Способ получения диэтилдитиокарбамата холина - SU1614761A3
Код документа: SU1614761A3
Описание
Изобретение относится к способу получения нового:производного диэтил- дитиокарбаминовой кислоты, в частности диэтилдитиокарбамата холина формулы
Г ®
C%-14-CH -CH OH
I I сн
проявляющего терапевтическую актив-, ность при лечении церебральных дегенеративных заболеваний, таких как старческое сумасшествие, болезнь Алземейера.
Цель изобретения - изыскание нового соединения, проявляющего более высокую терапевтическую активность при лечении церебральных дегенеративных заболеваний.
Диэтилдитиокарбамат холина (мол. вес. 252,40) представляет собой мелкие бесцветные или слегка желтоватые кристаллы с ТоПлаВо96-97 С, они легко растворяются в воде, спиртах, гликоле и значительно меньше в органических растворителях. Кристаллы диэтилдитиокарбамата холина сильно гигроскопичны , поэтому их необходимо- хранить в герметичном и охлаждаемом сосуде о
Элементный анализ дает следующие
результатыо
Рассчитано, %: С 48,85; Н 9,64; N 11,12; S 25,55; О 6,35
CioHidNiOSj.
Найдено, %: С 48,18-48,47; И 9,37- 9,54; N 11,59-11,51; S 24,94-24,75.
Среднее значение, %: С 48,33; Н 9,45; N 11,55; S 24,85,
ИК-, УФ-, ЯМР-спектры и масс-спект- рометрия показывают наличие характе 05
см
ристических полос нового продукта в соответствии с изобретением.
Лиэтилдитиокарбамат холина может быть получен нз трехводного дтгэтил- дитиокарбамата натрия н хлорида хо- лина. Реакпия идет следуюи им образом;
С2Н5
K-N-CH -CHjOHfct s
е2Н5. J сн, ,ф ,-сн,он .NQCI 15
S L СНз J
I П р и м е р. в двух колбах Эрлен- мейера или в двух химических стака- |нах соответствующей емкости раство- |.ряют раздельно 56 г (0,040 моль) хло |рида холина в 100 мл абсолютного эта |Кола, слегка Нагревая при помощи :электрической плитки или водяной бан :и. встряхивая раствор, чтобы обеспе- |Чить лучшее растворение, 90 г ; (0,40 моль) трехводного диэтилдити- |окарбамата натрия в 100 мл абсолют- iHoro этанола,. Когда оба раствора i стану т прозрачными, медленно ;струйкой наливают спиртовой раствор ;холина в раствор натриевой соли при сильном помешивании и наружном ох- ;лаждении баней с холодной водой, |так как реакция сильно экзотермичес- кая. После добавления около одной трети раствора образуется большой |осадок. Приливание продолжают при сил |ном помешивании. Добавление спиртового раствора холина в спиртовой ipacTBop натриевой соли продолжается около 15 мин. Затем перемешивание прдолжают 30 . Полученный продукт охлаждают в течение ночи, при этом сосуд с реакционной смесью закрыт На другой день удаляют хлорид натрия путем просушивания и промывания абсолютным спиртом по 50 мл два раза на фильтре.
Получают 23 г .хлорида натрия. Спиртовой i маточный раствор диэтил- дитиокарбамата холина в этаноле концентрируют на водяной бане под вакуумом , создаваемым водяным насосом, чтобы удалить избыток этанола. Затем быстро вБшивают очень вязкий раствор в химический стакан или стеклянную или фарфрровз ю ступку. После этого
с
10
15
20 25 зо 45
5
высушивают в вакууме в сушильном шкафу , используя в качестве осушителя пятиокись фосфора. Полученный продукт имеет форму блока, который измельчают на мелкие кристаллы или в мелкокристаллический порошок (порошок бесцветный или слегка желтоватый). Количественный выход по диэтилдитиокар- бамат холину 100 г„ Выход цбйевого продукта 99%. Полученный диэтилдитио- карбамат холина должен храниться в герметичном сосуде, так как он гигроскопичен .
В соответствии с изобретением установлены терапевтические свойства новой.соли холина, проведено полное исследование токсичности этого продукта . Токсикологическое исследование проведено на белых швейцарских мьшшх породы SWISS. На этих животных изучалась острая токсичность, хроническая токсичность, влияние на размножение , т.ератогенез, способность к размножению во времени и продолжительность жизни, .влияние на эффективность иммунных характеристик диэтил- дитиокарбамата холина. Для всех опытов животные бьши рандомизированы, разделены по полу и распределены на группы по 30 особей, беременные женские особи изолировались в индивиду- альньгк клетках о Всех животных кормили -подходящим кормом, для питья применялась обычная вода.и с добавлением исследуемого продукта, т.е. диэтил- дитиокарбамата холина. В применяемом корме содержались зерновые продукты, растительные белки, животные белки, минеральные соли и витамины. Измерения острой токсичности нового соединения в соответствии с изобретением, которое вводилось интраперитональным или подкожным путем, показало, что токсичность очень слабая; при дозе ниже 1 г/кг смертельных исходов нет. Величина находилась в пределах 1,,7 г/кг. При этом было установлено , что применение нового соединения значительно задерживает старение. Этот эффект особенно заметен на мужских особях и, по-видимому, связан с изменениями характера и поведения животного, приводящими к уменьшению уязвимости, что обычно связано с высокой агрессивностью. Контрольные мужские особи больше дрались, уста- ранились и погибали „
516
Исследовалось также влияние нового соединения на эффективность иммунных характеристик у белых мьппей SWISS.
Для получения одинаковой иммунной защиты необходимо 100 мкг специфической вакцины для контрольных животных и только 20 мкг - для мыией которь т вводилось предлагаемое соединение в виде 1%-ного раствора в питьевой воде
Из данных экспериментов следует, что токсичность нового соединения практически нулевая. Видно также, что введение новой соли холина белым мышам SWISS благоприятно сказывается на размножение, продолжительньсть
жизни, на поведение и эффективность иммунных реакций.
Фармакологические исследования предлагаемого соединения показали, .что оно обладает хелатным действием тяжелых и переходных металлов, им- мунностимулирующим эффектом, антидегенеративным эффектом и оказывает влияние на нейтронные передачи и, следовательно, имеет очень интересную терапевтическую активность в области церебральных дегенеративных заболеваний, таких как старческое сумасшествие, болезнь Алземейера и сз асшествие Ллземейера. При этих заболеваниях первыми поражаются хо- линэрговые -центральные нейроны либо на уровне синтеза нейромедиатора - ацетилхолина, либо на уровне мембраны , которая использует холин для своего биосинтеза. С терапевтической точки зрения нельзя непосредственно вводить ацетилхолин, который не проходит через мембраны, а результаты, полученные при введении холина только в форме хлорида, недостаточны.
Предлагаемое соединение использовали в ряде экспериментов, проведенных на двух моделях животных с нервной дегенера1щей, которая была вызвана или за счет основных холинэрго- вых ядер, или за счет повторного введения гйдроксида алюминия. В обоих случаях наблюдалось, что способности животных к обучению, разрушаемые в связи с дегенерацией, восстанавливались при оральном (через рот) введении диэтилдитиокарбамата холина После лечения в течение трех недель определялась эффективная доза , величина которой составляла 0,10- 0,30 г/кг животного.
0
5
0
5
Клинические исследования диэтилдитиокарбамата холина проводили в клинических экспериментах на пациентах, имеющгх церебральное дегенеративное заболевание, которое определялось в соответствии с критериями PSM111MMS, на основе углубленного психометрического анализа и радиографии SANER, Эксперименты проводили в больничной среде, лечение продолжалось от шести до двенадцати недель и состояло из плацебо, :хлорида .холина, диэтилдитиокарбамата холинао
Прим еняли дозы активного вещества 125 мг при разовом приеме через рот три раза в день, . дневная доза составляла 375 мг. Результаты показывают , что в 70% случаев лечения данным соединением наблюдается исчезновение или значительное уменьшение расстройств поведения и настроения пациентов. Результаты объективно подтверждены психометрическими тестами. При лечении плацебо или хлоридом холина в 30% случаев наблюдались легкие- улучшения, менее четкие и более короткие, чем в случае лечения пациентов данным соединением.
30
5
0
Терапевтические составы, содержащие диэтилдитиокарбамат холина (в качестве активного составляюп его) , могут вводиться орально (через рот}, рек- тально или могут инъектироваться в зависимости от психофизиологического состояния пищеварительного тракта . больных.
1. Активность ДТС-холина (диэтилдитиокарбамата холина) в качестве . предшественника ацетилхолина у взрослой крысы.
Крысам в возрасте 26 мес. (1 контрольная партия крыс, 1 партия с хлоридом холина, 1 партия с ДТС-холином) 5 в течение 8 дней перорально вводили ДТС-холин в количестве 50 мг/кг/день, причем эти дозы холина эквиваленты хлориду холина.
После умерщвления животных опре- 0 деляли содержание холина и ацетилхолина в разных областях мозга (кора лобная, затылочная, боковая, конек, полосатое тело, мозжечок и луковица) радиоэнзимологическим методом. Во всех этих областях содержание хо.ггина относительно контрольных животных увеличилось , но в случае применения ДТС-холи- на увеличение было гораздо значительнее , чем при применении х.п1оридя холи5
на. В частности, показательным резултатом является результат р 0,05 на уровне лобной корЫс Кроме того, синтез ацетилхолина также увеличивался jHa уровне лобной коры у животных, по |лучивших ДТС-холин, в гораздо больше |степени по сравнению с животными, получившими хлорид холина: содержание ацетилхолина в лобной коре возросло на 10% (хлорид холина) и на 35% (зна |чительная разница) - с ДТС-холином. Эти результаты показывают, что при .эквивалентных дозах холина (хлорид холина и ДТС-холина) гораздо большее :содержание холина и ацетилхолина в Дэазньпс областях мозга обеспечивается 1ДТС-ХОЛИНОМ.
I Клинические опыты с ДТС-холином были проведены в больнице Сальпет- риер, Паржи. Ниже приведены описание |этих опытов и результаты
ДТС-холин вводили в количестве 500 мг/день (1 капсула с 250 мг ДТС-холина утром и в полдень).„ Лече- |ние продолжалось 3 мес.,двойные слепые опыты или плацебо проводили на параллельных группах. Результаты Доказывают значительное улучшение |(р 0,01) тестов мозгового наруше- |ния (мини психическое состояние,. VRT |Бентрн) и нарушения памяти (VRT Бен- |тон, WAIS, профиль мнезической про- |изводительности, RRM2) - это улучше- ;ние имеет значительное клиническое выражение (р 0,05) о : Клинические исследования ДТС-холи :на.
I Предварительная фаза II: исследо- вание эффективности и толерантности ДТС-холина у больных, страдаюг р х стаческим слабоумием типа Алземейра (профессор Ранкурель, больница Саль- петриэр).
Речь идет .о двойных слепых опытах ипи плацебо на параллельных группах, проведенных на 30 амбулаторных пациентах в возрасте 50-70 лет, страда- юш;нх прогрессирутмцей дегенеративной формой слабоумия типа Алземейера, диагностированной по следуюрщм критериям: критерии слабоумия DCM-III, 1чи ни психическоесостояние между 10 и 20 (Mini Mental State) MMS, шкала
Кашинского 7, отсутствие депрессии по MADRS, отсутствие причин излечения токсическая, метаболическая.
5
0
5
0
5
эндокринная, опухолевая, гидрацефали- ческая (сканирование).
Все больные были в стадии II по классификации SIO GRP:N критериями оценки были (день О и день 90): WAIS, тест на визуальное восприятие Бенто- на, фигуры Рея, MMS профиль мнезической производительности RRM2, клиническая оценка врачом и семьей (аналогичные шкалы).
Больные, разделенные на две параллельные группы по 15 пациентов, получали в течение 3 мес. либо 2 кап- сулы по 125 мг ДТС-холина (250 мг/24 ч), либо 2 капсулы плацебо,
Результаты, приведенные в предлагаемой таблице, являются очень обнадежив аюгдами по следуюш ш причинам: резкое улуч1чение по Бентону, значительное у лучте-кие всех исследуемых параметров, включая такой инструментальный анализ как мини ментальстат, чувствительность которого к изменениям всегда считается слабой, резкое улучшение активности пациентов как по мнению врача, так и по мнению семьи.
Данное соединение проявляет более высокую терапевтическзто активность при лечении церебральных дегенеративных заболеваний, таких как старческое сумасшествие, болезнь Алземейера и сумасшествие Алземейера в сравнении с известным средством (хлоридом холим на) вследствие способности полученного соединения выделять в различные участки мозга холин и нейромедиатор - ацетилхолин, которые обычно поражаются при церебральных заболеваниях.
40
Формула
изобретени
Способ.получения диэтилдитиокарба- мата холина формулы
50
ел, вГ ™ c Hs -l-q™ - -™ -™
®
55
отли.чающийся тем, что хлорид холина обрабатьшают трехвод- ным диэтилдитиокарбаматом натрия.
Разница
Резулг - тати
Реферат
Изобретение касается четвертичных аммониевых соединений, в частности получения диэтилдитиокарбамата холина, проявляющего активность при лечении церебральных дегенеративных заболеваний (старческого сумашествия и болезни Алземейера). Цель - создание нового соединения указанного класса с лучшей активностью. Синтез ведут обработкой хлорида холина трехводным диэтилдитиокарбаматом натрия, выход 99%. Новое соединение практически не токсично ЛД50= 1,4-1,7 г/кг, эффективная доза 0,1-0,3 г/кг. 1 табл.
Формула
