Системы - RU2019140837A
Код документа: RU2019140837A
Формула
1. Система экспрессии генов, содержащая:
a. нуклеотидную последовательность, кодирующую Ascl1;
б. нуклеотидную последовательность, кодирующую Brn2; и
в. по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, кодирующую REST–подавляющую последовательность, способную подавлять REST–экспрессию.
2. Система экспрессии генов по п. 1, отличающаяся тем, что нуклеотидные последовательности (a) и (б) содержатся в одном векторе, при этом, необязательно, нуклеотидные последовательности (a), (б) и (в) содержатся в одном векторе.
3. Система экспрессии генов по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что является лентивирусным вектором и/или, при этом, нуклеотидные последовательности (a) и (б) сконфигурированные таким образом, что они транскрибируются в один транскрипт (например, бицистронный).
4. Система экспрессии генов по любому из пп. 1–3, отличающаяся тем, что нуклеотидные последовательности находятся под контролем конститутивного промотора, такого, как промотор PGK, или под контролем регулируемого промотора, такого, как регулируемый доксициклиновый промотор.
5. Система экспрессии генов по любому из пп. 1–4, отличающаяся тем, что порядок нуклеотидных последовательностей (a) и (б) является pBrn2.pAscl1, при этом, необязательно, промотор является PGK и порядок является pgk.Brn2.pgk.Ascl1 (pB.pA).
6. Система экспрессии генов по любому из пп. 1–5, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурков (WPRE) и/или, при этом, REST–подавляющая последовательность является shРНК.
7. Клетка млекопитающего, трансформированная, трансдуцированная или трансфицированная системой экспрессии генов по любому из пп. 1–8, которая, необязательно, является клеткой человека.
8. Клетка по п. 8, отличающаяся тем, что происходит из образца биопсии, полученного от млекопитающего, такого как человек, при этом, необязательно, что (i) образец биопсии содержит фибробласты, подобно щипковой биопсии кожи или биопсии легких; и/или (ii), при этом, образец биопсии получен от индивидуума с нейродегенеративным нарушением, при этом, необязательно нейродегенеративное нарушение является семейной или спорадической формой болезни Альцгеймера, или семейной или спорадической формой болезни Паркинсона, или болезнью Хантингтона; и/или (iii), при этом, образец биопсии получен от здорового индивидуума; и/или (iv), при этом, после введения системы экспрессии генов, клетка культивирована до непосредственной конверсии в индуцированный нейрон, при этом, необязательно, клетку пассировали по меньшей мере 3 раза или, при этом, клетку пассировали до 10 раз перед введением системы экспрессии генов.
9. Способ индукции нейронов непосредственно из клеток фибробластов, включающий стадию введения системы экспрессии генов по пп. 1–6 в клетку фибробласта, необязательно, при этом система экспрессии генов вводится в фибробласт путем трансдукции.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что после введения системы экспрессии генов в клетку фибробласт, клетки культивируют в среде нейрональной дифференциации, такой как NDiff227, необязательно:
a. при этом, среду нейрональной дифференциации дополняют одним или более факторами роста, при этом, необязательно, один или более факторов роста выбирают из LM–22A4, GDNF, NT3 и db–cAMP; и/или
б. при этом, среду нейрональной дифференциации дополняют одной или более малыми молекулами, при этом, необязательно, одна или более малые молекулы выбирают из CHIR99021, SB–431542, noggin, LDN–193189 и натриевой соли вальпроевой кислоты; и/или
в. при этом, способ дополнительно включает оценку клетки на наличие одной или более нейрональных характеристик, необязательно, с помощью по меньшей мере одного метода выбранного из иммуноцитохимии, сортировки флуоресцентно активированных клеток и электрофизиологии.
11. Индуцированная нейронная клетка, получаемая посредством реализации способов по п. 9 или 10, которую, необязательно, пассирована по меньшей мере 3 раза или, пассирована до 50 раз перед введением системы экспрессии генов.
12. Применение системы экспрессии генов по любому из пп. 1–6 или клетки по п. 7 или 8 при моделировании заболеваний, в диагностике или в скрининге лекарственных средств.
13. Система экспрессии генов по любому из пп. 1–6 или клетка по п. 7 или п. 8 для применения в диагностике, клеточной терапии или генной терапии.
14. Способ скрининга соединения, которое изменяет по меньшей мере один, связанный с заболеванием биомаркер, причем, способ включает:
a. воздействие на индуцированный нейрон по любому из пп. 7, 8 и 11 по меньшей мере одним химическим соединением, которое подлежит тестированию
б. регистрацию уровня по меньшей мере одного биомаркера, связанного с заболеванием
в. сравнение зарегистрированного уровня по меньшей мере одного биомаркера, связанного с заболеванием на стадии(б), с одним или более контрольными уровнями; а также
г. выбор по меньшей мере одного соединения, которое изменяет уровень по меньшей мере одного, связанного с заболеванием биомаркера с одним или более контрольными уровнями, при этом, необязательно, связанный с заболеванием биомаркер является биомаркером неврологического нарушения, такого как любое из болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона или болезни Хантингтона.
15. Способ обнаружения наличия прогрессирования или ранней стадии возникновения либо развития неврологического клинического состояния, связанного с возрастом, у индивидуума, включающий:
a. введение системы экспрессии генов по любому из пп. 1–6 в фибробласты в образце биопсии, полученном от индивидуума;
б. регистрацию уровня по меньшей мере одного фенотипа или биомаркера, потенциально связанного с заболеванием, в этих клетках на стадии индуцированного нейрона
в. сравнение зарегистрированного уровня по меньшей мере одного фенотипа или биомаркера, потенциально связанного с заболеванием на стадии(б), с одним или более контрольными уровнями; а также
г. стратификацию выборки на основе корреляции с контрольными уровнями стадии(в). по признаку отсутствия, наличия, прогрессирования или ранней стадии возникновения/развития неврологического клинического состояния, связанного с возрастом,
при этом, необязательно (i), фенотип или биомаркер, потенциально связанный с заболеванием, является фенотипом или биомаркером, потенциально связанным с неврологически заболеванием, таким как любое из болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона или болезни Хантингтона; и/или (ii), при этом, неврологическое клиническое состояние у индивидуума, связанное с возрастом, выбрано из группы, включающей семейную и спорадическую болезнь Альцгеймера; семейную и спорадическую болезнь Паркинсона; болезнь Хантингтона.
