильтруют, рН фильтрата доводят до 4,0 разбавлением HCI. 3000мл адсорбируют на 300мл Довекс 50x2 Na при 30 мл/мин. Адсорбат промьшают 300 мл деионизированной воды и элюяруют 2%-ным пиридином, собирая 8x150 мл фракций. рН фракций доводят до 7,0. Элюат фракций 2 и 3 (300 мл) соединяют и с содержанием 48% общего &«оактивного мате{тала наносят на колонку Довекс 50x2 Na 280 мл порции соединенных фракций элюата с рН 7,0, полученного вьпие, пропускают через колонку (40 мл) смоляного цикла. Смолу промывают 160 мл деионизированной воды. Элюент и промытые фракции собирают с получением 440 мл раствора. Раствор доводят до рН 8,2 разбавлением гидроокисью натрия, концентрируют при пониженном давлении доЗОО мл, доводят до рН 7,0 разбавленным HCI и сушат при температуре ниже 0°Сс получением 189 мл твердых веществ, которые растворяют в смеси fi-бутилового спирта и воды (1:99). 25 мл раствора наносят на колонку биогеля Р (200-400 мещ), который предварительно уравновешивают смесью п-бутилового спирта и воды. Гель проявляют и-бутиловым спиртом со скоростью 6,7 мл/мин. Поток злюента направляют записывающим дифференциальн м рефрактометром Меккоматик . 500 мл головного погона соединяют с фракциял™ (20 мл каждой). Каждую фракцию опробируют на антибактерийнутп активность при разбавлении 1:25. Биоактивиость наблюдают во фракциях 37-42, максимум во фракщ1и 39. Фракции 38-41 общим объемом 80 мл собирают. Раствор концентрируют до 10 мл при рН 7,0 и сушат при температуре ниже 0°С. Твердое вещество (13,5 мг) имеет сравнительную силу в щесть раз больще, чем образец на биогеле р 2 колонки в пробе с дисковой диффузией на Staphylococcus aureus. П р и м е р 4. Трубку с лиофилизованной культурой Streptomyces cattleya открьшают icenтически и содержимое взвешивают в 0,8 мл стерильных солей Девиса композкшш примера . Эту суспензию используют для прививки четырех косяков среды А (плюс агар) композиции примера 1. Привитые косяки подвергают инкубации в течение недели при 28° С и затем хранят при 4° С. 10 мл среды А асептически переносят на один из косяков, споры и воздушный мицелий помешают в суспензию. .3,3 мл суспензии используют для инокуляции 2 л перегороженной колбы Эрленмейера с 500 мл среды А. Эту колбу с посевом встряхивают при 28° С на шейкере со скоростью 160 об/мин в течение 48 час, получают удовлетворительный рост. Культуру из этой колбы с посевом используют для прививки, в баке емкостью 190 л из нержавеющей стали, содержащем 160 мл среды А, проводят процесс при 28° С при перемешивании со скоростью 150 об/кош в течение 24 час. Пеногаситель полиглико 2000 используют в количестве не более 1%.рН изменяется следунвдим образом. Возраст, час О1224 рП6,4 4,40,3 43л культуры в этом баке используют для инокуляции 756л ферментера из нержавеющей стали , содержащего 467 л среды Е следующей компоэиции (г): СредаЕ Церелоза Кукурузная жидкость

при 6° С. Холодный фильтрат адсорбируют на 38 л Довекса 50x4 Na (20-50 меш) при скорости 4 л/мин. Адсорбат элюируют 2%-ным водным пиридином и три фракции (по 19 л каждая) собирают и опробируют. Пробы показывают 27%-ную биоактивность во фракциях 2 и 3. Элюат фракхщй 2 и 3 собирают, концентрируют до 3,7 л и доводят рН до 7.

В 3,7 л концентрата элюата доводят рН до 7,4 и адсорбируют со скоростью 200 мл/мин. Смолу элюируют деинизированной водой с той же скоростью, фракции собирают, доводят рН до 7,0. Фракцию 4 (4л), содержац{ую 50% активности в концентрате, фильтруют через фильтр Миллипор 0,45мкм. Светлый фильтрат высушивают при температуре ниже с получением 12,4 г твердого вещества с активностью 270 ед/мг.

4 г высушениых при температуре ниже ОС твердых веществ соединяют с 2,6 - лутидинацетатным буфером, 0,1 М, рН 6,3. Раствор (50 мл) доводят до рН 6,3 добавлением уксусной кислоты, наносят на колонку Довекс 50x8 2,6 - лутидинового Щ1кла смолу (200-400 мещ), которую предварительно уравновеиивают буфером (0,1 М). Смолу проявляют тем же буфером, 0,1 М, рН 6,3, при скорости 14 мл/мин.

Поток элзоента направляют записьшающим дифференциальным рефрактометром Меккоматик. Проявление продолжают до получения 150 фракций (20мл каждая). Другие фракции 72-150 сяробируют при разбавлении 1:50. Единственный биоактивный пик во фракциях 76-148, максимум во фракциях 92-102. Фракции 86-113 собирают с получением 580мл раствора, содержащего 71% биоактивности при нанесении на колонку Довекс 50x8. Этот раствор подвергают сушке при температуре ниже 0° С. Полученный раствор растворяют в 2,6 лутидинацетагном буфере, 0,1 М, рН7,0, с получением 25 мл. Раствор наносят на слой биогеля Р-2 (200-400 меш), которьт предварительно уравновешивают буфером (0,1 М). Гель проявляют тем же буфером при скорости 9 мл/мин. Поток элюента нагфавляют записывакицим дифференциальным рефрактометром Меккоматик. Проявление продолжают до получения 105 фракций (по 20 мл каждая ). Каждую фракцию 65-80 опробируют при разбавлении 1:200. Наблюдают биоактивный пик во фракциях 67-76. Фракции 70-72 собирают и высушивают , при температуре ниже 0°С с получением 16,0 мл раствора с активностью 13,800 ед/мг. Фракции 69,73 н 74 собирают и высушивают щж reivmeратуре ниже О С с получением 20,2 мг с активностью S,200 ед/мг.

16 г высушенных при температуре ниже веществ растворяют в 2,6 лутиданацетатном буфе (х, 0,1,М, с получением 10мл. Раствор наносят на слой биотеля Р-2 (200-400 меш) 5x108 см, кото| 1й предва{нггельнр уравнстешивают тем же буфером . Гепь проявляют буфером при скорости 9 мл/мин. Поток элюента направляют записывающим дифференциальным рефрактометром Меккоматик . Проявляют до палученм 105 фракций (каждая по 20 мл). Каждую фракцию 65-80 опробируют при разбавлении 1:200.

Бноактивнын пик наблюдают во фракциях

67-75. Фракции 68-72 со&1рают и высушивают при температуре ниже с получением 9,1 мг с активностью 15,000 ед/мг.

П р н М е р 6. Трубку с лиофилиэованной культурой Streptomyces cattteya открьшают асептически и содержимое взвещивают в 50 мл стершпг ной среды А (с композицией 1), находящейся в перегороженной колбе Эрленмейера емкостью 250 мл.

Инокулированную колбу встряхивают при 28° С со скоростью 220 об/мин в течение 48 час. 40 мл бульона асептично смешивают с 20%-ным стерильным гликолем. 2 мл полученной смеси шшеткой закапывают в стерильную ампулу, затем замораживают и хранят на паровой фазе холодильника с жидким азотом.

Замороженное содержимое ампул ишользуют для инокуляции пе{)егороженнсш колбы Эрленмейера (250 мл), содержащей 50 мл среды А . Колбу с

посевом встряхивают при 28° С со скоростью 160 об/мин в течение 24 час.

Порцию 10 мл из этой колбы с культурсш используют для инокуляции перегороженных KOJ Эрленмейера (2 л каждая), содержащих 500 мл

среды А. Эти колбы с посевсмл встряхивают со

скоростью с 160 об/мни оря 28° С в течение 24 час.

По;н{ив 100 мл содержимого этих колб исооль

зуют для инокуляции ферментера из нержавеющей

стали (756 л), содержащего 467 я среды А. Бак

подвергают обработке при 28° С со «жоростью 130 об/мин в течение 24 час. Полигликоль 2000 используют в качестве веногасителя в количестве ве более 0,1%.

453 я культуры используют для инокуляции

ферментера (5670л) из нержавеющей стали, содержащего 4082 л феды Е композиции примера 4. Процесс приводят при 24° С при скорости вращения 70об/мнн в течение 144 час. Пзногаситель (полнгликоль 2000) добавляют не

более 0,1%. Пробы проводят с использованием плавающего дентрифугированного бульона. Пробы ва дисксшую диффузию проводят с щжменением фильтровальнсж бумаги.

4,082 л ферментацисйшсн-о бульона фильтруют.

Фильтрат охлаждают до 6° С, доводят рН до 4,5Ю,2 н поддерживают при 6° С, Холодный фильтрат адoapSupytoi . Адсорбат промывают 480 л денонизированной воды н элю1фук т 2%-ным водным пи тдином аря скорости 24 л/мин н грл фракции 300, 520

и 240 л со&1рают и отро& руют пр« fti 7,0. Пробы показывают, что злюат фракщй содержит 4, 16 н 6% (соответствешю) биоактнвностн щш ванесеыт на колонку Довекс 50x4 Na.

Элюат фракции 2 концентрируют др 48 я

доводят рН до 7. 48 л концентрата доводят до рК 7,3 и адсорбируют на 76 л Довекс 1x2 (50-100 меш) смолой хлорщцюго цикла при скорости 76 л/мин. Смолу ЭЛЮ1ФУЮТ деионнзированной водой при той же скорости. Собирают 4 фракции, две по 48, одну 70 и одну 48 л. Фракции доводят до рН 7. Пробы показывают , тто 689с исходной биоактивностн гт жсутствует во фракции 70 л. Эту фракцию концентрируют де i 8 л при рН 7,0 и фильтруют с нием фильтра Миллшюр 0,45 мкм. Фильтрат высушивают при температуре ниже 0°С с получением 99 г продукта активностью 310 ед/кг. 10 г высушенного при телшературе ниже твердого веирства соединяют с 2,6 - лутйдинш татным буфером, 0,1 М, рН 6,3. Раствор 125 мя дс одят до рН 63 уксусной кислотой и шносят на колонку, которую щмдаарнтелъяо уравновешивают буфером и проявляют буфером (0,1 М) нри скорости 25 мл/мин. Каждую «йтвертую фракщш от 36 до 192 опробируют при разбавле1®и 1:200. Биоактнность проявляется во фраетщях , s iaKCSiмум во фракщшх 92-%, Ф|жквдш 80-136 cofej рают, дсйавляют 590 мл деяонизироаанной всйк. получают 1760 мл. Собрашаш разбавленный райвор содержит 62% исходной бяоактйзноста, его наносят на колонку Довекс 50x8, сушат кри TSMISратуре ниже 0° С. Высушенные при температуре ниже 0° С твердые веиестза р 1ствир 1юг в 2,6 лутидииацетатко:.; буфере, 0,1 М, рН 7,0. Раствор 27 мл шносяг ш колонку биогеля Р-2 (200-400 меш), которую гфедварител::;;: урарнсвешивают буфером (0,1 М). Гель проявляют тем йсв буфером гзри скорости 10 мл/мкн. Поток эяюента направляют загшсьшатилм Ш фференциалькым р рактометроы Маккомвтик. По лушю 105 фракдаш (по 20 мл каждая), их ССЙЕрают . Кахсдую фракция) 70-93 onpofepyssf прн ра: авлении 1:ЗСЮ. Бноактивность обнаруживаю во фракщих 73-82, максимум во фракдаях 77 и 73. Фрак1щк 75-Ж) высуишзают пгш теьшэрат ре ниже 0° С с полуЕкнем 90 мл антибаошка со средней активностью 10,000 ед/мг. 90 мг его соединяют с 4 мл буфера фосфата калы&ш, М, рН 7. Этот раствор, содерзгащий 596 ед гидфоксила -ШНгасящей оптической плотноси, наносят на колонку с 90 мл гфедв зрительно щкхмьгтого ХАД-2 и уравновешенного до использования с 180мл буфера фосфата кальция, 0,01 М, рН7, прн 5° С. ХАД-2 промьшакя последовательно пятью объемами i н. NaOH, затем деионизированной водой до получения нейтрального элюенха, пятью объемами 1 н. НС и деионкзированной водой до жйтрального элюента, пятью объемами (каяадого) метанола, адетона, 0,(Ю1 М ЗДГА тетранатрия и дистиллированной водьь Перед употреблением растворители вакуумируют. Далее образец наносят Ш1 колонку с двумя порциями фосфатного буфера по 2 мл. Колонку проявляют iipii 5° С буфером прн скорост потскг 2 ..ш/мин. 4 кп фракций элюата собирают. Фракции, полу 1енные после 100 мл эл5оата, собирают и при получении 253 мл концентрируют на вращяющемся устройстве в вазсууме и ниже 10° С до объема 6 мл. Этот раствор, содер/кащкй 436 ед. гщрокашамингасящгй оятнческой плотности, шносят на кс локку диал5етрС М 1,7 см е 90 мл ХАД-2; предварительно проьагПой, как ук&заво выцш, и уравнозе1ШННОЙ при 5С дйсткллирсБашшй . Образец промывают двумя порцйЯШ1 по 2 л дастшгтшрованной воды. Колонку проявляют дггстиллированшй водой со скоростью 2 мл/мин. 4 мл фракций злюата собирают. Фракцни, получ8Ш1Ыэ после 1(Ю м злюата, собирают, 151 мл концен7р фуют на зраЕцаюадемся вь париом устрсйстае до объема 2,73 мл и раствор jffloqJHjBiSHpyEST ДО патучгния 6,49 2,ш тненамищша. Фракции, пслуенкые K-gsorj 152 г.« Е 345 мл, собирают и коадйнтрируют ЕЕ зр31 даю цеыся вынарком устройстве до oSbsSS 3.34 ь5л F, лвофилЕшруют .щ) пшучеьзш ILSSftSi- -ааса. Эти фракций содер з. g сбщгм 369 es, rjijv роксипгл&шгасшдей аш-аческой алэтностн. Погг- агот 3 ЗД раза очгшденный материал ао сраЕнеЕЯш с влзте аалок, нанесзЕ-шь на Еервра ХДЛ, :гс зокку , аол л-ашт агсгйвность 31,000 ед/мг. Снекгроь-гз. рижский анализ образца нротзукта показывает Ei( при измерений з фосфатном буферз, рН пру Q7 нм. П р и м g р . Оорцню 10 г твердого вещестаа (99 г), nonyieiffioro шз SJBSSCC 1x2 очзспсзй, шедйннют с 2,6 . ByrijfiREas TaTKMrbi оуферой, 0,1 М рН 6,3. Paci-Bop 125 UIE доводят до рК 63 п|Ж пшйощи укс сгшй ю жсггы, гшэсгзт на scfgsoHK 7,6x142 см Довекс Й)хо в щйсж; 2,6 - я тщдаЕ-. которую . предвадтктельао ур@взш5ШЕвашт уфером . Колонку Е| айв®ж 5г ё-чгфероеа (0,1 М) прг скорости 35 Шл/ьйш. 3,6 л ггшвЕоаго coJtjsa собврают в. Ж) фракндй по каждая. четвертую ф|йК1Ию &s6 лр скробнр зэ зг« разбавлзшш 1:200. Биоакш ость 0бгТя5 жй35нг7 во фрщсциях 18-173, максйййум so фраквиях 62-82. Фраками 42-102 котлйшаруют к 640мл деиоаизараванной дсйазляют е нолуздЕием 1920мл. Соединенный, разбавленный раствор, со держыдЕй 63% биоглспшности, канооят гш кологщ; Довекс 50x3 т высушязают црк -темзаратуре шжО С Твердые вещества растворяют в 2,6 -лупад-пгацегатном буфере, ОД М, рН 7). гастзор 2S тг нанося на кшюнку 5x112 см Мотеля Р-2 (200-400 меш), йредварятельно уравновешеш уго буфером (0,1 М)- Затем гепБ проявляют тем же буфером 1фи скоросги 10 мл/мнн. Поток эяюента направляют записывающим дифференциальным рефрактометром Меккокштик. Проявляют до получения 125 фракций (каждая по 20 мл). Кажд) фракцию 70-89 опробируют при разбавлении 1:300. Биоактквиосп обнарухсквают во фракциях 72-81, максимум во фракции 77. Фракции 75-79 высушивают при температуре ниже 0° С с получеинем 100.S мл антябиотика с активиостью 8,320 ед/мг. 100,5 мл твердого вещества соединяют с 4 MJ( буфера фосфата кальция, 0,01 М, рН 7. Этот раствор , содержащий 692 ед гидрокошамингасящей оптической плотности, шиюсят на колонку (1,7 см диаметром) с 90 мл предварительно промытого и уравнсжешенного ХАД-2 до использования с 180 МП буфера фосфата кальция, 0,01 М, рН7, при 5° С, ХАД-2 промывают до вС11ош эоыния последовательно пятью объемами 1 а NaOH, затем деионизированной водой до жйтральнсго элюеыта, пятью объемами 1 H.HCI, затем деиоиизирсшшной водой до нейтрального элюента, цятыо объемами метанола, адетона, 0,001 М ЭДТА тетранатрня и затем дистиллированное водс. Вакуумируют все растворители оеред упоггреблением. Затем образец наносят на колсвосу дважды по 2 мл порциями фосфатнотх) буфера. Колонку проявляют при 5° С буфером при жорости 2 мл/мин. 4 мл фракций элюата собирают. Фракции, получениие после 109 мл злюата, собирают и после получения 309 щ снова собирают. К этому эяюату добавляют И,53мг образда ХАД-2 очищенного антибиошка , попу нКого в примере б, содержащего 185 ед гидр жсяла«ашгасящей отнческсЙ плотности . элюат вместе с добавленным ашябиотшсом концентрируют в вакууме на вращающгмся вьшарном устройстве при температуре нихое 10°С до объема 7 мл. Этот раствор, содержащий 720 ея гидроксиламингасящей оптической плотности, наносят на колсаку с 90 мл ХАД-2, предварительно щ омытс , как указано выше, и уравно шенной 1фи 5° С. Перед использованием образец промьшают дважды дистиллированной водсй (по 2 мл). Колонку проявляют дистяллнрованнсж водой со скоростью 2 мл/мин. 4 мл фракций злюата собирают. Фракции, попукааьк после 109 мЛ элюата, собирают и после получения 309 лет концентрируют на вращающемся выпарном устройстве до объема 10,3 мл. Этот раствор , содержаидай 589 ед гидрокснламннгасящей оптической плотности, лиофилизуют с получением 23,6 мг ашибиатнка с активностью 30,140 ед/мг. Полученный таким образом антнбиотнк представляет собой белое аморфное твердое вещество. Образец его помещахп в кашишяриую трубку, температуру повышают со сксфостью 3° С/мян, происходит разложеже без получения жидкой фазы ва следующих стадиях: размягчение при 130-140°С; сокращение в объеме твердото вещества до 70-174°С, где мате1жал желтел; интенсивное нарастание цвета до красновато-коричневого 1фм 180-200° С; карбонизация и остаточшле следы твердого веще стра - п(М 205° С. Щю«1Й образец материала ва ятяяж спектромырни шжазывает гаос абсорбции п 2%,5 нм с Е 268,2. Элементаргалй анализ дает следующие результаты: 5,67% потерь веса нрясуносеори комнатной температуре в течение 4 час в вакууме. КомпоЗИЩ1Я содержит (%) 47,68 углерода, 6,22 водородд, 11,48 азота. Эти результаты совпадакгт с эмпирической формулой CiiHi6N204 S(NH3)o,28- ВЬРШСлеиная эжментарная композиция содержит (%) С 47,68, K6,13,N 11,52, S 11,57, О 23,1. Поляриметрн ский анализ 1 мг/мл раствора этого образца в 10 мм буфера фосфата кальция показал специфическое оптическое вращение + 80°. ИК-спектр этого образца выявил характерный пик абсорбции ш 1765, 1650-l550, 2800-2500 и 3500-3100см . Спектр ЯМР на ЮОмГцобразца ЭТОГО продукта. Формула изобретения Способ получения антибиотика тиенамицина формулы CH,-tH(OH)-,-Г -N (HrNH, о отличающийся тем, что щтамм Streptomyces cattleya NRRL 8057 культивируют в аэробных глубинных условиях в питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим выделением и очисткой целевого продукта.

Реферат

Формула