Эффективные вирусоподобные частицы (vlps) гриппа - RU2006104113A

Реферат

1. Макромолекулярная белковая структура, содержащая

(a) белок M1 первого вируса гриппа и

(b) дополнительный структурный белок, выбранный из группы, состоящей из

(i) белка M1 второго вируса гриппа,

(ii) (a) белка HA первого вируса гриппа,

(b) белка HA второго вируса гриппа,

(iii) (a) белка NA первого вируса гриппа,

(b) белка NA второго вируса гриппа и

(iv) (a) белка M2 первого вируса гриппа,

(b) белка M2 второго вируса гриппа,

и в которой, если указанный дополнительный структурный белок не из подгруппы (i), включены оба члена, по меньшей мере, одной из подгрупп (ii), (iii), и (iv).

2. Макромолекулярная белковая структура по п.1, в которой макромолекулярную белковую структуру выбирают из группы, состоящей из субвирусной частицы, вирусоподобной частицы (VLP), капсомерной структуры или ее части, вакцины, поливалентной вакцины и их смесей.

3. Макромолекулярная белковая структура по п.1, в которой дополнительный структурный белок выбирают из группы, состоящей из нуклеопротеина (NP) и мембранных белков других видов вирусов, не являющихся вирусами гриппа.

4. Макромолекулярная белковая структура по п.3, в которой дополнительный структурный белок представляет собой мембранный белок не из вируса гриппа.

5. Макромолекулярная белковая структура по п.1, в которой белковая структура самоорганизована в клетке-хозяине из рекомбинантной конструкции.

6. Макромолекулярная белковая структура по п.1, в которой, по меньшей мере, один структурный белок получен из птиц или млекопитающих.

7. Макромолекулярная белковая структура по п.1, в которой структурный белок получен из различных подтипов вируса гриппа.

8. Макромолекулярная белковая структура по п.7, в которой подтип вируса гриппа выбирают из группы, состоящей из вирусов гриппа подтипов A и B.

9. Макромолекулярная белковая структура по п.7, в которой вирус гриппа содержит вирус гриппа дикого типа.

10. Макромолекулярная белковая структура по п.1, в которой указанная макромолекулярная белковая структура содержит, по меньшей мере, один структурный белок, который способен самоорганизовываться в гомотипические или гетеротипические вирусоподобные частицы (VLPs).

11. Макромолекулярная белковая структура по п.2, в которой часть, по меньшей мере, одного белка содержит химерную белковую структуру, содержащую часть, не продуцируемую вирусом гриппа.

12. Композиция, содержащая макромолекулярную белковую структуру по п.2 и носитель или разбавитель.

13. Композиция по п.12, дополнительно содержащая адъювант.

14. Макромолекулярная белковая структура по п.2, в которой указанную структуру выбирают из числа составов, демонстрирующих активность гемагглютинина.

15. Макромолекулярная белковая структура по п.2, в которой указанную структуру выбирают из числа составов, демонстрирующих активность нейраминидазы.

16. Макромолекулярная белковая структура по п.2, содержащая конформационные эпитопы гриппа VLP, которые индуцируют нейтрализующие антитела к вирусу гриппа.

17. Вакцинная композиция, содержащая макромолекулярную белковую структуру по п.16 и носитель или разбавитель

18. Способ продуцирования VLP, полученных из гриппа, включающий

(a) конструирование рекомбинантной конструкции, кодирующей структурные гены гриппа, в которой рекомбинантный бакуловирус кодирует М1, HA и, по меньшей мере, один первый структурный белок, полученный из вируса гриппа,

(b) трансфицирование, инфицирование, или трансформация подходящей клетки-хозяина указанным рекомбинантным бакуловирусом и культивирование клетки-хозяина при условиях, допускающих экспрессию М1, HA и, по меньшей мере, одного структурного белка, полученного из вируса гриппа,

(c) обеспечение формирования VLP в указанной клетке-хозяине,

(d) сбор сред инфицированных клеток, содержащих эффективные VLP гриппа, и

(e) очистка VLP.

19. Способ по п.18, в котором структурный белок, полученный из вируса гриппа выбирают из группы, состоящей из NA, M2, и NP.

20. Способ по п.18, в котором, по меньшей мере, один структурный белок получен птиц или млекопитающих.

21. Способ по п.18, в котором структурный белок выбирают из группы, состоящей из вирусов гриппа подтипов A и B.

22. Способ по п.18, в котором клетка-хозяин представляет собой эукариотическую клетку.

23. Способ по п.18, в котором VLP содержит химерную VLP.

24. Способ по п.18, дополнительно содержащий стадию

(a) совместное трансфицирование, совместное инфицирование или совместная трансформация клетки-хозяина второй рекомбинантной конструкцией, кодирующей второй белок гриппа, посредством чего указанный второй белок гриппа включается в VLP.

25. Способ получения лекарственного вещества, включающего VLP гриппа, содержащий

(a) введение рекомбинантных конструкций, кодирующих гены вируса гриппа в клетки-хозяева,

(b) обеспечение самосборки рекомбинантных белков вируса гриппа в эффективную гомотипическую или гетеротипическую VLP в клетках,

(c) выделение и очистку VLP гриппа и

(d) составление вещества лекарственного средства, содержащего VLP гриппа.

26. Способ по п.25, в котором вещество лекарственного средства дополнительно содержит адъювант.

27. Способ получения лекарственного продукта, содержащий стадию смешивания лекарственного вещества по п.25, содержащего VLP гриппа, с липидной везикулой.

28. Способ по п.27, в котором липидная везикула представляет собой неионную липидную везикулу.

29. Способ обнаружения гуморального иммунитета к гриппу у позвоночного, содержащий

(a) обеспечение тестового реактива, включающего эффективное для обнаружения антитела количество белка вируса гриппа, содержащего, по меньшей мере, один конформационный эпитоп макромолекулярной структуры вируса гриппа,

(b) введение тестового реактив в контакт с образцом физиологической жидкости позвоночного, которого будут обследовать на грипп,

(c) обеспечение связывания антител, специфичных к вирусу гриппа, содержащихся в образце, с конформационным эпитопом макромолекулярной структуры вируса гриппа для образования комплексов антиген-антитело,

(d) отделение указанных комплексов от несвязанных комплексов,

(e) введение комплексов в контакт со связывающим иммуноглобулин агентом, меченным детектируемой меткой, и

(f) определение количества связывающего иммуноглобулин агента, меченного детектируемой меткой, который связан с указанными комплексами.

30. Способ обнаружения вируса гриппа в образце от животного или человека с подозрением на заражение указанным вирусом содержащий

(a) обеспечение антител, обладающих специфичностью, по меньшей мере, к одному конформационному эпитопу частицы вируса гриппа, в котором антитела содержат метку, вырабатывающую детектируемый сигнал, или присоединены к детектируемому меченному реактиву,

(b) введение образца в контакт с указанными антителами,

(c) обеспечение связывания антител с вирусом гриппа и

(d) определение наличия вируса гриппа, присутствующего в образце для испытания, посредством детектируемой метки.

31. Способ лечения, включающий введение позвоночному эффективного количества композиции по п.13.

32. Способ предотвращения гриппа, включающий введение позвоночному эффективного количества вакцинной композиции по п.17.

33. Способ обеспечения защитного иммунного ответа, включающий введение композиции по п.13.