Код документа: RU2164224C2
Настоящее изобретение относится к новым органическим соединениям, способам их получения, фармацевтическим составам, содержащим их и их применению в качестве фармацевтических препаратов, особенно для лечения пролиферативных и/или воспалительных нарушений и рака.
Более конкретно изобретение относится к
соединениям формулы I
Соединения по изобретению обладают интересной фармакологической, в особенности антипролиферативной, противовоспалительной и противоопухолевой активностью.
Алкил как таковой или как часть заместителя, такого как алкоксил, предпочтительно состоит из 1-4 атомов углерода, в частности является метилом или этилом. Ацил предпочтительно представляет собой остаток карбоновой кислоты, в частности алкил-, арилалкил- или арилкарбоновой кислоты, причем арил предпочтительно является фенилом, а алкиленовая часть ацила, включая карбонильную группу, предпочтительно состоит из 1-5 атомов углерода. Предпочтительная ацильная группировка является ацетилом.
В предпочтительной группе соединений по изобретению R1 и R2 независимо являются алкоксилом, состоящим из 1-5 атомов углерода, W представляет собой -CH2CH2-, а R3 и R4 представляют собой систему конденсированных колец, как указано выше.
Предпочтительной группой являются соединения формулы
Следующей предпочтительной группой являются соединения формулы
Если не обозначено иным образом, алкильные группировки представляют собой предпочтительно прямые или разветвленные цепи, содержащие 1-12, и особенно 1-8 атомов углерода, в частности 1-6 и, особенно 1-4 атомов углерода. Любой низший алкил, присутствующий в качестве заместителя или в составе заместителя, представляет собой прямую или разветвленную цепь и содержит предпочтительно от 1 до 4, особенно 1-2 атома углерода.
Следующую предпочтительную группу соединений по изобретению составляют соединения формулы
Следующая в равной степени предпочтительная группа соединений по изобретению
представляет собой соединения формулы
В подгруппе соединений формулы Iss R1ss представляет собой метоксил или этоксил. В следующей подгруппе R2ss представляет собой метоксил или этоксил. В следующей подгруппе Wss представляет собой -CH2CH2-. В следующей подгруппе R3ss и R4ss вместе с кольцом B образуют систему конденсированных колец формулы ass или bss, где R9s представляет собой алкил или алкоксил, содержащий каждый 1-4 атома углерода; R10ss представляет собой водород, метил или 2,5- или 2,6-диметоксибензил; Z представляет собой О; V представляет собой N, а символ
В настоящем изобретении также предлагаются способы получения соединений формулы I, включающие в себя
а) для получения соединений формул Iа и Iб
Способ а) может быть осуществлен посредством стандартных процедур гидрирования двойных или тройных связей, предпочтительно с помощью водорода в сочетании с катализаторами гидрирования, такими как Pd, Pt или Rh, наиболее предпочтительно Pd на угле, и восстановления основания Шиффа (Schiff) (формула IIв) с помощью комплексного гидрида металла, такого как цианоборогидрид натрия, в инертном растворителе, например спирте.
Способ б) осуществляют согласно стандартным реакциям синтеза гетероциклов, соединенных с бензольным кольцом, начиная с соответствующим образом замещенных производных бензола.
Способ в) осуществляют согласно стандартным процедурам О- и N-алкилирования с помощью бензилгалогенидов, - сульфатов или -мезилатов, предпочтительно бензилбромидов, в присутствии подходящего основания, предпочтительно карбонатов или гидридов щелочных металлов, в инертном и предпочтительно полярном растворителе, таком как ацетон или диметилформамид, при температурах между -20 и 120oC, предпочтительно между комнатной температурой и 60oC.
Способ г) осуществляют согласно стандартным процедурам сочетания винилстаннанов (сочетание Стилла (Stille)) или винилборанов, предпочтительно приготовленных путем добавления боргидридов к алкинам формулы VIIIб, с арилгалогенидами, предпочтительно арилиодидами или арилбромидами, в условиях катализа переходным металлом, предпочтительно с помощью палладиевых катализаторов.
Исходный материал формулы IIа может быть получен посредством взаимодействия соединения формулы
Исходный материал формулы IIб может быть получен в результате реакции взаимодействия
соединения формулы
Исходные соединения формулы III могут быть получены аналогично описанному для соединений формулы I.
Другие исходные материалы и промежуточные соединения либо известны, либо могут быть получены согласно известным методам или аналогично описанному в примерах.
В следующих примерах, которые иллюстрируют данное изобретение, но никоим образом не ограничивают его объем, ссылки на температуры приводятся в градусах Цельсия.
Пример 1: метиловый эфир 5-[2-(2,
5-диметоксифенил)этил]-2- ацетиламинобензойной кислоты (способ а)
150 мг метилового эфира 5-[2-(2,5-диметоксифенил)этенил]-2-ацетиламинобензойной кислоты растворяют в 10 мл этилацетата. После
добавления 25 мг палладия (10% на угле) смесь оставляют размешиваться на ночь в атмосфере водорода и фильтруют через броунмиллерит. Фильтрат выпаривают в вакууме для того, чтобы получить указанное
соединение в виде бесцветных кристаллов.
т.пл.: 81-83o.
Аналогично описанному в примере 1 получают соединения формулы А с прилагаемой к ней таблицей 1.
Пример 6: 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]-4-этил-хиназолин (способ а)
150 мг 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]-4-этил-хиназолина растворяют в 10 мл этилацетата. После добавления 20 мг
палладия (10% на угле) смесь оставляют размешиваться на ночь в атмосфере водорода и затем фильтруют через броунмиллерит. Фильтрат выпаривают в вакууме и осадок кристаллизуют из циклогексана для того,
чтобы получить указанное соединение в виде бесцветных кристаллов.
т.пл.: 74o.
Аналогично описанному в примере 6 получают соединения формул Б, В и Г с прилагаемой таблицей 2.
Пример 21: 6-(2,5-диметоксибензиламино)-3Н-хиназолин-4-он (способ a)
Смесь из 200 мг 6-амино-3Н-хиназолина-4-она и 206 мг 2,5-диметоксибензальдегида в
12 мл обезвоженного метанола нагревают до 60o в течение 16 часов. После охлаждения преципитат желтого цвета фильтруют и ресуспендируют в 10 мл обезвоженного метанола. Эту смесь обрабатывают
85 мг цианоборогидрида натрия и нагревают в течение нескольких минут до тех пор, пока все компоненты не растворятся. После перемешивания в течение 2 часов при комнатной температуре смесь выливают в
воду и экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивают сульфатом магния и выпаривают в вакууме. Искомое чистое соединение получают путем кристаллизации из этанола в виде
бесцветных кристаллов.
т.пл.: 203-205o.
Пример 22: этиловый эфир (2,5-диметоксифенил)этил]-4-гидрокси-3-хинолин-карбоновой кислоты (способ б)
1,48 г
диэтил{4-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]анилино}метиленмалонат растворяют в 20 мл теплого дифенилового эфира и кипятят с обратным холодильником в течение 30 минут. Холодную смесь разводят пентаном,
осадок собирают и растворяют в дихлорметане. Раствор высушивают сульфатом магния и растворитель подвергают перегонке. Осадок кристаллизуют из изопропанола для того, чтобы получить вышеуказанное
соединение в виде желтоватых кристаллов. т.пл.: 195-198o.
Пример 23: 6-(2,5-диметоксибензилокси)-3Н-хиназолин-4-он (способ б)
90 мг 5-(2,
5-диметоксибензилокси)-2-формиламинобензамида нагревают без растворителя в аппарате Кугельрора (Kugelrohr) при 170o в течение 1 часа. Полученный твердый осадок очищают хроматографией на
силикагеле (этилацетат) для того, чтобы получить бесцветные кристаллы. т.пл.: 155-158o.
Пример 24: 3-(2,6-диметоксибензил)-6-(2,5-диметоксибензилокси)-3Н- хиназолин-4-он
(способ в)
12 мг гидрида натрия (80% в минеральном масле) добавляют к раствору 115 мг 3-(2,6-диметоксибензил)-6-гидрокси-3Н-хиназолина-4-она в 10 мл обезвоженного диметилформамида. После
перемешивания в течение 30 минут при комнатной температуре добавляют 85 мг 2,5-диметоксибензилбромида и продолжают размешивание всю ночь. Растворитель отгоняют в вакууме и остаток фракционируют между
водным буферным раствором (pH7) и этилацетатом. Органическую фазу отделяют, высушивают сульфатом магния и выпаривают в вакууме. Искомое чистое соединение получают после хроматографии на силикагеле
(толуол/этилацетат = 2/1) в виде бесцветных кристаллов. т.пл.: 148-150o.
Аналогично описанному в примере 24 получают соединения формул Б и В с прилагаемой таблицей 3.
Пример 28: (Е)-6-[2-[2,5-диметоксифенил)этенил)] -4- метоксихиназолин (способ г)
500 мг 2,5-диметоксифенилацетилена растворяют в 30 мл обезвоженного тетрагидрофурана и обрабатывают
450 мг 9-боранбицикло(3.3.1)нонана при 0o в атмосфере аргона. После перемешивания в течение 2 часов при комнатной температуре к винилборановому промежуточному продукту добавляют 650 мг
6-иодо-4-метоксихиназолина, 800 мг фосфата калия, 64 мг тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) и 15 мл диоксана. Смесь интенсивно размешивают при 85o в течение 3 часов, затем выливают в воду и
экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивают сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Остаток подвергают хроматографии на силикагеле для того, чтобы получить искомое
соединение в виде желтоватого масла.
1H-ЯМР (CDCl3): 8,77 (s, 1Н); 8,19 (d, J = 2 Гц, 1Н); 8,10 (dd, J = 2+8,8 Гц, 1Н); 7,90 (d, J=8,8 Гц, 1Н); 7,60 (d, J = 16,5 Гц, 1Н); 7,24 (d, J = 16,5 Гц, 1Н); 7,18 (d, J = 2,4 Гц, 1Н); 6,80-6,90 (m, 2H); 4,21 (s, 3H); 3,88 (s, 3H); 3,84 (s, 3H).
Аналогично описанному в примере 28 получают соединение формулы Б с прилагаемой таблицей 4.
Пример 30: 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]-3-метил-4-хиназолин (способ д)
34 мг 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этил] -4-хиназолинон растворяют в
4 мл обезвоженного диметилформамида и обрабатывают 4 мг гидрида натрия (80% в минеральном масле). После перемешивания в течение 30 минут добавляют 0,1 мл метилиодида и продолжают перемешивание в
течение часа. Смесь выливают в воду и экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические слои высушивают сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Остаток подвергают хроматографии на силикагеле
(циклогексан/этилацетат = 1/2), чтобы получить искомое соединение в виде бесцветных кристаллов, т.пл.: 83-85o.
Аналогично описанному в примере 30 получают следующие соединения формул Б и В с прилагаемой таблицей 5.
Пример 35: 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]-2,3-дигидро-1Н- хиназолин-4-он (способ д)
130 мг 6-[2-(2,
5-диметоксифенил)этил]- 3Н-хиназолин-4-она растворяют в 3 мл уксусной кислоты и обрабатывают 58 мг борогидрида натрия. После перемешивания в течение 5 часов при комнатной температуре смесь выливают в
2 М водный буферный раствор (pH7) и экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические слои высушивают сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Остаток подвергают хроматографии на силикагеле для
того, чтобы получить искомое соединение в виде бесцветных кристаллов. т.пл.: 138-140o.
Аналогично описанному в примере 35 получают соединения формулы Г с прилагаемой таблицей 6.
Пример 37: 4-амино-6-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]-хиназолин (способ д)
Раствор 50 мг 4-диацетиламино-6-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]-хиназолина и 10 мл 1 H водного
раствора гидроксида натрия в диоксане перемешивают 3 часа при комнатной температуре. Смесь выливают в воду и экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивают сульфатом магния
и концентрируют в вакууме. Остаток переносят в метанол, перемешивают в течение 30 минут, фильтруют и концентрируют снова. С помощью хроматографической очистки (силикагель, этилацетат) получают искомое
соединение в виде бесцветных кристаллов, т.пл.: 160-165o.
Пример 38: 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этил] -4-изопропилоксихиназолин (способ д)
150 мг 6-[2-(2,
5-диметоксифенил)этил]-3Н-хиназолин-4-она кипятят с обратным холодильником совместно с 5 мл оксихлорида фосфора и 100 мг пентахлорида фосфора в течение 30 минут. Смесь концентрируют в вакууме и затем
фракционируют между 2 М охлажденным на льду водным буфером (pH 7) и этилацетатом. Органический слой отделяют, высушивают и выпаривают в вакууме, получая неочищенный продукт, 6-[2-(2,
5-диметоксифенил)этил]-4-хлорохиназолин, который может быть использован непосредственно в следующей стадии или быть очищен методом хроматографии (силикагель, циклогексан/этилацетат = 1/1). Неочищенный
промежуточный продукт добавляют к раствору изопропоксида натрия (приготовленного из 8,3 мг натрия в 20 мл изопропанола) в изопропаноле. Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 1 часа,
концентрируют в вакууме и выливают в воду, С помощью экстракции этилацетатом получают неочищенное искомое соединение, которое очищают хроматографией на силикагеле (циклогексан/этилацетат = 2/1),
получая бесцветное масло.
1H-ЯМР (CDCl3): 8,73 (s, 1Н); 7,92 (d, J = 2 Гц, 1Н); 7,82 (d, J=8,5 Гц, 1H); 7,66 (dd, J=2+8,5 Гц, 1H); 6,68-6,80 (m, 3H); 5,62 (sep, J=6,2 Гц, 1Н); 3,77 (s, 3H); 3,71 (s, 3H); 2,91-3,1 (m, 4H); 1,47 (d, J=6,2 Гц, 6H).
Аналогично описанному в примере 38 получают соединения формулы I с прилагаемой таблицей 7.
Пример 41: 6-[2-(5-гидрокси-2-метоксифенил)этил] -3Н- хиназолин-4-он (способ д)
90 мг 6-[2-(5-гидрокси-2- метоксифенил)этил]-4-метоксихиназолина растворяют в 8 мл метанола и
обрабатывают 1 мл 4 H водной соляной кислоты. Смесь перемешивают в течение 16 часов при комнатной температуре, затем выливают в 2 M водный буферный раствор (pH 7) и экстрагируют этилацетатом.
Объединенные органические экстракты высушивают сульфатом магния и выпаривают в вакууме. Остаток хроматографируют на силикагеле (дихлорометан/метанол = 9/1), получая искомое соединение в виде
бесцветных кристаллов, т.пл.: 221-224o.
Пример 42: метиловый эфир 5-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]-2-метоксикарбонил-аминобензойной кислоты (способ д)
Смесь 115 мг
метилового эфира 5-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]-2- аминобензойной кислоты и 50 мг 4-диметиламинопиридина в 6 мл обезвоженного дихлорметана обрабатывают 35 мг метилхлороформиата и перемешивают в
течение 3 часов при комнатной температуре. Затем смесь выливают в водный буферный раствор (pH 7) и экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивают сульфатом магния и
концентрируют в вакууме. Неочищенный продукт очищают путем хроматографии на силикагеле (циклогексан/этилацетат = 8/1), получая искомое соединение в виде бесцветных кристаллов, т.пл.: 80-82o
.
Пример 43: метиловый эфир 5-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]- 2-метиламинобензойной кислоты (способ д)
110 мг метилового эфира 5-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]-2-аминобензойной
кислоты растворяют в 6 мл обезвоженного диметилформамида и обрабатывают 13 мг гидрида натрия (80% в минеральном масле). После перемешивания в течение 30 минут при комнатной температуре добавляют 0,2
мл метилиодида и продолжают перемешивание в течение ночи. Растворитель отгоняют в вакууме и остаток фракционируют между водным буферным раствором (pH 7) и этилацетатом. Отделенный органический слой
высушивают сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Осадок подвергают хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат = 7/1), получая искомое соединение в виде бесцветных кристаллов, т.пл.: 73o.
Аналогично описанному в примере 43 получают соединение формулы А с прилагаемой таблицей 8.
Пример 45: этиловый эфир 5-[2-(2,
5-диметоксифенил)этил]-2- ацетиламинобензойной кислоты (способ д)
Смесь 93 мг бутилового эфира 5-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]-2-ацетиламинобензойной кислоты, 100 мг бромида лития, 55 мг 1,
8-диазабицикло[5.4.0] ундека-7-ена и 4 мл безводного метанола кипятят с обратным холодильником в течение 3 часов. После нейтрализации 0,1 H водной соляной кислотой смесь экстрагируют этилацетатом.
Объединенные органические экстракты высушивают сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Чистое искомое соединение получают путем хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат = 6/1) в виде
бесцветных кристаллов, т.пл.: 93o.
Аналогично описанному в примере 45 получают соединение формулы А с прилагаемой таблицей 9.
Аналогично описанному в примере 45 получают соединение формулы Б с прилагаемой таблицей 10.
Пример 48: метиловый эфир 5-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]-2- аминобензойной кислоты (способ д)
87 мг метилового
эфира 5-[2- (2,5-диметоксифенил)этил]-2-ацетиламинобензойной кислоты растворяют в 6 мл метанола, обрабатывают 1 мл 4 H соляной кислоты и перемешивают в течение 48 часов при комнатной температуре.
Смесь нейтрализуют добавлением 2 H водного раствора гидроксида натрия и экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические слои высушивают сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Очистка путем
хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат = 6/1) дает искомое соединение в виде бесцветных кристаллов, т.пл.: 50-55o.
Аналогично описанному в примере 48 получают соединения формулы А с прилагаемой таблицей 11.
Пример 52: 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]-4-гидроксихинолин (способ д)
а) 300 мг этилового эфира 6-[2-(2,
5-диметоксифенил)этил]-4- гидрокси-3-хинолинкарбоновой кислоты растворяют в 10 мл метанола, обрабатывают 6 мл 10%-ного водного раствора гидроксида калия и кипятят с обратным холодильником в течение 2
часов. Смесь выливают в 1 H соляную кислоту и экстрагируют дихлорметаном, содержащим 3% этанола. Органические слои высушивают сульфатом магния и выпаривание растворителя дает соответствующую свободную
карбоновую кислоту в виде бесцветных кристаллов, т.пл.: 148-151o.
б) 150 мг 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]-4-гидрокси-3- хинолинкарбоновой кислоты растворяют в горячем дифениловом эфире и раствор кипятят с обратным холодильником в течение 1 часа. Холодную реакционную смесь разводят этилацетатом и экстрагируют 6 H соляной кислотой. Кислые водные слои объединяют, отмывают этилацетатом и затем нейтрализуют (pH 7), используя водный раствор гидроксида аммония. Экстракция этилацетатом, сушка сульфатом магния и выпаривание дают промежуточный продукт, который очищают путем хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол = 95/5), получая искомое соединение в виде желтоватых кристаллов, т.пл.: 141-145o.
Аналогично описанному в примере 52 получают соединение формулы Б с прилагаемой таблицей 12.
1H-ЯМР (CDCl3): 8,36 (d, J = 2 Гц, 1Н); 7,52 (dd, J=2+8,6 Гц, 1Н); 7,48 (d, J=7,7 Гц, 1Н); 7,32 (d, J=8,6 Гц, 1H); 6,68-6,78 (m, 3H); 6,26 (d, J=7,7 Гц); 3,80 (s, 3H); 3,79 (s, 3H); 3,74 (s, 3H); 2,90-3,04 (m, 4H).
Исходные материалы могут быть приготовлены следующим образом:
А) метиловый эфир 5-[2-(2,5-диметоксифенил)этенил]-2- ацетиламинобензойной кислоты
4,1 ммоль н-бутиллития (0,4 мл 1,6 М раствора в гексане) добавляют при -40o к раствору 412
мг диизопропиламина в 30 мл безводного тетрагидрофурана. После перемешивания в течение 30 минут добавляют 672 мг бромида 2,5-диметоксибензилтрифенилфосфония брома при этой температуре. Суспензию
перемешивают еще 30 минут, охлаждают до -70o и обрабатывают 300 мг метилового эфира 2-ацетиламино-5- формилбензойной кислоты в 8 мл абсолютного тетрагидрофурана. Смесь перемешивают 1 час
при -70o и 2 часа при комнатной температуре и затем выливают в водный раствор хлорида аммония. Экстракции этилацетатом и выпаривание дает промежуточный продукт, который подвергают
хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат = 9/1) для получения искомого соединения в виде смеси E-и Z-изомеров.
1H-ЯМР (CDCl3): 11,05 (s, 1Н E-изомер); 11,00 (s, 1Н Z-изомер); 8,72 (d, J= 8,8 Гц, 1Н E-изомер); 8,52 (d,J=8,8 Гц, 1Н Z-изомер); 8,16 (d, J=2,2 Гц, 1Н E-изомер); 7,95 (d, J=2,2 Гц, 1Н Z-изомер); 7,74 (dd, J=2,2+8,8 Гц, 1Н E-изомер); 7,42 (dd,J=2, 2+8,8 Гц, 1Н Z-изомер); 7,41 (d, J=16,4 Гц, 1Н E-изомер); 7,14 (d, J=2,6 Гц, 1Н E-изомер); 7,05 (d, J=16,4 Гц, 1Н E-изомер); 6,72-6,89 (m); 6,67 (d, J=12,2 Гц, 1Н Z-изомер); 6,55 (d, J=12,2 Гц, 1Н Z-изомер); 3,97 (s, 3Н E-изомер); 3,87 (s); 3,83 (s, 3Н E-изомер); 3,78 (s, 3Н Z-изомер); 3,59 (s, 3Н Z-изомер); 2,25 (s, 3Н E-изомер); 2,22 (s, 3Н Z-изомер).
Б) метиловый эфир
(Е)-5-[2-(2,6-диметоксифенил)этенил]-2- ацетиламинобензойной кислоты
Искомое вещество получают аналогично описанному в разделе А)
1H-ЯМР (CDCl3): 11,07 (s, 1Н);
8,68 (d,J=8,8 Гц, 1Н); 8,13 (d,J=2,2 Гц, 1Н); 7,76 (dd,J=2,2+8,8 Гц, 1Н); 7,54 (d,J=16,6 Гц, 1Н); 7,41 (d,J=16,6 Гц, 1Н); 7,18 (t, J=8,3 Гц, 1Н); 6,60 (d,J=8,3 Гц, 2Н); 3,96 (s, 3Н); 3,91 (s, 6Н); 2,
25 (s, 3Н).
В) бутиловый эфир (E/Z)-5-[2-(2,5-диметоксифенил)этенил]-2- ацетиламинобензойной кислоты
Искомое вещество получают аналогично описанному в разделе А)
1H-ЯМР (CDCl3): 11,10 (s, 1Н E-изомер); 11,06 (s, 1Н Z-изомер); 8,70 (d, J=8,8 Гц, 1Н E-изомер); 8,54 (d,J=8,8 Гц, 1Н Z-изомер); 8,12 (d,J=2,2 Гц, 1Н E-изомер); 7,96 (d,J=2,2 Гц, 1Н
Z-изомер); 7,74 (dd,J=2,2+8,8 Гц, 1Н E-изомер); 7,42 (dd, J=2,2+8,8Гц, 1Н Z-изомер); 7,41 (d,J=16,4 Гц, 1Н E-изомер); 7,14 (d, J=2,6 Гц, 1Н E-изомер); 7,05 (d, J=16,4 Гц, 1Н E-изомер); 6,72-6,89 (m);
6,67 (d,J=12,2 Гц, 1H Z-изомер); 6,55 (d,J=12,2 Гц, 1Н Z-изомер); 4,36 (t, J= 6,5 Гц, 2Н E-изомер); 4,23 (t, J=6,5 Гц, 2Н Z-изомер); 3,86 (s, 3Н E-изомер); 3,82 (s, 3Н E-изомер); 3,77 (s, 3Н Z-изомер);
3,58 (s, 3Н Z-изомер); 2,24 (s, 3Н E-изомер); 2,21 (s, 3Н Z-изомер); 1,20-1,85 (m); 1,02 (t, J=7,3 Гц, 3Н E-изомер); 0,96 (t, J=7,3 Гц, 3Н Z-изомер).
Г) 6-[2-(2,
5-диметоксифенил)этинил]-4-этилхиназолин
а) 6-иодо-4-этилхиназолин
154 мг натрия растворяют в 20 мл обезвоженного метанола и обрабатывают 1,2 г 4-хлоро-6-иодо-хиназолина. Смесь
кипятят с обратным холодильником в течение 1 часа и затем растворитель отгоняют. Остаток фракционируют между водным буферным раствором (pH 7) и этилацетатом. Водный слой экстрагируют этилацетатом,
высушивают сульфатом магния и выпаривают в вакууме. Остаток растворяют в смеси циклогексан/этилацетат (1/1) и фильтруют через силикагель. Искомое соединение получают после выпаривания растворителя в
виде чуть желтоватых кристаллов. т.пл.:110-113o.
б) 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этинил]-4-этилхиназолин
Аргон пропускают через раствор 200 мг
6-иодо-4-метоксихиназолина в 12 мл обезвоженного диметилформамида в течение 15 минут. 3атем добавляют 40 мг тетракис(трифенилфосфин)-палладия, 113 мг (2,5-диметоксифенил)ацетилена, 11 мг иодида
меди(I) и 220 мг триэтиламина, а затем смесь нагревают до 60o в течение 2 часов. Растворитель отгоняют в вакууме и остаток фракционируют между водой и этилацетатом. Органический слой
отделяют, высушивают и концентрируют в вакууме. Чистое искомое соединение получают после хроматографии (силикагель, циклогексан/этилацетат=2/1) в виде бесцветных кристаллов, т.пл. : 103-105o
.
Аналогично описанному в разделе Г) получают следующие соединения формулы IIб (Д-С):
Д) 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этинил]хиназолин-4-он, т.пл.:180-183o.
Е) 6-[2-(2,6-диметоксифенил)этинил]-4-метоксихиназолин, т.пл.: 140-142o
Ж) 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этинил]-4-этоксихиназолин, т.пл.: 75-77o
З)
6-[2-(2,6-диметоксифенил)этинил]хиназолин-4-он, т.пл.: 219-221o
И) 6-[2-(2-бензилокси-5-метоксифенил)этинил]-4-метоксихиназолин, т.пл.: 112-114o
К) 6-[2-(2,
5-диметоксифенил)этинил]-4-метилхиназолин, т.пл.: 113-116o
Л) 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этинил]-4-метоксихиназолин, т.пл.: 103-105o
М) 6-[2-(2,
5-диэтилфенил)этинил]-4-этилхиназолин, т.пл.: 56o
Н) 6-[2-(2,6-диметоксифенил)этинил]-4-этилхиназолин, т.пл.: 155-157o
О) 5-[2-(2,
5-диметоксифенил)этинил]-2-аминобензамид
1H-ЯМР (d6-DMCO): 7,90 (br. s, 1H); 7,75 (d, J=2Гц, 1Н); 7,27 (dd, J= 2+8,5 Гц, 1Н); 7,15 (br.s, 1H); 6,93-7,05 (m, 4H); 6,90 (dd,
J=3+8,8 Гц, 1H); 6,71 (d, J=8,5 Гц, 1H); 3,79 (s,3H); 3,72 (s, 3H).
П) 6-[2-(2,5-диэтоксифенил)этинил]-4-этилхиназолин
1H-ЯМР (CDCl3): 9,21 (s, 1H); 8,30
(m, 1H); 7,93-8,04 (m, 2H); 7,08 (m, 1Н); 6,82-7,1 (m, 2H); 4,13 (qua, J=7 Гц, 2H); 4,02 (qua, J=7 Гц, 2H); 3,32 (qua, J=7,5 Гц, 2H); 1,50 (t,J=7 Гц, 3H); 1,48 (t, J=7,5 Гц, 3H); 1,4 (t, J= 7 Гц,
3Н).
Р) 6-[2-(5-бензилокси-2-метоксифенил)этинил]-4-метоксихиназолин
1H-ЯМР (CDCl3): 8,81 (s, 1Н); 8,37 (d,J=1,8 Гц, 1Н); 7,96 (dd, J=1,8+8,6 Гц, 1Н); 7,
89 (d,J=8,6 Гц, 1Н); 7,30-7,50 (m, 5Н); 7,18 (d,J=3 Гц, 1Н); 6,98 (dd, J= 3+9 Гц, 1H); 6,85 (d, J=9 Гц, 1Н); 5,05 (s, 2H); 6,20 (s, 3Н); 3,90 (s, 3Н).
С) 6-[2-(2,
5-диметоксифенил)]хиназолин т.пл.: 100-102o
Т) 4-диацетиламино-6-[2-(2,5-диметоксифенил)этинил]хиназолин
а) 4-амино-6-иодохиназолин
500 мг
4-хлоро-6-иодохиназолина обрабатывают 30 мл водного раствора гидроксида аммония и кипятят с обратным холодильником 2 часа. После охлаждения осажденное искомое соединение фильтруют и высушивают.
1H-ЯМР (d6-DMCO): 8,66 (d, J= 1,8 Гц, 1Н); 8,4 (s, 1Н); 8,02 (dd, J= 1,8+8,7 Гц, 1Н); 7,85 (br.s, 2Н); 7,45 (d, J=8,7 Гц, 1Н).
б)
4-диацетиламино-6-иодохиназолин
Смесь 340 мг 4-амино-6-иодохиназолина, 1 мл пиридина и 20 мл уксусного ангидрида нагревают до 80o в течение 1 часа. Холодную смесь выливают в лед с
водой, энергично перемешивают и экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические экстракты высушивают сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Искомое соединение получают путем
хроматографической очистки на силикагеле (этилацетат/циклогексан = 2/1).
1H-ЯМР (CDCl3): 9,36 (s, 1Н), 8,22 (dd, J=1,9+8,9 Гц, 1Н); 8,17(d, J=1,8 Гц, 1Н); 7,90 (d, J=8,9 Гц, 1Н); 2,34 (s, 6Н).
в) 4-диацетиламино-6-[2-(2,5-диметоксифенил)этинил]-хиназолин
Искомое соединение получают аналогично описанному в пункте В/б.
1H-ЯМР (CDCl3): 9,33 (s, 1Н); 8,09 (dd, J=0,7+8,8 Гц, 1Н); 8,04 (dd,J= 1,65+8,8Гц, 1Н); 7,95 (dd,J=0,7+1,65 Гц, 1H); 7,06 (d,J=2,9 Гц, 1Н); 6,90 (dd, J= 2,9+9 Гц, 1Н); 6,82 (d,J=9 Гц, 1Н); 3,86 (s, 3H); 3,76 (s, 3H); 2,30 (s, 6Н).
У) 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этинил]-4-метиламинохиназолин
а) 6-иодо-4-метиламинохиназолин:
Готовят аналогично методу,
описанному для синтеза 4-амино-6-иодохиназолина. т.пл.: 245o.
б) 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этинил]-4-метиламинохиназолин
Искомое соединение получают аналогично тому,
как описано в пункте Г/б.
Ф) 6-[2-(2,5-диметоксифенил)этинил]-хиназолин
X) диэтил{4-[2-(2,5-диметоксифенил)этил]анилино}метиленмалонат
Смесь 820 мг 4-[(2,
5-диметоксифенил)этил]анилина и 690 мг диэтилэтоксиметиленмалоната нагревают до 95o в течение 2 часов. При охлаждении продукт кристаллизуется и его используют без дальнейшей очистки.
1H-ЯМР (CDCl3): 10,98 (d, J= 13,8 Гц, 1Н); 8,51 (d, J=13,8 Гц, 1Н); 7,14-7,22 (m, 2Н); 7,01-7,09 (m, 2Н); 6,78 (d, J=8,7 Гц, 1Н); 6,70 (dd, J= 3+8,7 Гц, 1Н); 6,66 (d, J=3 Гц, 1Н); 4,31 (qua, J=7,1 Гц, 2Н); 4,24 (qua,J= 7,1 Гц, 2Н); 3,78 (s, 3H); 3,74 (s, 3H); 2,86 (s, 4H); 1,38 (t, J=7,1 Гц, 3H); 1,33 (t, J=7,1 Гц, 3Н).
Ц) 5-(2,
5-диметоксибензилокси)-2-формиламинобензамид
Раствор 140 мг 2-формиламино-5-гидроксибензамида в 15 мл обезвоженного диметилформамида обрабатывают последовательно 160 мг карбоната калия и 180
мг 2,5-диметоксибензилбромида. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов и затем растворитель отгоняют в вакууме. Остаток фракционируют между водой и этилацетатом и отделенный
органический слой высушивают сульфатом магния и выпаривают в вакууме. Сырой продукт очищают путем хроматографии на силикагеле (этилацетат) и получают искомое соединение в виде бесцветных кристаллов,
т.пл.: 135-138o.
Ч) 3-(2,6-диметоксибензил)-6-гидрокси-3Н-хиназолин-4-он
76 мг гидрида натрия (80% в минеральном масле) добавляют к суспензии 400 мг
6-гидрокси-3Н-хиназолин-4-она в 20 мл обезвоженного диметилформамида. После перемешивания в течение 30 минут при комнатной температуре добавляют 560 мг 2,6-диметоксибензилбромида и продолжают
перемешивание в течение ночи. Растворитель перегоняют в вакууме и остаток фракционируют между водным буферным раствором (pH 7) и этилацетатом. Органическую фазу отделяют, высушивают сульфатом магния и
выпаривают в вакууме. При проведении хроматографии на силикагеле после минорного количества N,O-бис-алкилированного продукта получают искомое соединение в виде бесцветных кристаллов, т.пл.:
243-245o.
Ш) 3-(2,5-диметоксибензил)-6-гидрокси-3Н-хиназолин-4-он
Готовят аналогично способу, описанному в пункте Ц). т.пл.: 203o.
Щ)
6-гидрокси-4-метоксихиназолин
Смесь 200 мг 6-гидрокси-3Н-хиназолин-4-она и 5 мл фосфорилхлорида кипятят с обратным холодильником в течение 2 часов. Избыток фосфорилхлорида отгоняют в вакууме
и остаток переносят в раствор метоксида натрия (приготовленного из 80 мг натрия) в обезвоженном метаноле. После кипячения с обратным холодильником в течение 2 часов растворитель отгоняют и остаток
фракционируют между водным буферным раствором (pH 7) и этилацетатом. Органическую фазу отделяют, высушивают сульфатом магния и выпаривают в вакууме. Сырой продукт непосредственно используют в
следующей реакции или очищают путем хроматографии на силикагеле.
1H-ЯМР (d6-DMCO): 10,25 (br.s, 1Н); 8,61 (s, 1Н); 7,79 (d, J=9 Гц, 1Н); 7,45 (dd, J=2,8+9 Гц, 1Н); 7,32 (d,J=2,8 Гц, 1H); 4,09 (s, 3Н).
Соединения по данному изобретению обладают перспективными химиотерапевтическими свойствами и проявляют антипролиферативную/противовоспалительную
и/или противораковую активность при локальном, системном или пероральном введении. Эти активности могут быть продемонстрированы в следующих тестах, где используются следующие аббревиатуры:
BSA = бычий сывороточный альбумин
HaCaT = клеточная линия, известная как "human adult calcium temperature"
HeLa-O = линия опухолевых клеток из шеи человека
А375 = клеточная
линия человеческой меланомы
А549 = клеточная линия карциномы легких человека
MDA-MB-231 = клеточная линия карциномы груди человека
SW-480 = клеточная линия карциномы прямой
кишки человека
DMEM = среда Игла, модифицированная по Дульбекко
EGF = эпидермальный фактор роста
FCS = фетальная телячья сыворотка
TGFα = трансформирующий
фактор роста α
MDA-MB-435 = клеточная линия карциномы груди человека
HT-29 = клеточная линия карциномы прямой кишки человека
1. Ингибирование пролиферации в клеточной
линии человеческих кератиноцитов HaCaT:
Клетки HaCaT, спонтанно трансформированную, TGF α- и EGF-рецептор-положительную не-онкогенную клеточную линию человеческих кератиноцитов с
высокостабильными характеристиками фенотипической дифференциации нормальных кератиноцитов (Boukamp et al., J. Cell. Biol. 106: 761- 777 [1988]) культивируют в среде DMEM, обогащенной 2,2 г/л NaHCO3, 0,11 г/л пирувата натрия, 15 мМ HEPES, 5% фетальной телячьей сыворотки (FCS), пенициллином (100 ед/мл), стрептомицином (100 мкг/мл) и глутамином (доводя конечную концентрацию до 4 мМ). Для
исследования пролиферации клетки разделяли посредством трипсинизации, суспендировали в свежей среде и рассевали в 96-луночные титрационные микропланшеты по 2000-4000 клеток/0,2 мл на лунку. Через 24
часа среду заменяли свежей средой, содержащей градиентные концентрации опытного соединения. Через 3-4 дня инкубации оценивали степень клеточной пролиферации колориметрическим методом, используя
сульфородамин В (Skehan et al., J. Natl. Cancer Inst. 82: 1107-1112 [1990]). Результаты представлены по трем измерениям в виде среднего арифметического ± стандартное отклонение.
В этом тесте соединения по изобретению ингибируют клеточную пролиферацию со значениями ИК50, варьирующими в диапазоне от примерно 0,003 мкМ до примерно 3 мкМ.
2.
Ингибирование пролиферации опухолевых клеток:
Линии опухолевых клеток, например А375, А549, HeLa-O, MDA-MB-231, SW-480, MDA-MB 435 и HT-29, полученные из Американской коллекции типовых
культур (American Type Culture Collection), выращивают в среде, обогащенной 5-10% инактивированной нагреванием (56oC/30 минут) FCS и антибиотиками. В момент 60-90%-ного слияния клетки
собирают, трипсинизируют, суспендируют в свежей ростовой среде и рассевают в 96-луночные культуральные планшеты в концентрациях от 1000 до 5000 клеток на лунку. Клетки оставляют расти 3-4 дня до
конечного объема 0,2 мл на лунку, при 37oC во влажном инкубаторе при 5%-ной концентрации CO2 в атмосфере в присутствии градиентных концентраций опытного соединения. Степень
клеточной пролиферации измеряют колориметрическим методом, применяя MTS (Buttke et al., J.lmmunol, Meth. 157: 233-240 [1993]) для клеток, растущих в суспензии, или сульфородамин В для прикрепленных
клеток. В этой экспериментальной системе соединения по изобретению ингибируют клеточную пролиферацию с ИК50 в диапазоне 0,01-5 мкМ.
Соединения по изобретению, таким образом, показаны для применения в качестве антипролиферативных/противовоспалительных и противораковых агентов при лечении пролиферативных/воспалительных расстройств и рака, например при подавлении заболеваний, связанных с опухолями, в частности воспалительных/пролиферативных кожных заболеваний и рака кожи, а также аутоимунных заболеваний, таких как псориаз, атопический дерматит, контактный дерматит и родственные экзематозные дерматиты, себорейный дерматит, красный плоский лишай, пузырчатка, бычий пемфигоид, врожденный буллезный эпидермолиз, крапивница, ангионевротические отеки, васкулиты, эритемы, кожные эозинофиллии, красная волчанка, гнездная алопеция.
Конечно, для такого применения дозы будут различны в зависимости от, например, конкретного используемого соединения, способа введения и показанного лечения. Однако, в общем, удовлетворительные результаты получают, если соединения вводят в суточной дозе от примерно 1 мг/кг до примерно 30 мг/кг массы животного, приемлемо в виде разделенных доз от 2 до 4 раз в сутки. Для наиболее крупных млекопитающих суммарная суточная доза составляет от примерно 70 мг до примерно 2000 мг, при обычном введении, например в виде разделенных доз до 4 раз в сутки или в замедленной форме. Формы стандартной дозы содержат, например, от примерно 17,5 мг до примерно 1000 мг соединений в смеси с по меньшей мере одним твердым или жидким фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.
Соединения по изобретению могут вводиться способом, аналогичным известным стандартам для применения по таким показаниям. Соединения могут быть смешаны с традиционными химиотерапевтически приемлемыми носителями и разбавителями и, возможно, другими эксципиентами и могут вводиться, например, перорально, в таких формах, как таблетки и капсулы.
С другой стороны, соединения могут вводиться локально в таких традиционных формах, как мази или кремы, парентерально или внутривенно. Концентрации активного вещества будут, конечно, разниться в зависимости от, например, конкретно применяемого соединения, показанного лечения и природы формы. В общем, однако, получают удовлетворительные результаты, например, для форм локального введения в концентрациях от примерно 0,05 до примерно 5%, особенно от примерно 0,1 до 1% по массе.
Фармацевтические композиции, содержащие соединения по изобретению вместе с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем, также составляет часть изобретения, так же как и способ их приготовления путем смешивания вместе с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Данное изобретение также включает в себя соединения по изобретению для применения в качестве фармацевтических препаратов, особенно для профилактики или лечения кожных воспалительных и пролиферативных заболеваний и рака.
Данное изобретение дополнительно содержит способ профилактики или лечения воспалительных и пролиферативных кожных заболеваний и рака, при котором воздействуют терапевтически эффективным количеством соединения по изобретению на субъекта, нуждающегося в таком лечении.
Соединения по изобретению формулы Is и особенно соединения формулы Iss являются особенно предпочтительными.
Соединения из примеров 6, 16 и 17, а именно 6-[2-(2, 5-диметоксифенил)этил] -4-этил-хиназолин и, соответственно, соответствующие 4-метокси- и 4-метил-соединения, являются наиболее предпочтительными соединениями в качестве антипролиферативных/противовоспалительных и противоопухолевых агентов, особенно соединение Примера 6. Например, было установлено, что в вышеуказанном тесте 1 эти три соединения имеют ИК50, составляющую примерно 10 нМ, в вышеприведенном тесте 2 ИК50 составляет 10-200 нМ.
Описываются новые трехзамещенные фенильные производные формулы (Is), где R1s представляет собой гидроксил, алкил, содержащий 1 - 4 атома углерода, или алкоксил, содержащий 1 - 4 атома углерода; R2s представляет собой гидроксил или алкоксил, содержащий 1 - 4 атома углерода, и находящийся в 5- или 6-положении, причем R1s и R2s не являются одновременно гидроксилом; и а) Ws представляет собой -СН2СН2-; R3s представляет собой группу формулы -COR6s, где R6s представляет собой алкил, содержащий 1 - 4 атома углерода, алкоксил, содержащий 1 - 4 атома углерода, или аминогруппу; R4s представляет собой аминогруппу, алкиламиногруппу, содержащую 1 - 4 атома углерода, диалкиламиногруппу, каждая алкильная часть которой содержит независимо 1 - 4 атома углерода, алкилкарбониламиногруппу, алкильная часть которой содержит 1 - 4 атома углерода, или алкоксикарбониламиногруппу, алкоксильная часть которой содержит 1 - 4 атома углерода; или б) Ws представляет собой -СН2СН2-, -СН2NH-, -СН2О- или -СН = СН-, причем атом азота или кислорода связан с кольцом В; R3s и R4s вместе с кольцом В образуют систему конденсированных колец формулы (as) и (bs), где символ ---- обозначает простую или двойную связь; R9s представляет собой водород, алкилтиогруппу, содержащую 1 - 4 атома углерода, алкил, содержащий 1 - 4 атома углерода, амино-, диацетиламиногруппу, алкиламиногруппу, содержащую 1 - 4 атома углерода, гидроксил, алкоксил, содержащий 1 - 4 атома углерода, или меркаптогруппу; Ys представляет собой N или CR11s, где R11s представляет собой водород или алкоксикарбонил, алкоксильная часть которого содержит 1 - 4 атома углерода, R10s представляет собой водород, алкил, содержащий 1 - 4 атома углерода, или диалкоксибензил, алкоксильные части которого независимо содержат 1 - 4 атома углерода; Z представляет собой О или S и V представляет собой NH, если символ --- обозначает простую связь, и N, если символ --- обозначает двойную связь; при условии, что, если R9s представляет собой гидроксил или меркаптогруппу и Ys представляет собой N, то соединения существуют предпочтительно в таутомерной форме формулы (Its), где R'9s представляет собой О или S, в свободной форме или, если такие формы существуют, в форме соли. Соединения пригодны для лечения пролиферативных и/или воспалительных нарушений и рака. 2 с. и 2 з.п. ф-лы, 12 табл.