Способ уменьшения воспаления и окислительного стресса у млекопитающих - RU2429853C2

Чертежи

Описание

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение направлено на способ уменьшения воспаления и окислительного стресса у млекопитающего, включающий: введение млекопитающему композиции, содержащей антиметаболит глюкозы, при этом указанная композиция содержит количество антиметаболита глюкозы, достаточное для снижения уровня окисленного глутатиона и/или увеличения соотношения восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону в крови млекопитающего после введения антиметаболита глюкозы.

Уровень техники

Состояние окислительного стресса наступает в случае дисбаланса между механизмами ускорения окисления и ингибирования окисления. Избыток ускорителей окисления может вызывать молекулярное и клеточное повреждение. Повышенный окислительный стресс связан с различными заболеваниями, такими как коронарная болезнь сердца, нейродегенеративные заболевания, артрит и образование катаракты, а также дисрегуляция иммунной системы. У животных существуют такие механизмы ингибирования окисления, как антиоксидантные ферменты и другие низкомолекулярные антиоксиданты, которые могут обладать защитным действием по отношению к вредному воздействию свободных радикалов. Уровень окислительного стресса может быть связан с заболеванием, и его используют для идентификации у животного риска развития заболевания или для мониторинга лечения, направленного на заболевание.

Восстановленный глутатион (GSH) представляет собой линейный трипептид L-глутамина, L-цистеина и глицина. С технической точки зрения, молекула N-L-гамма-глутамил-цистеинил глицина или L-глутатиона содержит сульфгидрильную (SH) группу в цистеинильной части, что обуславливает ее сильные электронодонорные свойства. Глутатион (GSH) является основным антиоксидантом в животных тканях. Под действием глутатион пероксидазы, GSH может удалять H.sub.2 O.sub.2 с высокой скоростью и в процессе сам превращается в окисленный глутатион (GSSG). Известно, что окисленный глутатион (GSSG) является димером трипептидного глутатиона (гамма-глутамил-цистеинил-глицина). GSSG может быть снова превращен в GSH под действием фермента глутатион редуктазы.

Глутатион является общепризнанным эффективным антиоксидантом и кофактором ферментов и играет ключевую роль в регуляции клеточной активности. Свободнорадикальные и другие окислительные агенты могут уменьшать количество GSH. Гомеостатический цикл окисления и восстановления глутатиона направлен на поддержание уровня GSH при расходе глутатиона. Количество глутатиона, поступающего с едой, ограничено, и окислительное обеднение может происходить быстрее синтеза. GSH является чрезвычайно важным клеточным протектором. GSH непосредственно блокирует реакционно-способные свободные радикалы, другие кислород-центрированные свободные радикалы и радикальные центры в ДНК и других биомолекулах. GSH защищает кожу, хрусталик, роговицу и сетчатку от радиационного поражения, и биохимические основы Р450 детоксикации в печени, почках, легких, желудочно-кишечном эпителии и других органах. Окислительные стресс-факторы, которые могут уменьшать количество GSH, включают старение, ультрафиолетовое и другое излучение; вирусные инфекции; токсины окружающей среды, средства бытовой химии и тяжелые металлы; хирургическое вмешательство, воспаление, ожоги, септический шок; недостаточность в рационе GSH предшественников и кофакторов ферментов.

GSH находится под строгим гомеостатическим контролем как внутриклеточным, так и внеклеточным. Между синтезом GSH, рециклингом GSH из GSSG/окисленного глутатиона и его использованием поддерживают динамический баланс. Баланс между окислительным стрессом и защитными системами в клетках и органах имеет очень важное значение. Было обнаружено, что антиметаболит глюкозы, авокадо, экстракт авокадо и манногептулоза обладают значительной активностью при поддержании уровня восстановленного глутатиона, снижении уровня окисленного глутатиона и увеличении соотношения восстановленного и окисленного глутатиона (GSH/GSSG).

Когда клетки подвергают действию повышенного окислительного стресса, соотношение GSH/GSSG возрастает вследствие накопления GSSG. Поэтому, измерение соотношения GSH/GSSG обеспечивает важный показатель для оценки состояния окислительного стресса у млекопитающего.

Все еще существует потребность в способе уменьшения воспаления и окислительного стресса у млекопитающего, включая людей и домашних животных, путем поддержания уровня GSH и снижения уровней GSSG в крови млекопитающего, что приводит к улучшению здоровья млекопитающего, повышению качества жизни млекопитающего и увеличению продолжительности жизни млекопитающего.

Поэтому целью настоящего изобретения является обеспечение способа уменьшения воспаления и окислительного стресса у млекопитающего, включающего: введение млекопитающему композиции, содержащей антиметаболит глюкозы, авокадо, экстракт авокадо или манногептулозу; при этом указанная композиция содержит количество антиметаболита глюкозы, авокадо, экстракта авокадо или манногептулозы, достаточное для снижения уровня окисленного глутатиона и/или увеличения соотношения восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону в крови млекопитающего после введения антиметаболита глюкозы, авокадо, экстракта авокадо или манногептулозы.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение направлено на способ уменьшения воспаления и окислительного стресса у млекопитающего, включающий: введение млекопитающему композиции, содержащей манногептулозу; при этом указанная композиция содержит количество манногептулозы, достаточное для увеличения соотношения восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону в крови млекопитающего после введения манногептулозы.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу уменьшения воспаления и окислительного стресса у млекопитающего, включающему: введение млекопитающему композиции, содержащей антиметаболит глюкозы; при этом указанная композиция содержит количество антиметаболита глюкозы, достаточное для увеличения соотношения восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону в крови млекопитающего после введения антиметаболита глюкозы.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу уменьшения воспаления и окислительного стресса у млекопитающего, включающему: введение млекопитающему композиции, содержащей авокадо; при этом указанная композиция содержит количество авокадо, достаточное для увеличения соотношения восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону в крови млекопитающего после введения авокадо.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу уменьшения воспаления и окислительного стресса у млекопитающего, включающему: введение млекопитающему композиции, содержащей экстракт авокадо; при этом указанная композиция содержит количество экстракта авокадо, достаточное для увеличения соотношения восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону в крови млекопитающего после введения экстракта авокадо.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу уменьшения воспаления и стресса у млекопитающего, включающему: введение млекопитающему композиции, содержащей манногептулозу; при этом указанная композиция содержит количество манногептулозы, достаточное для снижения уровня окисленного глутатиона в крови млекопитающего после введения манногептулозы.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу уменьшения воспаления и окислительного стресса у млекопитающего, включающему: введение млекопитающему композиции, содержащей экстракт авокадо; при этом указанная композиция содержит количество экстракта авокадо, достаточное для увеличения соотношения восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону в крови млекопитающего после введения экстракта авокадо.

Краткое описание чертежей

На Фиг.1 представлена скорость реакции общего GSH_t для необработанной пробы; На Фиг.2 представлена скорость реакции для обработанной пробы M2VP и холостой пробы GSSG;

На Фиг.3 представлена калибровочная кривая GSH_t; и

На Фиг.4 представлена калибровочная кривая GSSG.

Подробное описание изобретения

Способ уменьшения воспаления и окислительного стресса у млекопитающего в соответствии с настоящим изобретением включает введение млекопитающему композиции, содержащей манногептулозу; при этом указанная композиция содержит количество манногептулозы, достаточное для увеличения соотношения восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону в крови млекопитающего после введения манногептулозы.

Эти и другие ограничения композиций и способов в соответствии с настоящим изобретением, а также многие из необязательных ингредиентов, приемлемые для применения в настоящем изобретении, подробно описаны в данной заявке.

Как используется в данной заявке, термин "адаптированный для применения" означает, что описанная композиция может соответствовать требованиям Американской ассоциации контролеров по качеству кормов (American Association of Feed Control Officials (AAFCO)) относительно безопасности для обеспечения кормов для животных, которые время от времени могут быть изменены и дополнены.

Как используется в данной заявке, термин "домашнее животное" означает животное, предпочтительно, включая (например) собак, котов, котят, щенков, старых собак, старых котов, взрослых собак, взрослых котов, коней, коров, свиней, кроликов, морских свинок, хомяков, песчанку, африканского хорька, зоопарковых животных, рыб, птиц и т.п. Собаки, коты, котята, щенки, старые собаки, старые коты, взрослые собаки, взрослые коты являются особенно предпочтительными.

Как используется в данной заявке, термин "композиция" означает композицию, которая может быть введена человеку, которую перорально принимает внутрь человек, пластинки, пилюли, капсулы, которые вводят домашним животным и которые домашнее животное принимает внутрь, кормовые добавки для домашних животных, корм для домашних животных, корм для собак, корм для котов, лакомства, печенье, кожевенное сырье, жвачки, наполнители, соусы, подливки, напитки, воду для допаивания и их комбинации. Композиция может быть в виде раствора, влажной и/или сухой.

Термин "полный и диетологически сбалансированный", как используется в данной заявке, если не указано иное, относится к композиции, содержащей все известные необходимые питательные вещества в надлежащем количестве и пропорциях на основании рекомендаций признанных органов в области питания домашних животных.

Как используется в данной заявке, термин "эндогенный" означает происходящий или полученный в пробе крови или ткани.

Как используется в данной заявке, термин "GSH" означает эндогенно восстановленный глутатион.

Как используется в данной заявке, термин "общий GSH_t" включает восстановленный GSH в комбинации с восстановленным GSH, полученным путем превращения GSSG в две молекулы восстановленного GSH, как определено способом, описанным в данной заявке.

Как используется в данной заявке, термин "GSSG" означает окисленный глутатион.

Как используется в данной заявке, термин "млекопитающий" включает людей и/или домашних животных.

Все процентные содержания, части и соотношения, как используется в данной заявке, приведены в массах от всей композиции, если не указано иное. Все такие массы, поскольку они относятся к перечисленным ингредиентам, основаны на активном количестве и поэтому не включают растворители или побочные продукты, которые могут содержать коммерчески доступные материалы, если не указано иное.

Композиции и способы в соответствии с настоящим изобретением могут включать, содержать, состоять из или по существу состоять из существенных элементов и ограничений в соответствии с настоящим изобретением, описанными в данной заявке, а также из любых дополнительных или необязательных ингредиентов, компонентов или ограничений, описанных в данной заявке, или полезных иным образом в композициях, предназначенных для употребления млекопитающими.

СПОСОБ

Настоящее изобретение относится к способу уменьшения воспаления и окислительного стресса у млекопитающего. Данный способ включает введение млекопитающему композиции, содержащей антиметаболит глюкозы или авокадо, или манногептулозу, или экстракт авокадо; при этом композиция содержит количество антиметаболита глюкозы или авокадо, или манногептулозы, или экстракта авокадо, достаточное для снижения уровня окисленного глутатиона и/или увеличения соотношения восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону в крови млекопитающего после введения антиметаболита глюкозы и/или авокадо, и/или манногептулозы, и/или экстракта авокадо.

ФОРМА КОМПОЗИЦИИ

Композиции адаптированы для применения млекопитающими. Композицию в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно вводят для уменьшения воспаления и окислительного стресса путем снижения уровня окисленного глутатиона и/или увеличения соотношения восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону в крови млекопитающего. Композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть влажной композицией (т.е. композицией с общим содержанием влаги от приблизительно 16% до 50% по массе продукта), и/или композицией в растворе (т.е. композицией с общим содержанием влаги более 50% по массе продукта) и/или сухой композицией (т.е. композицией с общим содержанием влаги от приблизительно 0% до приблизительно 16% по массе продукта). Если в данной заявке не указано иное, то композиция в виде раствора, влажная композиция и/или сухая композиция не ограничены составом или способом получения.

Композиция в данной заявке может быть полной и диетологически сбалансированной. Полная и диетологически сбалансированная композиция может быть составлена для кормления в виде одной дозы и способна поддерживать жизнь и/или способствовать размножению без употребления каких-либо дополнительных веществ, за исключением воды.

Композиция и компоненты в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно предназначены для употребления млекопитающим, но также они могут быть предназначены для употребления людьми. Неограничивающие примеры композиций включают кормовые добавки для животного, корм для домашних животных, корм для собак, корм для котов, лакомства, печенье, кожевенное сырье, жвачку, наполнители, соусы, подливки, напитки, воду для допаивания и их комбинации.

Дополнительно, введение в соответствии с настоящим изобретением может быть непрерывным или прерывистым, в зависимости, например, от физиологического состояния пациента, независимо от того, производят введение с лечебной или профилактической целью, и от других факторов, известных практикующим специалистам.

АНТИМЕТАБОЛИТ ГЛЮКОЗЫ

Способ в соответствии с настоящим изобретением включает введение млекопитающему композиции, которая может содержать антиметаболит глюкозы. Антиметаболиты глюкозы влияют на соотношение и уровень окисленного глутатиона и восстановленного глутатиона в крови млекопитающего. Уменьшение количества окисленного глутатиона и поддержание уровня восстановленного глутатиона уменьшает воспаление и окислительный стресс после приема млекопитающим композиции, содержащей антиметаболиты глюкозы.

Уровень окисленного глутатиона (GSSG) в крови после введения композиции, содержащей антиметаболит глюкозы, составляет от приблизительно 0 мкМ до приблизительно 500 мкМ, от приблизительно 5 мкМ до приблизительно 300 мкМ, от приблизительно 5 мкМ до приблизительно 150 мкМ, от приблизительно 10 мкМ до приблизительно 100 мкМ, в соответствии с измерениями, произведенными способом, описанным в данной заявке.

Уровень восстановленного глутатиона (GSH) в крови после введения композиции, содержащей антиметаболит глюкозы составляет от приблизительно 0 мкМ до приблизительно 4000 мкМ, от приблизительно 1 мкМ до приблизительно 3000 мкМ, от приблизительно 20 мкМ до приблизительно 2500 мкМ, от приблизительно 40 мкМ до приблизительно 2000 мкМ, в соответствии с измерениями, произведенными способом, описанным в данной заявке.

Уровень общего глутатиона (общего GSH_t) в крови после введения композиции, содержащей антиметаболит глюкозы, составляет от приблизительно 0 мкМ до приблизительно 4000 мкМ, от приблизительно 1 мкМ до приблизительно 3000 мкМ, от приблизительно 20 мкМ до приблизительно 2500 мкМ, от приблизительно 40 мкМ до приблизительно 2000 мкМ, в соответствии с измерениями, произведенными способом, описанным в данной заявке.

Соотношение восстановленного глутатиона и окисленного глутатиона в крови после введения антиметаболита глюкозы составляет от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 500:1, от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 250:1, от приблизительно 1:1 до приблизительно 100:1, от приблизительно 1:1 до приблизительно 80:1.

Неограничивающие примеры антиметаболитов глюкозы, полезные в данной заявке, включают 2-дезокси-D-глюкозу, 5-тио-D-глюкозу, 3-O-метилглюкозу, ангидросахара, включая 1,5-ангидро-D-глюцитол, 2,5-ангидро-D-глюцитол и 2,5-ангидро-D-маннитол, и манногептулозу. Манногептулоза является предпочтительной для применения в настоящем изобретении.

Доза антиметаболитов глюкозы, которую дают млекопитающему, ежедневно, составляет от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 1000 мг/кг, от приблизительно 2 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг, от приблизительно 2 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, где (как будет традиционно подразумеваться в данной области техники) "мг" относится к количеству компонента, а "кг" относится к килограммам млекопитающего или от приблизительно 0,0001 грамм до приблизительно 1 грамм антиметаболитов глюкозы на килограмм млекопитающего. Если композиция содержит антиметаболиты глюкозы, то количество антиметаболитов глюкозы составляет менее, чем приблизительно 5%, или менее, чем приблизительно 2%, или от приблизительно 0,0001% до приблизительно 0,5% антиметаболитов глюкозы, все по массе композиции. Количество компонентов может быть определено специалистом в данной области техники на основании множества факторов, например, формы композиции корма для домашних животных (например, для сухой композиции, увлажненной композиции, композиции в растворе или кормовой добавки, или любой другой формы или их смеси). Специалист в данной области техники будет способен задействовать предпочтительные оптимальные дозы, и применять их для определения оптимального уровня компонента в данной композиции корма для домашних животных.

Если антиметаболитом глюкозы является манногептулоза, то доза манногептулозы, которую ежедневно дают млекопитающему, составляет от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 1000 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг, от приблизительно 2 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, где (как будет традиционно подразумеваться в данной области техники) "мг" относится к количеству манногептулозы, а "кг" относится к килограммам млекопитающего или от приблизительно 0,0001 грамм до приблизительно 1 грамм манногептулозы на килограмм млекопитающего. Если композиция содержит манногептулозу, то количество манногептулозы составляет менее чем приблизительно 5%, или менее чем приблизительно 2%, или от приблизительно 0,0001% до приблизительно 0,5% манногептулозы, все по массе композиции.

Уровень окисленного глутатиона в крови после введения композиции, содержащей манногептулозу, составляет от приблизительно 0 мкМ до приблизительно 500 мкМ, от приблизительно 5 мкМ до приблизительно 300 мкМ, от приблизительно 5 мкМ до приблизительно 150 мкМ, от приблизительно 10 мкМ до приблизительно 100 мкМ, в соответствии с измерениями, выполненными при помощи способа, описанного в данной заявке.

Уровень восстановленного глутатиона в крови после введения композиции, содержащей манногептулозу, составляет от приблизительно 0 мкМ до приблизительно 4000 мкМ, от приблизительно 10 мкМ до приблизительно 3000 мкМ, от приблизительно 20 мкМ до приблизительно 2500 мкМ, от приблизительно 40 мкМ до приблизительно 2000 мкМ, в соответствии с измерениями, выполненными при помощи способа, описанного в данной заявке.

Уровень общего глутатиона (общего GSH_t) в крови после введения композиции, содержащей манногептулозу, составляет от приблизительно 0 мкМ до приблизительно 4000 мкМ, от приблизительно 10 мкМ до приблизительно 3000 мкМ, от приблизительно 20 мкМ до приблизительно 2500 мкМ, от приблизительно 40 мкМ до приблизительно 2000 мкМ, в соответствии с измерениями, выполненными при помощи способа, описанного в данной заявке.

Соотношение восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону в крови после введения манногептулозы составляет от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 500:1, от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 250:1, от приблизительно 1:1 до приблизительно 100:1, от приблизительно 1:1 до приблизительно 80:1.

АВОКАДО

Способ в соответствии с настоящим изобретением может включать введение млекопитающему композиции, которая может содержать авокадо. Авокадо влияет на уровень и соотношение окисленного глутатиона к восстановленному глутатиону в крови млекопитающего. Снижение количества окисленного глутатиона и поддержание уровня восстановленного глутатиона уменьшает воспаление и окислительный стресс после приема млекопитающим композиции, содержащей авокадо.

Уровень окисленного глутатиона в крови после введения композиции, содержащей авокадо, составляет от приблизительно 0 мкМ до приблизительно 500 мкМ, от приблизительно 5 мкМ до приблизительно 300 мкМ, от приблизительно 5 мкМ до приблизительно 150 мкМ, от приблизительно 10 мкМ до приблизительно 100 мкМ, в соответствии с измерениями, выполненными при помощи способа, описанного в данной заявке.

Уровень восстановленного глутатиона в крови после введения композиции, содержащей авокадо, составляет от приблизительно 0 мкМ до приблизительно 4000 мкМ, от приблизительно 10 мкМ до приблизительно 3000 мкМ, от приблизительно 20 мкМ до приблизительно 2500 мкМ, от приблизительно 40 мкМ до приблизительно 2000 мкМ, в соответствии с измерениями, выполненными при помощи способа, описанного в данной заявке.

Уровень общего глутатиона (общего GSHt) в крови после введения композиции, содержащей авокадо, составляет от приблизительно 0 мкМ до приблизительно 4000 мкМ, от приблизительно 10 мкМ до приблизительно 3000 мкМ, от приблизительно 20 мкМ до приблизительно 2500 мкМ, от приблизительно 40 мкМ до приблизительно 2000 мкМ, в соответствии с измерениями, выполненными при помощи способа, описанного в данной заявке.

Соотношение восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону в крови после введения авокадо составляет от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 500:1, от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 250:1, от приблизительно 1:1 до приблизительно 100:1, от приблизительно 1:1 до приблизительно 80:1.

Авокадо (который также традиционно называют аллигаторова груша, агуакате или пальта) содержит необычайно богатые источники манногептулозы, а также родственных сахаров и других углеводов. Авокадо является субтропическим вечнозеленым плодовым деревом, которое наиболее успешно произрастает в зонах Калифорнии, Флориды, Гавайев, Гватемалы, Мексики, Вест Индии, Южной Африки и Азии.

Неограничивающие примеры видов авокадо, которые могут быть использованы в настоящем изобретении, включают, например, Persea Americana и Persea nubigena, включая все сорта этих иллюстративных видов. Сорта могут включать 'Anaheim', 'Bacon', 'Creamhart', 'Duke', 'Fuerte', 'Ganter', 'Gwen', 'Hass', 'Jim', 'Lula', 'Lyon', 'Mexicola', 'Mexicola Grande', 'Murrieta Green', 'Nabal', 'Pinkerton', 'Queen', 'Puebla', 'Reed', 'Rincon', 'Ryan', 'Spinks', 'Topa Topa', 'Whitsell', 'Wurtz', и 'Zutano'. Особенно предпочтительным для использования в настоящем изобретении является плод авокадо, который может содержать косточку, или в котором косточка удалена или, как минимум, частично удалена. Плод от Persea Americana является особенно предпочтительным для использования в настоящем изобретении, так же, как и плоды сортов, дающих более крупные плоды (например, приблизительно, 12 унций или более, если плод зрелый), такие как Anaheim, Creamhart, Fuerte, Hass, Lula, Lyon, Murrieta Green, Nabal, Queen, Puebla, Reed, Ryan и Spinks.

Доза авокадо, которую дают млекопитающему ежедневно, составляет от приблизительно 100 мг/кг до приблизительно 200 г/кг, от приблизительно 200 мг/кг до приблизительно 20 г/кг, от приблизительно 400 мг/кг до приблизительно 10 г/кг, где (как будет традиционно подразумеваться в данной области техники) "мг" относится к количеству авокадо, а "кг" относится к килограммам млекопитающего или от приблизительно 0,1 грамм до приблизительно 200 грамм авокадо на килограмм млекопитающего. Если композиция содержит авокадо, то количество авокадо составляет менее чем приблизительно 50%, или менее чем приблизительно 25%, или от приблизительно 0,0001% до приблизительно 5% авокадо, все по массе композиции. Количество авокадо может быть определено специалистом в данной области техники на основании множества факторов, например формы композиции (например, для сухой композиции, влажной композиции, композиции в растворе или кормовой добавки, или любой другой формы или их смеси). Специалист в данной области техники будет способен задействовать предпочтительные оптимальные дозы, и применять их для определения оптимального уровня компонента в данной композиции.

Предпочтительно, указанные композиции могут содержать манногептулозу или любой другой компонент в качестве компонента растительного материала, такого как авокадо, или другой источник, обогащенный манногептулозой, включая, но не ограничиваясь приведенным, люцерну, инжир или примулу. Растительный материал может включать плод, семя (или косточку), ветви, листья или любую другую часть соответствующего растения или их комбинацию. Дополнительно, также сообщали, что растительный материал, полученный из люцерны, инжира или примулы и т.п., также обеспечивает относительно высокие уровни манногептулозы. Люцерна также имеет название Medicago sativa. Также может быть использован инжир, или Ficus carica (включая фикс клубковатый или сикомор античный, например), а также примула, или Primula officinalis.

Манногептулоза или любой другой компонент может быть экстрагирован из растительного материала и/или авокадо с получением растительного экстракта, или экстракта компонента, или экстракта авокадо, и потом его применяют в композиции в соответствии с настоящим изобретением.

Если экстракт растительного материала применяют в композиции в соответствии с настоящим изобретением, то компонент будет присутствовать в количестве от приблизительно 1% до приблизительно 99% экстракта компонента, от приблизительно 5% до приблизительно 75% экстракта компонента, от приблизительно 10% до приблизительно 50% экстракта компонента, все по массе экстракта.

Если экстракт авокадо применяют в композиции в соответствии с настоящим изобретением, то компонент будет присутствовать в количестве от приблизительно 1% до приблизительно 99% экстракта компонента, от приблизительно 5% до приблизительно 75% экстракта компонента, от приблизительно 10% до приблизительно 50% экстракта компонента, все по массе экстракта.

Если экстрактом растительного материала является манногептулоза, которую затем применяют в композиции в соответствии с настоящим изобретением, то манногептулоза будет присутствовать в количестве от приблизительно 1% до приблизительно 99% манногептулозы, от приблизительно 5% до приблизительно 75% манногептулозы, от приблизительно 10% до приблизительно 50% манногептулозы, все по массе экстракта.

Если экстрактом авокадо является манногептулоза, которую затем применяют в композиции в соответствии с настоящим изобретением, то манногептулоза будет присутствовать в количестве от приблизительно 1% до приблизительно 99% манногептулоза, от приблизительно 5% до приблизительно 75% манногептулозы, от приблизительно 10% до приблизительно 50% манногептулозы, все по массе экстракта.

Применяемая доза манногептулозы при получении из растения или из экстракта авокадо, которую дают млекопитающему ежедневно, составляет от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 1000 мг/кг, от приблизительно 2 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг, от приблизительно 2 мг/кг до приблизительно 5 мг/кг, где (как будет традиционно подразумеваться в данной области техники) "мг" относится к количеству манногептулозы, а "кг" относится к килограммам млекопитающего или к количеству от приблизительно 0,001 грамм до приблизительно 1 грамм манногептулозы на килограмм млекопитающего. Если манногептулоза, которую получают из растительного экстракта или экстракта авокадо, присутствует в композиции, то количество манногептулозы составляет менее чем приблизительно 5%, или менее чем приблизительно 2%, или от приблизительно 0,0001% до приблизительно 0,5% манногептулозы, все по массе композиции. Количество манногептулозы может быть определено специалистом в данной области техники на основании различных факторов, например формы композиции (например, для сухой композиции, влажной композиции, композиции в растворе или кормовой добавки, или любой другой формы или их смеси). Специалист в данной области техники сможет задействовать предпочтительные оптимальные дозы и применять их для определения оптимального уровня компонента в данной композиции.

Уровень окисленного глутатиона в крови после введения композиции, содержащей экстракт манногептулозы, которую получают из экстракта растительного материала или экстракта авокадо, составляет от приблизительно 0 мкМ до приблизительно 500 мкМ, от приблизительно 5 мкМ до приблизительно 300 мкМ, от приблизительно 5 мкМ до приблизительно 150 мкМ, от приблизительно 10 мкМ до приблизительно 100 мкМ, в соответствии с измерениями, выполненными при помощи способа, описанного в данной заявке.

Уровень восстановленного глутатиона в крови после введения композиции, содержащей экстракт манногептулозы, которую получают из экстракта растительного материала или экстракта авокадо, составляет от 0 мкМ до приблизительно 4000 мкМ, от приблизительно 10 мкМ до приблизительно 3000 мкМ, от приблизительно 20 мкМ до приблизительно 2500 мкМ, от приблизительно 40 мкМ до приблизительно 2000 мкМ, в соответствии с измерениями, выполненными при помощи способа, описанного в данной заявке.

Уровень общего глутатиона (общего GSH_t) в крови после введения композиции, содержащей экстракт манногептулозы, которую получают из экстракта растительного материала или экстракта авокадо, составляет от 0 мкМ до приблизительно 4000 мкМ, от приблизительно 10 мкМ до приблизительно 3000 мкМ, от приблизительно 20 мкМ до приблизительно 2500 мкМ, от приблизительно 40 мкМ до приблизительно 2000 мкМ, в соответствии с измерениями, выполненными при помощи способа, описанного в данной заявке.

Соотношение восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону в крови после введения экстракта манногептулозы, которую получают из растительного экстракта и/или экстракта авокадо, составляет от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 500:1, от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 250:1, от приблизительно 1:1 до приблизительно 100:1, от приблизительно 1:1 до приблизительно 80:1.

КОМПОЗИЦИИ

Предполагают, что антиметаболит глюкозы, или авокадо, или манногептулоза, или экстракт авокадо, или экстракт растительного материала, описанные в настоящем изобретении, могут быть добавлены в любую композицию, приспособленную для введения млекопитающему.

Типичный состав композиций хорошо известен из уровня техники. Дополнительно к белковоподобным и крахмалистым материалам, композиции в соответствии с настоящим изобретением, в общем, могут содержать витамины, минералы и другие добавки, такие как ароматизаторы, консерванты, эмульгаторы и увлажнители. Баланс питательных веществ, включая относительные соотношения витаминов, минералов, белка, жира и углевода определяют в соответствии с пищевыми стандартами, известными в области ветеринарии и диетологии.

Неограничивающие примеры сухих композиций необязательно могут содержать в расчете на сухое вещество от приблизительно 1% до приблизительно 50% неочищенного белка, от приблизительно 0,5% до приблизительно 25% неочищенного жира, от приблизительно 1% до приблизительно 10% дополнительного волокнистого материала, все по массе композиции. Сухая композиция может иметь общее содержание влаги от приблизительно 1% до приблизительно 30% влаги. Альтернативно, сухая композиция может содержать в расчете на сухое вещество от приблизительно 5% до приблизительно 35% неочищенного белка, от приблизительно 5% до приблизительно 25% неочищенного жира, от приблизительно 2% до приблизительно 8% дополнительного волокнистого материала, все по массе композиции. Сухая композиция может иметь общее содержание влаги от приблизительно 2% до приблизительно 20% влаги. Альтернативно, сухая композиция содержит в расчете на сухое вещество минимальный уровень белков от приблизительно 9,5% до приблизительно 35%, минимальный уровень жиров от приблизительно 8% до приблизительно 20%, минимальный уровень дополнительного волокнистого материала от приблизительно 3% до приблизительно 7%, все по массе композиции. Сухая животная композиция может также иметь минимальный уровень метаболической энергии, составляющий приблизительно 3,5 ккал/г. Сухая композиция может иметь общее содержание влаги от приблизительно 3% до приблизительно 10%.

Неограничивающие примеры полувлажной композиции необязательно могут содержать в расчете на сухое вещество от приблизительно 0,5% до приблизительно 50% неочищенного белка, от приблизительно 0,5% до приблизительно 25% неочищенного жира, от приблизительно 0,5% до приблизительно 15% дополнительного волокнистого материала, все по массе композиции. Полувлажная композиция может иметь общее содержание влаги от приблизительно 30% до приблизительно 50% влаги. Альтернативно, полувлажные композиции могут содержать в расчете на сухое вещество от приблизительно 5% до приблизительно 35% неочищенного белка, от приблизительно 5% до приблизительно 25% неочищенного жира, от приблизительно 1% до приблизительно 5% дополнительного волокнистого материала, все по массе композиции. Полувлажная композиция может иметь общее содержание влаги от приблизительно 35% до приблизительно 45% влаги. Альтернативно, полувлажная композиция может содержать, в расчете на сухое вещество, минимальный уровень белков от приблизительно 9,5% до приблизительно 22%, минимальный уровень жиров от приблизительно 8% до приблизительно 13%, минимальный уровень дополнительного волокнистого материала от приблизительно 2% до приблизительно 3%, все по массе композиции. Полувлажная композиция может иметь общее содержание влаги от приблизительно 38% до приблизительно 42%. Полувлажная композиция может также иметь минимальный уровень метаболической энергии, составляющий приблизительно 3,5 ккал/г и от приблизительно 0,1% до приблизительно 20% золы, от приблизительно 0,001% до приблизительно 5,0% таурина.

Неограничивающие примеры влажной композиции необязательно могут содержать в расчете на сухое вещество от приблизительно 0,5% до приблизительно 50% неочищенного белка, от приблизительно 0,5% до приблизительно 25% неочищенного жира, от приблизительно 0,01% до приблизительно 15% дополнительного волокнистого материала, все по массе композиции. Влажная композиция может иметь общее содержание влаги от приблизительно 50% до приблизительно 90% влаги. Альтернативно, влажные композиции могут содержать в расчете на сухое вещество от приблизительно 5% до приблизительно 35% неочищенного белка, от приблизительно 5% до приблизительно 25% неочищенного жира, от приблизительно 0,05% до приблизительно 5% дополнительного волокнистого материала, все по массе композиции. Влажная композиция может иметь общее содержание влаги от приблизительно 60% до приблизительно 85% влаги. Альтернативно, влажная композиция для животных может содержать в расчете на сухое вещество минимальный уровень белков от приблизительно 9,5% до приблизительно 22%, минимальный уровень жиров от приблизительно 8% до приблизительно 13%, минимальный уровень дополнительного волокнистого материала от приблизительно 0,1% до приблизительно 3%, все по массе композиции. Влажная композиция может иметь общее содержание влаги от приблизительно 65% до приблизительно 80%. Влажная композиция может также иметь минимальный уровень метаболической энергии, составляющий приблизительно 1,0 ккал/г, и от приблизительно 0,1% до приблизительно 20% золы, от приблизительно 0,001% до приблизительно 5,0% таурина.

В одном осуществлении настоящего изобретения, композиция является сухой, влажной, полувлажной или иной композицией, которая содержит, в расчете на сухое вещество, от приблизительно 5% до приблизительно 50%, альтернативно от 20% до приблизительно 50% ингредиентов животного происхождения, по массе композиции. Неограничивающие примеры ингредиентов животного происхождения включают куриный, говяжий, свиной, бараний, индюшачий (или другой животный) белок или жир, яйцо, рыбную муку, и т.п.

Если композиция находится в форме соуса, то композиция может содержать, как минимум, 10% бульона или продуктов, неограничивающие примеры которых включают растительные, говяжьи, куриные или свиные продукты. Типичные композиции соусов могут содержать, в расчете на сухое вещество, от приблизительно 0,5% до приблизительно 5% неочищенного белка и от приблизительно 2% до приблизительно 5% неочищенного жира.

Если композиция находится в форме композиции добавок, такой как печенье, жевательная резинка и другие лакомства, то добавки могут содержать, в расчете на сухое вещество, от приблизительно 20% до приблизительно 60% белка, от приблизительно 22% до приблизительно 40% белка, по массе композиции добавок. В качестве еще одного примера, композиции добавок могут содержать, в расчете на сухое вещество, от приблизительно 5% до приблизительно 35% жиров, или от приблизительно 10% до приблизительно 30% жиров, по массе композиции добавок. Композиции и композиции добавок, предназначенные для применения животными, такими как коты или собаки, хорошо известны из уровня техники.

НЕОБЯЗАТЕЛЬНЫЕ ИНГРЕДИЕНТЫ

Композиция в соответствии с настоящим изобретением может дополнительно содержать широкий диапазон других необязательных ингредиентов.

Неограничивающие примеры дополнительных компонентов включают животный белок, растительный белок, крахмалистое вещество, овощи, фрукты, вещества на основе яиц, неденатурированные белки, пищевые полимерные клеи, гели, полиолы, крахмалы, камеди, ароматизаторы, специи, соли, красители, соединения замедленного высвобождения, минералы, витамины, антиоксиданты, пребиотики, пробиотики, модификаторы запахов, текстурированный пшеничный белок, текстурированный соевый белок, текстурированный люпиновый белок, текстурированный растительный белок, панировки, мясной фарш, муку, измельченные макаронные изделия, воду и их комбинации.

Неограничивающие примеры необязательных ингредиентов могут включать, как минимум, один овощ. Неограничивающие примеры овощей включают морковь, горох, картофель, капусту, сельдерей, бобы, кукурузу, томаты, брокколи, цветную капусту, лук-порей и их комбинации.

Также в настоящем изобретении в качестве необязательного ингредиента полезным является наполнитель. Наполнитель может быть твердым, жидким или консервированным воздухом. Наполнитель может быть восстанавливаемым (например, термообратимым, включая желатин) и/или необратимым (например, термонеобратимым, включая яичный белок). Неограничивающие примеры наполнителя включают соус, гель, желе, желе на бульонной основе, приправу, воду, воздух (например, включая азот, диоксид углерода и атмосферный воздух), бульон и их комбинации.

Неограничивающие примеры красителей включают, не ограничиваясь приведенным, синтетические или натуральные красители и их любые комбинации. При наличии красителей их количество составляет от приблизительно 0,0001% до приблизительно 5%, более предпочтительно от приблизительно 0,001% до приблизительно 1%, даже более предпочтительно от приблизительно 0,005% до приблизительно 0,1%, в расчете на сухое вещество, указанного красителя.

Дополнительно, к композиции или пищевой композиции для животных могут быть добавлены индивидуальные пробиотические микроорганизмы, такие как виды Lactobacillus или Bifidobacterium, например.

Также в настоящем изобретении в качестве необязательных ингредиентов используют, как минимум, один фрукт. Неограничивающие примеры включают томаты, яблоки, груши, персики, вишни, абрикосы, сливы, виноград, апельсины, грейпфруты, лимоны, лаймы, клюкву, малину, чернику, арбуз, мускусную дыню, мушмулу, дыню мускатную белую, клубнику, бананы и их комбинации.

Композиция может содержать другие активные агенты, такие как длинноцепочные жирные кислоты и цинк. Приемлемые длинноцепочные жирные кислоты включают альфа-линолевую кислоту, гамма-линолевую кислоту, линолевую кислоту, эйкозапентановую кислоту и докозагексановую кислоту. Рыбьи жиры являются приемлемым источником эйкозапентановой кислоты (ЕРА) и докозагексановой кислоты (DHA). Уровень DHA составляет, как минимум, приблизительно 0,05%, альтернативно, как минимум, приблизительно 0,1%, альтернативно, как минимум, приблизительно, 0,15% пищевой композиции для животных, все в расчете на сухое вещество. Уровень ЕРА составляет, как минимум, приблизительно 0,05%, альтернативно, как минимум, приблизительно 0,1%, альтернативно, как минимум, приблизительно 0,15% пищевой композиции для животных, все в расчете на сухое вещество.

Композиции в соответствии с настоящим изобретением могут дополнительно содержать источник углеводов. Зерновые или злаки, такие как рис, кукуруза, сорго, ячмень, пшеница, и т.п. являются иллюстративными источниками.

Композиции также могут содержать другие вещества, такие как сухая сыворотка и другие побочные продукты переработки молока.

Необязательные способы получения композиций в соответствии с настоящим изобретением

Композиции могут быть получены любым из множества способов, включая, но не ограничиваясь приведенным, необязательные способы, описанные в данной заявке. В данной заявке описаны необязательные способы получения композиций в соответствии с настоящим изобретением. Специалист в данной области техники поймет, однако, что композиции не ограничены следующими описанными способами.

Способ получения данных композиций может включать:

(a) обеспечение растительного материала;

(b) объединение растительного материала с водным раствором и, необязательно, с ферментом, дополнительно, необязательно при нагревании, с получением ферментированной растительной смеси;

(c) необязательно отделение каких-либо фракций, которые присутствуют в ферментированной растительной смеси, если таковые присутствуют, с обеспечением углеводного экстракта;

(d) концентрирование ферментированной растительной смеси для увеличения концентрации углеводов в ней; и

(e) соединение ферментированной растительной смеси с одним или более компонентами композиции.

Растительным материалом может быть любая часть или целое растение, такие как листья, плод, семя или косточка. В одном необязательном способе в данной заявке, обеспечено авокадо, и способ может быть начат с целого плода авокадо, содержащего косточку, или освобожденного (или частично освобожденного) от косточки. Если обеспеченный растительный материал содержит косточку, или часть косточки, то косточка или ее часть могут быть необязательно удалены перед дальнейшей обработкой. Люцерна, инжир или первоцвет и т.п. могут быть обработаны аналогичным образом.

Дополнительно, получение ферментированной растительной смеси может включать объединение растительного материала с водным раствором, таким как вода, чтобы способствовать мацерации растения в удобные для обработки компоненты. Необязательно, но предпочтительно, фермент, обладающий целлюлозной или пектиновой активностью, или их любая комбинация (такая как целлюлаза, гемицеллюлаза или пектиназа) включены, чтобы способствовать такой мацерации, включая способствование растворению и высвобождению углеводов посредством разрушения стенок клеток. Полезность такой ферментной обработки может быть повышена путем нагревания во время такой мацерации, например от приблизительно температуры окружающей среды до приблизительно 120°C, или до приблизительно 100°C, или от приблизительно 60°C до приблизительно 120°C, или от приблизительно 60°C до приблизительно 100°C. Предпочтительно, дополнительно применяют перемешивание, типично, до приблизительно 24 часов, но в зависимости от переработки партии. В одном осуществлении, значение pH контролируют таким образом, чтобы сохранить ферментную активность, часто в диапазоне значений pH от приблизительно 4 до приблизительно 6, предпочтительно в диапазоне значений pH от приблизительно 5 до приблизительно 6. В зависимости от таких факторов, как зрелость растительного материала, качество водного раствора для обработки (такого как вода, которую добавляют в способе, например), и т.п., могут быть желательны количества кислоты или основания, как будет оценено специалистом в данной области техники. Необязательно, чтобы способствовать дезактивации ферментов, которые присутствуют, нагрев может быть усилен во время первоначального нагрева и перемешивания, или после этого, с образованием ферментированной растительной смеси. Воду необязательно нагревают до температур переработки перед добавлением растительного вещества. Резервуар с двойными стенками может быть нагрет в случае использования пара низкого давления. Ферментация растительной смеси может привести к получению фракций, которые могут быть разделены в соответствии с традиционными методами. Например, фракции, присутствующие в ферментированной растительной смеси, могут быть отделены путем фильтрования с обеспечением углеводного экстракта в виде полученного в результате фильтрата, из которого удален фильтровальный осадок. Другие методы могут включать, не ограничиваясь приведенным, гравиметрические, центрифугические, другие методы фильтрования или их комбинации.

Углеводный экстракт затем может быть концентрирован, необязательно путем применения, как минимум, одного способа концентрации, который выбирают из группы, состоящей из нагревания, вакуумной сушки, выпаривания, сушки «рефракционного окна», сублимационной сушки, сушки распылением, любого другого полезного метода, или любой комбинации указанных методов. В одном осуществлении используют, как минимум, один из методов, такой, как сушка «рефракционного окна».

После концентрирования, углеводный экстракт может быть применен в композиции в соответствии с настоящим изобретением. В одном осуществлении настоящего изобретения, в результате осуществления данного способа получают предпочтительные выходы манногептулозы или других компонентов исходя из первоначальной массы растительного материала (например, авокадо). В одном осуществлении, выход манногептулозы, присутствующей в углеводном экстракте после концентрирования, составляет менее чем приблизительно 20%, или от приблизительно 0,1% до приблизительно 10%, или от приблизительно 1% до приблизительно 7% исходя из первоначальной массы растительного материала. В еще одном осуществлении, выход углеводного экстракта после концентрирования составляет менее чем приблизительно 30%, или от приблизительно 5% до приблизительно 25%, или от приблизительно 8% до приблизительно 20% исходя из первоначальной массы растительного материала. Конечно, могут быть желательными даже более высокие выходы, а более низкие выходы также могут быть приемлемыми.

СПОСОБ ИЗМЕРЕНИЯ ВОССТАНОВЛЕННОГО ГЛУТАТИОНА (GSH) И ОКИСЛЕННОГО ГЛУТАТИОНА (GSSG)

В способе измеряют эндогенный уровень восстановленного глутатиона (GSH) и окисленного глутатиона (GSSG) в пробе цельной крови. Способ может быть применен для определения соотношения GSH и GSSG в пробе цельной крови. Дополнительно, способ может быть применен для определения общего (GSH_t), который содержит восстановленный GSH в комбинации с восстановленным GSH, полученным путем превращения GSSG в две молекулы восстановленного GSH. Например, наборы, которые можно приобрести у OXIS Health Product Inc., могут быть использованы для осуществления способа, описанного в данной заявке.

Материалы

- Спектрофотометр Unicam UV1.

- Центрифуга с возможностью вращения при 2000×g в течение 10 минут при 8°C.

- Метакрилатные кюветы с длиной оптического пути 10 мм и объемом 1,5 мл.

- Одноразовые пробирки и пробки (стеклянные или полипропиленовые).

- Пипетки, предпочтительно, регулируемые, с возможностью точного отбора, на 10, 50, 100, 200, 700 и 3000 мкл.

- Весы

- Метафосфорная кислота (Sigma M-5043)

Хранение и эксплуатация реактивов

- Когда не используют, храните емкости при 4°C.

ПРОЦЕДУРА Подготовка реактивов

- NADPH: Непосредственно перед применением, восстанавливают лиофилизованный NADPH реактив 7,5 мл аналитического буфера. Восстановленный NADPH реактив стабилен в течение 6 часов при комнатной температуре.

- Буферный анализ: Восстанавливают сухой порошок 650 мл деиноизированной воды. Восстановленный реактив стабилен при 4°C в течение срока использования набора.

- 5% метафосфорная кислота: Приготавливают свежую кислоту. Взвешивают 1 грамм МРА и растворяют в 20 мл деиноизированной воды.

- МРА и NADPH реактивы предназначены для использования в тот же день, когда было осуществлено восстановление.

Подготовка стандарта GSSG.

Стандарты готовы к употреблению.

Подготовка пробы.

Подготовка пробы цельной крови описана ниже.

Цельная кровь.

Отбор пипеткой. Используют методы отбора пипеткой с объемным вытеснением для определения общего GSH_t и GSSG в цельной крови.

Стадия замораживания. На стадии замораживания происходит лизис красной кровяной клетки и концентрация GSSG в пробе достигает максимума.

Замороженные пробы. Пробы крови, которые были заморожены без предварительной обработки поглощающим реактивом, не пригодны для применения в способе GSSG.

Общая линейность GSH_t. Из-за того, что GSH в цельной крови находится в высоких концентрациях, приблизительно 1 мМ пробы цельной крови будет разведен в 488 раз для сохранения линейности скорости реакции.

Стабильность проб. Глутатион (GSH) и окисленный глутатион (GSSG) относительно стабильны в интактных "покоящихся" клетках на протяжении периода до 24 часов при 4°C, пробы крови должны быть обработаны M2VP как можно быстрее и немедленно заморожены.

Определение пробы GSSG

1. Добавляют 10 мкл M2VP в микроцентрифужную пробирку для связывания эндогенного GSH.

2. Осторожно добавляют 100 мкл цельной крови, которая была должным образом приготовлена, на дно центрифужной пробирки.

3. Осторожно перемешивают на Vortex Genie при режиме 8.

4. Замораживают пробу при -70°C.

5. Размораживают пробу и немедленно перемешивают (Vortex Genie при режиме 8), инкубируют при комнатной температуре в течение 2-10 минут.

6. Добавляют 290 мкл охлажденной 5% МРА в пробирку (1/4 разведение пробы GSSG).

7. Встряхивают GSSG пробу в течение 15-20 секунд.

8. Центрифугируют при 2000×g в течение 10 минут при 8°C.

9. Добавляют 50 мкл экстракта МРА к 700 мкл буфера GSSG (1/15 разведение кислотного экстракта).

10. Помещают разбавленный экстракт в лед. (Конечное разведение пробы составляет 1/60).

Холостое определение GSSG

1. Добавляют 50 мкл МРА к 700 мкл GSSG буфера (1/15 разведение кислотного экстракта).

2. Помещают разбавленную МРА в лед до использования (конечное разведение пробы составляет 1/60).

Проба общего GSH_t

1. Осторожно добавляют 50 мкл цельной крови на дно микроцентрифужной пробирки.

2. Замораживают пробу при -70°C.

3. Размораживают пробу и немедленно перемешивают на Vortex Genie при режиме 8.

4. Добавляют 350 мкл охлажденной 5% МРА в пробирку (1/8 разведение пробы общего GSH_t).

5. Встряхивают пробу общего GSH_t в течение 15-20 секунд.

6. Центрифугируют при 2000 x g в течение 10 минут при 8°C.

7. Добавляют 50 мкл экстракта МРА к 3 мл аналитического буфера (1/61 разведение кислотного экстракта).

8. Помещают разбавленный экстракт в лед (конечное разведение пробы составляет 1/488).

Способ определения GSSG и общего GSH_t

1. Добавляют 200 мкл проб стандартов GSSG, холостого GSSG и проб крови GSSG или GSH_t в кюветы в зависимости от того, что будут измерять первым.

2. Добавляют 200 мкл хромогена в каждую кювету.

3. Добавляют 200 мкл фермента в каждую кювету.

4. Смешивают и инкубируют при комнатной температуре в течение 5 минут.

5. Добавляют 200 мкл NADPH в каждую кювету.

6. Устанавливают ноль на спектрофотометре по воде.

7. Регистрируют изменение поглощения для каждого стандарта и каждой пробы на спектрофотометре при 412 нм 0, 30, 60, 90, 120 и 150 секунд.

РАСЧЕТЫ

Расчет концентраций GSH и GSSG и соотношения GSH/GSSG требует проведения следующих пяти стадий.

1. Определение скорости реакции.

2. Построение калибровочных кривых.

3. Расчет концентраций аналита (GSSG и общего GSHt).

4. Расчет концентрации GSH.

5. Расчет соотношения GSH/GSSG.

Определение скорости реакции

Изменение поглощения при 412 нм является линейной функцией от концентрации общего GSH_t в реакционной смеси, и его описывают следующим уравнением прямой:

A₄₁₂= наклон × минуты + отрезок

где наклон уравнения регрессии равен скорости реакции. Отрезками для таких кривых скорости пренебрегают, поскольку они зависят от фона DTNB и временного интервала между добавлением NADPH (начало реакции) и первым зарегистрированным значением A₄₁₂.

В примерах, приведенных ниже, в которых применяют пробы GSSG и общего GSH_t, из линейной регрессии следует уравнение прямой GSH, полученное для общего GSH_t (Фиг.1) и GSH, полученное только для GSSG (Фиг.2):

Общий GSH_t: A412 = 0,2209 × минут + 0,2363, где значение r2 составляет 1,0000. Отсюда, скорость для пробы общего GSH_t составляет 0,2209 A412/мин.

GSSG: A412 = 0,05938 × минут + 0,1651, где значение r2 составляет 0,9999. Отсюда, скорость для пробы GSSG составляет 0,05938 A412/мин.

GSSG Холостая проба: A412 = 0,04238 × минут + 0,1454, где значение r2 составляет 0,9999. Отсюда, скорость для холостой пробы GSSG составляет 0,04238 A412/ мин.

Калибровочные кривые

В анализе GSH/GSSG-412 используют стандартную кривую, состоящую из шести точек, для определения как GSH_t, так и GSSG. Чистая скорость представляет собой разность между скоростью при каждой концентрации общего GSH_t и скоростью для холостой пробы. Из-за того, что в реакционной смеси концентрация GSSG гораздо ниже, чем концентрация общего GSH_t, рекомендуют, чтобы графики диапазонов данных, выбранных на калибровочной кривой, строили по отдельности. Для общего GSH_t, выполняют линейную регрессию на кривой, состоящей из трех точек, используя точки данных 0, 1,50 и 3,00 мкМ GSH, см. Фиг.3. В случае GSSG, используйте точки данных 0, 0,10, 0,25, и 0,50 мкМ GSH, см. Фиг.4.

Концентрации общего GSH_t, GSSG и GSH

Общая форма уравнения регрессии, описывающего калибровочную кривую, имеет вид:

Чистая скорость = наклон × общий GSH_t + отрезок.

Отсюда, калибровочную кривую для общего GSH_t используют для расчета концентраций как общего GSH_t, так и GSSG в пробе:

Общий GSH_t= (Чистая скорость-отрезок)/наклон × фактор.

Проба GSSG:

GSSG = (Чистая скорость-отрезок)/наклон × фактор разведения.

Например, как приведено на Фиг.1, чистая скорость изменения для пробы общего GSH_t составляет 0,2209-0,0423 или 0,1786 A412/мин. Используя параметры калибровочной кривой, приведенные на Фиг.3, общий GSH_t может быть рассчитан следующим образом:

Общий GSH_t=(0,1786-0,0004)/0,1447 × 488=601,0 мкМ.

Как приведено на Фиг.2, аналогично, скорость изменения пробы окисленного GSSG составляет 0,05938-0,04238 или 0,0170 A412/мин. Используя параметры калибровочной кривой, приведенные на Фиг.4, концентрация окисленного GSSG может быть рассчитана так, как показано ниже.

Окисленный GSSG = (0,01700-0,0000)/0,1475 × 30=3,448 мкМ.

Следует отметить, что поправка фактора разведения составляет 30, что учитывает исходное 60-кратное разведение, разделенное на образование 2 молекул GSH на 1 молекулу окисленного GSSG (60/2=30).

Концентрация GSH

Концентрацию восстановленного GSH в пробе рассчитывают путем определения разности между концентрациями GSH, полученного из общего GSH_t, и окисленного GSSG:

Восстановленный GSH = общий GSH_t-(2 × окисленный GSSG).

Продолжая указанный выше пример, концентрация GSH составляет:

Восстановленный GSH=601,0-6.8960=594,104 мкМ.

Соотношение GSH/GSSG.

Соотношение GSH/GSSH затем рассчитывают путем деления разности концентраций GSH на концентрацию GSSG.

GSH: соотношение GSSG = концентрация GSH/концентрация GSSG.

Продолжая указанный выше пример, соотношение GSH составляет:

GSH: соотношение GSSG = 594,104/3,448 = соотношение 172,3:1.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩЕГО СОДЕРЖАНИЯ ВЛАГИ

Способ включает анализ общего содержания влаги в композиции. Анализ основан на процедуре, описанной в способе AOAC 930.15 и способе AACC 44-19.

Пробу композиции получали, взяв один единичный объем, например 375 грамм композиции, и гомогенизируя в кухонном комбайне до однородной пастообразной консистенции. Композиция массой более 375 грамм может быть разделена для получения одинаковых и репрезентативных фракций всей композиции, так, чтобы получить пробу массой 375 грамм.

Отбирали отдельные пробы пасты композиции три раза в объеме, меньшем или равном 100 мл, и помещали по отдельности в герметично закрытые 100 мл Nasco Whirl-Pak® (Fort Atkinson, WI 53538-0901). В течение процесса герметизации Whirl-Pak®, избыточный воздух удаляли из контейнера вручную непосредственно перед окончательным закрытием, таким образом, минимизируя свободный объем в контейнере. Whirl-Pak® закрывают в соответствии с инструкциями производителя - три (3) раза сильно сгибая контейнер и загибая пластинки под углом 180 градусов.

Все пробы охлаждают при 6°C менее 48 часов перед проведением анализа на содержание влаги.

Для проведения анализа на общее содержание влаги, массу тары каждой жестяной банки и крышки для определения влаги регистрировали как 0,0001 г. Жестяные банки для определения влаги и крышки удерживали при помощи сухих и чистых щипцов. Жестяные банки для определения влаги и крышки осушали над осушителем в герметично закрытом сушильном аппарате. Whirl-Pak®, содержащий пробу, разворачивали и 2,0000+/-0,2000 грамм пробы погружали в незакрытую жестяную банку для определения влаги. Регистрировали массу пробы в жестяной банке для определения влаги. Крышку помещали сверху жестяной банки для определения влаги в открытом положении, чтобы позволить потерю влаги, но сохранить остальные вещества в течение сушки в сушильном шкафу. Жестяную банку для определения влаги с пробой, закрытую крышкой, помещали в сушильный шкаф при 135°C на 6 часов. Время контролировали при помощи таймера с обратным отсчетом.

После сушки, жестяную банку удаляли из сушильного шкафа, а высушенную крышку помещали на жестяную банку при помощи щипцов. Закрытую жестяную банку для определения влаги с осушенной пробой немедленно помещали в сушильный аппарат для охлаждения. Герметично закрытый сушильный аппарат наполняли под уровень активным осушителем. После охлаждения до комнатной температуры закрытую жестяную банку для определения влаги с осушенной пробой взвешивали до 0,0001 г и регистрировали массу. Общее содержание влаги в каждой пробе рассчитывали при помощи следующей формулы: Общее содержание влаги (%) = 100 - (масса жестяной банки, крышки и пробы после сушки - масса пустой банки и крышки) × 100/первоначальная масса пробы.

ПРИМЕРЫ

Следующие примеры дополнительно описывают и демонстрируют осуществления, которые входят в объем настоящего изобретения. Примеры приведены только с целью иллюстрации и не должны быть истолкованы как ограничения настоящего изобретения, поскольку возможны многие варианты настоящего изобретения, не выходя за объем и суть настоящего изобретения. Все приведенные ниже примеры являются композициями, которые применяют для млекопитающих.

Композиции в виде растворов, приведенные в Примерах 73-144, могут быть получены первичной сушкой и помолом зерна хлебных злаков. Смешивают высушенное зерно хлебных злаков, белковые корма, яичные продукты, витамины, минералы, источники волокна, авокадо или экстракт авокадо, или манногептулозу, или антиметаболит глюкозы. Смешивают сухие ингредиенты с мясными продуктами и источниками жиров. Смесь упаковывают в консервные банки и обрабатывали в автоклаве, получая готовый продукт. Для предварительно сформированных кусков (кусочков в соусе) смесь экструдируют, пропускают через пропарочный туннель для предварительного кондиционирования, режут для придания желаемой формы, упаковывают с добавлением воды и стерилизуют в автоклаве, получая безопасный готовый продукт.

Необхоимо понимать, что каждое максимальное численное ограничение, приведенное в данной заявке, включает каждое более низкое численное ограничение, так, как если бы такие более низкие численные ограничения были выражены в данной заявке в письменном виде. Каждое минимальное численное ограниченное, приведенное в данной заявке, включает каждое более высокое численное ограничение, так, как если бы такие более высокие численные ограничения были выражены в данной заявке в письменном виде. Каждый численный диапазон, прведенный в данной заявке, включает каждый более узкий численный диапазон, который входит в такой более широкий численный диапазон, так, как если бы все такие более узкие численные значения были выражены в данной заявке в письменном виде.

Все части, соотношения и процентные соотношения, приведенные в описании, примерах и формуле данной заявки, приведены по массе, а все численные пределы используют со стандартной точностью, которая предусмотрена в данной области техники, если не указано иное.

Все документы, процитированные в подробном описании настоящего изобретения, включены, в соответствующих частях, в данную заявку путем ссылок; цитирование любых документов не должно быть истолковано как допущение того, что они представляют собой уровень техники по отношению к данному изобретению.

Несмотря на то, что конкретные осуществления настоящего изобретения были проиллюстрированы и описаны, специалистам в данной области техники будет очевидно, что различные другие изменения и модификации могут быть осуществлены, не выходя за объем и суть настоящего изобретения. Поэтому настоящее изобретение предназначено для того, чтобы в формуле, которая приведена ниже, были охвачены все такие изменения и модификации, которые входят в объем настоящего изобретения.

Реферат

Заявленная группа изобретений относится к области ветеринарии. Согласно заявленной группе изобретений млекопитающим вводят композицию, содержащую манногептулозу или антиметаболит глюкозы или авокадо или экстракт авокадо. Композиция содержит количество указанного компонента, достаточное для увеличения соотношения восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону. Группа изобретений эффективно уменьшает воспаление и окислительный стресс у млекопитающих. 5 н. и 30 з.п. ф-лы, 4 ил., 24 табл.

Формула