Фармацевтическая композиция для профилактики и лечения синдрома поликистозных яичников - RU2757220C1

Описание

Изобретение относится к области фармакологии, в частности к фармацевтическим композициям для профилактики и лечения синдрома поликистозных яичников (СПКЯ), и могут быть использованы в качестве биологически активных добавок и лекарственных средств.

Синдром поликистозных яичников (СПКЯ) – расстройство, которое поражает около 5% женщин репродуктивного возраста (Carmina Е., Lobo R. Polycystic ovary syndrome (PCOS): arguably the most common endocrinopathy is associated with significant morbidity in women. J Clin Endocrinol Metab 1999; 84: 1897-9). Распространенность этого заболевания в мире оценивается от 2,2 до 26,7%, в зависимости от используемых диагностических критериев (X. Chen, D. Yang, Y. Mo, L. Li, Y. Chen, Y. Huang, Prevalence of polycystic ovarysyndrome in unselected women from southern China, Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 139 (1) (2008) 59-64). Основными диагностическими критериями этого синдрома являются гиперандрогения, поликистоз яичников и дисфункция овуляции. Данное заболевание представляет собой мультифакториальное расстройство, связанное с гиперсекрецией лютеинизирующего гормона (ЛГ),. гиперандрогенизмом, относительно пониженным уровнем фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), поликистозом или полифолликулярными яичниками, олиго/ановуляцией (менструальной дисфункцией), гирсутизмом, бесплодием, повышенными уровнями воспалительных маркеров, неврологическими и психологическими проблемами, инсулинорезистентностью (ИР), дислипидемией и т.д. (D.A. Ehrmann, Polycystic ovary syndrome, N Engl J Med 352 (12) (2005) 1223-1236. S. Franks, Do animal models of polycystic ovary syndrome help to understand its pathogenesis and management? Yes, but their limitations should be recognized, Endocrinology 150 (9) (2009) 3983-3985. V. Padmanabhan, A. Veiga-Lopez, Animal models of the polycystic ovary syndrome phenotype, Steroids 78 (8) (2013) 734-740).

К факторам способствующим развитию СПКЯ, в первую очередь относят генетические, пренатальные нарушения и эпигенетические изменения в жизни плода, экологические факторы, отклонение веса новорожденного от нормы, гормональный дисбаланс и т.д. (S.M. Sirmans, K.А. Pate, Epidemiology, diagnosis, and management of polycystic ovary syndrome, Clinical epidemiology 6 (2014) 1. K. Mykhalchenko, D. Lizneva, T. Trofimova, W. Walker, L. Suturina, M.P. Diamond, R. Azziz, Genetics of polycystic ovary syndrome, Expert review of molecular diagnostics 17 (7) (2017) 723-733. W.-L. Chiu, J. Boyle, A. Vincent, H. Teede, L.J. Moran, Cardiometabolic Risks in Polycystic Ovary Syndrome: Non-Traditional Risk Factors and the Impact of Obesity, Neuroendocrinology 104 (4) (2017) 412-424).

Поскольку отсутствует четкая этиология для СПКЯ, то при лечении ориентируются прежде всего на проявление симптомов у пациента. Общие цели лечения заключаются в том, чтобы вызвать овуляцию у женщин, желающих зачать ребенка, снизить уровень андрогенов, снизить массу тела и снизить долгосрочные риски для здоровья при сопутствующих заболеваниях: сахарном диабете и сердечно-сосудистых. В лечении СПКЯ в качестве первоначальных средств для индукции овуляции у пациентов рекомендуется кломифен цитрат (кломифен). В качестве альтернативных средств для пациентов с резистентностью к кломифену включают терапию гонадотропином и лапароскопический дриллинг яичников. Основной целью лечения гирсутима при СПКЯ является центральное или периферическое подавление андрогенов (The treatment of polycystic ovary syndrome Ajossa S., Guerriero S., Paoletti A.M.,

Индукция овуляции с помощью кломифена демонстрирует хорошие результаты, однако, непереносимость этого препарата некоторыми пациентами ограничивает возможности применения такой терапии (Messinis IE: Ovulation induction: a mini review. Hum Reprod. 2005, 20 (10): 2688-2697. 10.1093/humrep/dei128., Kousta E, White D, Franks S: Modern use of clomiphene citrate in induction of ovulation. Hum Reprod Update. 1997, 3 (4): 359-365. 10.1093/humupd/3.4.359). Управление гиперандрогенизмом включает применение антиандрогенов и гипогликемических лекарственных средств, таких как метформин (Tang Т, Glanville J, Hayden CJ, White D, Barth JH, Balen AH: Combined lifestyle modification and metformin in obese patients with polycystic ovary syndrome. A randomized, placebo-controlled, double-blind multicentre study. Hum Reprod. 2006, 21 (1): 80-89). Метфомин показал свою эффективность для повышения чувствительности к инсулину и гиперандрогении, однако его использование связано с высокой частотой проявления побочных эффектов, включая тошноту, рвоту и желудочно-кишечные расстройства (Tang Т, Lord JM, Norman RJ, Yasmin E, Balen AH: Insulin-sensitising drugs (metformin, rosiglitazone, pioglitazone, D-chiro-inositol) for women with polycystic ovary syndrome, oligo amenorrhoea and subfertility. Cochrane Database Syst Rev. 2010, 1: 2-12).

Резистентность к инсулину (РИ) играет ключевую роль в СПКЯ. Инсулин-сенсибилизирующие агенты, такие как метформин и инозитолы, как было показано, улучшают эндокринные и метаболические процессы при СПКЯ (Franca Fruzzetti, Daria Perini, Marinella Russo, Fiorella Bucci & Angiolo Gadducci (2017) Comparison of two insulin sensitizers, metformin and myo-inositol, in women with polycystic ovary syndrome (PCOS), Gynecological Endocrinology, 33:1, 39-42, DOI: 10.1080/09513590.2016.1236078).

Из уровня техники известны биологически активные добавки (БАД) «Фертина» (Орион Фарма, Россия) и «Иноферт» (Хумана Фарма Интернешнл С.П.А., Италия) в состав которых входят: инозит - 1000 мг и фолиевая кислота 0,1 мг. Они имеет ограниченное функциональное применение и для успешной профилактики СПКЯ вместе с ними желательно применять другие препараты, например: витамина D3, который обеспечивает восстановление нормального менструального цикла, и снижает инсулинорезистентность при метаболическом синдроме. Альфа-липоевой кислоты улучшающей репродуктивную функцию и метаболические показатели у женщин страдающих СПКЯ (Capasso I, Esposito Е, Maurea N, et al. Combination of inositol and alpha lipoic acid in metabolic syndrome-affected women: a randomized placebo-controlled trial. Trials. 2013; 14: 273. Published 2013 Aug 28. doi:10.1186/1745-6215-14-273); D-хиро-инозитола, который положительно влияют на качество цитоплазмы ооцита, снижает уровень тестостерона и улучшает чувствительности к инсулину и т.д.

Известна биологически активная добавка, содержащая компоненты способствующие лечению и профилактике СПКЯ. Она представляет собой комбинацию мио-инозитола и D-хиро-инозитола с красным дрожжевым рисом (WO 2014135956). Эффективность ее применения для профилактики СПКЯ ограничивается необходимостью использования дополнительных источников альфа-липоевой кислоты, действие которой обеспечивает восстановление резистентность к инсулину, улучшает липидный профиль, и восстанавливает менструальный цикл (Capasso I, Esposito Е, Maurea N, et al. Combination of inositol and alpha lipoic acid in metabolic syndrome-affected women: a randomized placebo-controlled trial. Trials. 2013; 14: 273. Published 2013 Aug 28. doi:10.1186/1745-6215-14-273).

В публикации Nordio M, Proietti E. «The combination therapy with myo-inositol and D-chiro-inositol reduces the risk of metabolic disease in PCOS overweight patients compared to myo-inositol supplementation alone», описываются результаты терапии мио-инозитолом и комбинацией мио-инозитола с D-хиро-инозитолом в соотношении 40:1. Эта композиция позволила улучшить метаболические и гормональные параметры и была более эффективна, чем препарат мио-инозита у женщин с СПКЯ (Nordio М, Proietti E. "The combination therapy with myo-inositol and D-chiro-inositol reduces the risk of metabolic disease in PCOS overweight patients compared to myo-inositol supplementation alone". Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2012; 16(5): 575-81).

Наиболее близким к заявляемому изобретению является композиция, содержащая в своем составе мио-инозитол и D-хиро инозитол в соотношениях от 10:1 до 100:1 (ЕР 3424497). Было показано, что комбинированное лечение мио-инозитом и D-хиро-инозитом является более эффективным, чем лечение одним только мио-инозитом или D-хиро-инозитом. Также эта композиция приводила к положительным эффектам в отношении классических симптомов менопаузы: раздражительность, гипертония, остеопороз, дислипидемия, увеличение веса, приливы и старение кожи. К недостаткам этого изобретения именно для лечения и профилактики СПКЯ можно отнести некоторую ограниченность по действующим факторам, например, в него не включаются вещества, оказывающие улучшающее воздействие непосредственно на репродуктивную функцию и метаболические показатели у пациентов (альфа-липоевая кислота). Сами авторы этого изобретения позиционируют его, как возможность удовлетворить существующий в медицинской и фармацевтической промышленности спрос на новые препараты, которые еще более активно снижают уровень инсулина и андрогенов у женщин. А заболевание СПКЯ является мультифакториальным расстройством и в целом требует комбинированного воздействия.

Заявляемое изобретение направлено, прежде всего, на контроль и регулирование основных факторов способствующих развитию СПКЯ. Техническим результатом от его применения будет расширение количества регулируемых факторов в организме пациента, повышение эффективности использования, увеличение продолжительности воздействия (срок нормализации систем организма).

Заявленный технический результат достигается тем, что фармацевтическая композиция для профилактики и лечения синдрома поликистозных яичников (СПКЯ), содержит в своем составе витамин D3, витамин В9, альфа-липоеву кислоту, мио-инозитол, Д-хиро-инозитол. Указанные активные вещества берутся при следующем соотношении компонентов, в масс %: витамин D3 - от 0,0006 до 0,001; витамин В9 (фолиевая кислота) - от 0,004 до 0,006; альфа-липоевая кислота от - 5,3 до 7,1; мио-инозитол - от 89,9 до 92,5; Д-хиро-инозитол - от 2,0 до 2,6; марганца глюконат - от 0,35 до 0,47.

Экспериментальным путем подобранно такое соотношение известных компонентов, что с одной стороны они по своему воздействию перекрывают весь спектр факторов, нормализация которых требуется для устранения СПКЯ, а с другой стороны проявляют синергетический эффект, за счет совместного влияния нескольких активных веществ на каждую из регулируемых систем организма. Также заявляемая фармацевтическая композиция обеспечивает снижение прироста массы тела, нормализацию эстрального цикла и восстановление числа фолликулов с процессом овуляции.

В заявляемую фармацевтическую композицию входят активные вещества, использование которых известно в акушерстве и гинекологии, но имеено их комбинация и количественное соотношение приводят к заявленному техническому результату.

D-хиро-инозитол и мио-инозитол

В контролируемом рандомизированном двойном слепом исследовании сравнивалось влияние двух препаратов Мио-инозитол (МИО) и D-хиро-инозитол (ДХИ), на качество ооцитов. Пять женщин получали 550 мг МИО + 300 мг ДХИ ежедневно (группа с высоким содержанием ДХИ), в то время как 6 женщинам давали ежедневную дозу 550 мг МИО только с 27,6 мг ДХИ (группа с низким содержанием ДХИ). Согласно многофакторному анализу, высокие дозы ДХИ положительно влияют на качество цитоплазмы ооцита. Оболочка, плазматическая мембрана, цитоплазма ооцитов были улучшены с любой комбинацией МИО/ДХИ за счет снижения тестостерона или улучшения чувствительности к инсулину, независимо от возраста и индекса массы тела (Mendoza, N., Galan, М.I., Molina, С., Mendoza-Tesarik, R., Conde, С., Mazheika, M., Diaz-Ropero M.P., Fonolla J., Tesarik J., Olivares, M. (2019). High dose of d-chiro-inositol improves oocyte quality in women with polycystic ovary syndrome undergoing ICSI: a randomized controlled trial. Gynecological Endocrinology, 1-4. doi:10.1080/09513590.2019.1681959).

В последнее время, известно что инозиты - мио-инозит и D-хиро-инозит - это эффективная и безопасная альтернатива в лечении СПКЯ, так как обе изоформы инозита способны противодействовать последующим последствиям резистентности к инсулину. Тем не менее, в то время как ДХИ участвует в проявлении активности инсулина в основном на не яичниковых тканях, МИО проявляет специфическое воздействие на яичник, главным образом, путем модуляции метаболизма глюкозы и передачи сигналов фолликулостимулирующего гормона. Кроме того, МИО также может улучшать функции яичников путем модуляции метаболизма стероидов через инсулиннезависимые пути. Поскольку активность ДХИ и МИО, вероятно, включает в себя различные биологические механизмы, обе изоформы инозита могут быть использованы синергически, в соотношении, соответствующем их относительному физиологическому количеству в плазме (40:1). Новые экспериментальные и клинические данные с МИО плюс ДХИ подтвердили эффективность такого комплексного подхода и дали многообещающие результаты (Monastra, G., Unfer, V., Harrath, А.Н., & Bizzarri, М. (2016). Combining treatment with myo-inositol and D-chiro-inositol (40:1) is effective in restoring ovary function and metabolic balance in PCOS patients. Gynecological Endocrinology, 33(1), 1-9. doi: 10.1080/09513590.2016.1247797).

По результатам клинического исследования показа высокая эффективность комбинированной терапии сочетания метформин + миоинозитол + фолиевая кислота. В исследование были включены пациентки с избыточной массой тела/ожирением, страдающих СПКЯ, которые получали одно из лечений: девять - только с диетой (D); девять с диетой и метформином 1000 мг/день непрерывно (D+М); девять с диетой, метформин 500 мг/день и миоинозитол 4 г/день плюс 400 мкг фолиевой кислоты ежедневно, непрерывно (D+M+F). Менструальный цикл, показатель Ферримана-Галлвея (оценка степени тяжести гирсутизма), индекс массы тела и т.д. были измерены до начала терапии и через 3 месяца. По результатам исследования регулярность менструального цикла была восстановлена у значительного числа пациентов группы D+M+F (р<0,05); Показатель Ферримана был значительно улучшен потерей веса (р<0,05). Масса тела, ИМТ, окружность талии и бедер значительно уменьшились во всех группах (Diet, metformin and inositol in overweight and obese women with polycystic ovary syndrome: effects on body composition. Le Donne M, Alibrandi A, Giarrusso R, Lo Monaco I, Muraca U. Minerva Ginecol. 2012 Feb).

Витамин D3

Витамин D играет физиологическую роль в репродуктивной системе, включая развитие фолликулов яичников и лютеинизацию посредством изменения передачи сигналов анти-мюллерового гормона (АМГ), чувствительности к фолликулостимулирующему гормону и продукции прогестерона в клетках гранулезы (Sacchi S, D'Ippolito G, Sena P, et al. The

Учитывая, что СПКЯ является частой причиной дисфункции яичников у женщин с ановуляцией, проявление этого расстройства связано с различной степенью гонадотропных и метаболических нарушений, определяемых взаимодействием множества генетических факторов и факторов окружающей среды. Распространенность дефицита витамина D у женщин с СПКЯ составляет около 67-85 процентов при концентрации в сыворотке 25-ОН D<20 нг/мл (Thomson RL, Spedding S, Buckley JD. Vitamin D in the aetiology and management of polycystic ovary syndrome. Clin Endocrinol (Oxf) 2012; 77: 343-50). Хотя нет существенной разницы в уровнях 25-ОН D между СПКЯ и нормальными контрольными женщинами, было обнаружено, что высокая распространенность дефицита витамина D связана с метаболическим синдромом (Moini A, Shirzad N, Ahmadzadeh М, Hosseini R, Hosseini L, Sadatmahalleh SJ. Comparison of 25-hydroxyvitamin D and calcium levels between polycystic ovarian syndrome and normal women, hit J Fertil Steril. 2015; 9: 1-8).

Недавние исследования показывают, что низкий уровень витамина D может быть основным фактором в начале и развитии СПКЯ (Rashidi, В., Haghollahi, F., Shariat, М., & Zayerii, F. (2009). The Effects of Calcium-Vitamin D and Metformin on Polycystic Ovary Syndrome: A Pilot Study. Taiwanese Journal of Obstetrics and Gynecology, 48(2), 142-147), и что диетическое пополнение этого важного витамина может помочь восстановить нормальные менструальные циклы у женщин (Hahn S, Haselhorst U, Tan S, et al. Low serum 25-hydroxyvitamin D concentrations are associated with insulin resistance and obesity in women with polycystic ovary syndrome. Exp Clin Endocrinol Diabetes 2006; 114: 577-83).

Фолиевая кислота

Из результатов исследований известно влияние добавок фолиевой кислоты на общий уровень гомоцистеина и инсулина, а также относительно связи между гипергомоцистеинемией и гиперинсулинемией у женщин с СПКЯ (Woo KS, Chook Р, Chan LL, Cheung AS, Fung WH, Oiao M, et al. Long-term improvement in homocysteine levels and arterial endothelial function after one-year folic acid supplementation. Am J Med 2002; 112: 535-9).

Известно, что лечение метформином повышает уровень гомоцистеина, в связи с чем было предложено назначать витамин В12 и фолиевую кислоту женщинам с СПКЯ, особенно тем, кто использует метформин и планирует беременность (Esmaeilzadeh S., Gholinezhad-Chari М., Ghadimi R. The Effect of Metformin Treatment on the Serum Levels of Homocysteine, Folic Acid, and Vitamin В12 in Patients with Polycystic Ovary Syndrome. J Hum Reprod Sci. 2017; 10(2):95÷101. doi: 10.4103/jhrs.JHRS_74_16).

В исследовании Kazerooni Т. и др. показано, что 3-месячная терапия фолиевой кислотой уменьшает уровень гомоцистеина у женщин с СПКЯ независимо от того, имели ли они инсулинорезистентность (Kazerooni, Т., Asadi, N., Dehbashi, S., & Zolghadri, J. (2008). Effect of folic acid in women with and without insulin resistance who have hyperhomocysteinemic polycystic ovary syndrome. International Journal of Gynecology & Obstetrics, 101(2), 156-160. doi: 10.1016/j.ijgo.2007.10.024).

Альфа-липоевая кислота

Альфа-липоевая кислота (АЛК) представляет собой природное антиоксидантное липофильное соединение, которое действует как важный кофактор для митохондриальных ферментов. АЛК повышает эффективность других антиоксидантов, особенно в клетках печени, легких и почек.

АЛК может использоваться у пациентов с диабетом 2 типа для улучшения гликемического контроля и уменьшения симптомов диабета, в особенности нейропатий (Cianci A, Panella М, Fichera М, et al. D-Chiro-Inositol and alpha lipoic acid treatment of metabolic and menses disorders in women with PCOS. Gynecol Endocrinol. 2015; 31: 483-486).

В гинекологии и акушерстве применение АЛК основано, на его антиоксидантном и противовоспалительном действии (Di Tucci, С., Di Feliciantonio, М., Vena, F., Capone, С., Schiavi, M.C., Pietrangeli, D., enedetti Panici, P. (2018). Alpha lipoic acid in obstetrics and gynecology. Gynecological Endocrinology, 1-5. doi:10.1080/09513590.2018.1462320).

АЛК играет роль в регуляции метаболизма глюкозы и липидов, стимулируя поглощение глюкозы с помощью переносчиков глюкозы GLUT1 и GLUT4, что также происходит при действии инсулина. Все больше данных свидетельствуют о том, что альфа-липоевая кислота может улучшать репродуктивную функцию и метаболические показатели у женщин, страдающих СПКЯ.

В данных представленных Alessandro D Genazzani и др. показана эффективность комбинации 400 мг альфа-липоевой кислоты и 1 г мио-инозита в восстановлении резистентность к инсулину в группе из 36 пациентов с СПКЯ, улучшающая также секрецию гонадотропина. У всех пациентов наблюдалось значительное снижение уровня ЛГ в сыворотке крови (Aless, Genazzani, R.D., Despini, G., Santagni, S., Prati, A., Rattighieri, E., Chierchia, E., & Simoncini, T. (2014). Effects of a Combination of Alpha Lipoic Acid and Myo-inositol on Insulin Dynamics in Overweight/Obese Patients with PCOS).

Лечение с комбинацией 1 г D-хироинозита и 600 мг АЛК ежедневно в течение 180 дней по сравнению с отсутствием лечения в группе из 46 женщин (26 исследований группа субъектов и 20 контролей) репродуктивного возраста привели к улучшению уровня инсулина, липидного профиля и частоты менструальных циклов (Cianci A, Panella М, Fichera М, et al. D-Chiro-Inositol and alpha lipoic acid treatment of metabolic and menses disorders in women with PCOS. Gynecol Endocrinol. 2015; 31: 483-486).

Введение препарата с контролируемым высвобождением АЛК (600 мг) два раза в день в течение 16 недель в группе из 6 худых женщины страдающих от СПКЯ, привело к снижению уровня триглицеридов, улучшению в чувствительности к инсулину и восстановлению менструального цикла (Masharani U, Gjerde С, Evans JL, et al. Effects of controlled-release alpha lipoic acid in lean, nondiabetic patients with polycystic ovary syndrome. J Diabetes Sci Technol. 2010; 4: 359-364).

Марганца глюконат

Марганец является важным элементом препятствующим окислительному стрессу и является кофактором для металлофермента - Mn-содержащей супероксиддисмутазы (MnSOD). Он нейтрализует высоко реактивные супероксид-ионы до менее реакционноспособной перекиси водорода (H2O2), за которым следует его немедленное превращение в H2O каталазой и другими пероксидазами в матрице митохондрий (Chu CJ, Lee SD, Hung TH et al. (2009) Insulin resistance is a major determinant of sustained virologic response in genotype 1 chronic hepatitis С patients receiving preginterferon alpha-2b plus ribavirin. Aliment Pharmacol Ther 29: 46-54). В исследовании Pratip Chakraborty и др. показано, что средняя сыворотка марганца у пациенток с СПКЯ составляла 0,230±0,012 ррм, что значительно ниже контроля (р<0,002). Предполагается, что повышение окислительного стресса при СПКЯ, сопровождается снижением марганца в сыворотке крови в результате потребления его в системе антиоксидантной защиты, включая MnSOD (Chakraborty, P., Ghosh, S., Goswami, S.K., Kabir, S.N., Chakravarty, В., & Jana, K. (2013). Altered Trace Mineral Milieu Might Play An Aetiological Role in the Pathogenesis of Polycystic Ovary Syndrome. Biological Trace Element Research, 152(1), 9-15. doi: 10.1007/s12011-012-9592-5).

Дополнительно марганец усиливает действие мио-инозитола в тканях, стимулируя работу фермента фосатидил-инозитола (Schoepp, D.D. (1985). Manganese Stimulates the Incorporation of [3H]Inositol into a Pool of Phosphatidylinositol in Brain That Is Not Coupled to Agonist-Induced Hydrolysis. Journal of Neurochemistry, 45(5), 1481-1486. doi:10.1111/j.l471-4159.1985.tb07216.x).

Предложенное соотношение активных компонентов заявляемой фармацевтической композиции обеспечивает снижение инсулинорезистентности (устранение метаболических нарушений), восстановление менструального цикла, улучшение функции яичников, качества ооцитов, нормализацию цикла, и восстанавливает овуляцию.

Заявляемая фармацевтическая композиция может быть использована для профилактики и лечения в составе комплексной терапии синдрома поликистозных яичников, гиперандрогении и дисфункции овуляции.

ПРИМЕР РЕАЛИЗАЦИИ:

Проверка заявленного технического результата проводилась в экспериментах с животными. В опытах использовалась композиция с составом активных веществ, указанным в Таблице 1.

Животных содержали в стандартных условиях в соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами СП 2.2.1.3218-14 по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев) и ГОСТ 33044-2014.

Моделирование патологии осуществляли согласно методике, предложенной Tehrani F.R. с соавторами (Tehrani, F.R., Noroozzadeh, М., Zahediasl, S., Piryaei, A., & Azizi, F. (2014). Introducing a rat model of prenatal androgen-induced polycystic ovary syndrome in adulthood. Experimental Physiology, 99(5), 792-801. doi:10.1113/expphysiol.2014.078055).

Для этого производили ссаживание самцов и самок, в течение ночи в стандартных условиях содержания животных (12-12 ч циклов свет - темнота, контролируемая температура 23±3°С, относительная влажность воздуха 30-70%). Первым днем беременности считали появление паховой «пробки». Далее беременных крыс разделяли на две группы: интактную (без моделирования патологии) и контрольную группу (модель патологии). На 20-й день беременности самкам контрольный группы подкожно вводили раствор тестостерона в дозе 5 мг

Расчет доз проводили следующим образом: для предлагаемого препарата расчет доз проводили из расчета 2 таблетки в сутки на человека массой 70 кг, масса таблетки 1430 мг.Таким образом, расчетная доза препарата составляла: 1430×2/70×39/6,5=245,14 мг/кг/сут.

Препарат сравнения, брали в количестве эквивалентом содержанию мио-инозитола и D-хиро инозитола в предлагаемом препарате, что составило 96,66 мг/кг/сут (где 94,3 мио-инозитола и 2,36 мг D-хиро инозитола).

В ходе эксперимента было исследовано 4 группы животных (по двенадцать животных в каждой группе):

1 группа (интактные) - интактные животные, без моделирования патологии, которые получали 1% крахмальный клейстер;

2 группа (контроль) - контрольные животные, с моделью пренатального андроген-индуцированного синдрома поликистозных яичников, которые получали 1% крахмальный клейстер;

3 группа - группа животных, с моделью пренатального андроген-индуцированного синдрома поликистозных яичников, которые в качестве лечения получали предложенную композицию в дозе 245,14 мг/кг;

4 группа - группа животных, с моделью пренатального андроген-индуцированного синдрома поликистозных яичников, которые в качестве лечения получали композицию, предложенную в прототипе (ЕР 3424497) - в качестве препарата сравнения в дозе 96,66 мг/кг.

Оценка эффективности БАД:

На следующий день после формирования групп, осуществляли ежедневное внутрижелудочное введение БАД и носителя (1% крахмальный клейстер), на протяжении 6 недель.

Определение массы тела животных проводили на 0, 21 и 42 день исследования. Результаты измерения массы тела и динамики прироста массы тела представлены в таблицах 2 и 3 соотвественно.

Несмотря на достоверное отличие массы тела экспериментальных групп от интактной, к 42 дню эксперимента, наблюдается снижение прироста массы тела в группе с изучаемой БАД, достоверное отличающееся от контроля (р<0,001) и от группы сравнения (р<0,001). Показатель прироста в группе с изучаемой БАД достигал уровня интактных животных, и превосходил показатель группы сравнения на 42% (р<0,001).

Начиная с 4 недели по 6 неделю включительно, определяли длительность эстрального цикла по картине влагалищного мазка. Результаты исследования представлены в таблице 4.

В группе контрольных животных наблюдалось увеличение эстрального цикла, достоверно отличающееся от группы интактных животных (р<0,001). Ежедневное введение предлагаемого БАД приводило к нормализации длительности эстрального цикла, достоверно отличаясь от группы контроля (р<0,001). При этом, показатель в группе предлагаемого БАД превосходил группу сравнения на 58%, что указывает на более высокую эффективность предлагаемой БАД и носит достоверный характер отличий (р=0,026).

На 43 день эксперимента проводили эвтаназию животных для последующего забора яичников определения их массы и последующего морфологического исследования. Данные полученные в группах представлены в таблице 5.

Полученные результаты указывают на достоверное увеличение абсолютной массы яичников у животных с андроген-индуцированным синдромом поликистозных яичников.

В группе контроля показатель превосходил на 8% группу интактных животных (р<0,001). Введение исследуемой БАД приводило к снижению массы яичников к значению в группе интактных животных, показатель был ниже на 6,5% группы контроля (р<0,001), и ниже группы сравнения на 2,3% (Р<0,05).

После взвешивая яичники фиксировали в 10% растворе формалина, после материал полностью заливали в стандартном режиме в парафин. Срезы для стандартного гистологического исследования окрашивали гематоксилином и эозином. Описательное исследование гистологических препаратов выполняли под микроскопом Axio Scope A1 (Carl Zeiss Microimaging GMbH, Германия). Подсчет количества фолликулов проводили при увеличении × 40 с 3 срезов на яичник, с каждого яичника животного. Результаты подсчетов представлены в таблице 6.

Исходя из результатов численного определения фолликулов, в группе животных с моделированием пренатального андроген-индуцированного синдрома поликистозных яичников наблюдается увеличение числа первичных, вторичных, атретических фолликулов и снижение числа третичных фолликулов, желтых тел. В группе животных с применением предлагаемой БАД, по всем параметрам оценки количества фолликулов, наблюдается приближение показателей к группе интактных животных, группа не имеет достоверного отличия от группы интактных животных (р>0,05), при этом количество третичных фолликулов увеличилось на 75% относительно группы с моделью патологии, что на 50% лучше группы сравнения.

Полученные результаты свидетельствуют о комплексном воздействии БАД на организм животных с индуцированным СПКЯ за счет чего наблюдается улучшение таких параметров как прирост массы тела, что говорит о влиянии БАД на метаболические процессы, длительность эстрального цикла, а также увеличение числа третичных фолликулов и овуляции. Осуществление выраженных корректирующих эффектов БАД говорит о потенцировании эффектов компонентов предложенной композиции, за счет чего предлагаемая композиция превосходит группу сравнения по параметрам эффективности.

Реферат

Изобретение относится к области фармакологии, в частности к фармацевтическим композициям для профилактики и лечения синдрома поликистозных яичников (СПКЯ), содержащей следующие компоненты в мас.%: витамин D3 - от 0,0006 до 0,001; витамин В9 (фолиевая кислота) - от 0,004 до 0,006; альфа-липоевая кислота от - 5,3 до 7,1; мио-инозитол - от 89,9 до 92,5; Д-хиро-инозитол - от 2,0 до 2,6; марганца глюконат - от 0,35 до 0,47. Технический результат: получение фармацевтических композиций для профилактики и лечения синдрома поликистозных яичников (СПКЯ) с повышеной эффективностью использования и с увеличением продолжительности воздействия (срок нормализации систем организма). 6 табл.

Формула