Способ получения замещенных тетралинов - RU2002741C1

Код документа: RU2002741C1

Описание

ления, которые благоприятствуют образо- ванию желаемого изомера. Так, например, восстановление NaBH-j в присутствии хлорида цезия обычно хорошо благоприятствует образованию цис-изомера. Каталитическая гидрогенизация - обычно также желательный способ восстановления, и, как правило, он осуществляется в условиях, которые несколько более жесткие, чем описанные выше (например, более продолжительное время, более высокое содержание катализатора , более высокие температура и/или давление ).

Что касается биологической активности соединений, отвечающих данному изобре- тению, то известно, что арахидоновая кислота метаболизируется в организме млекопитающих животных двумя различны- ми путями, один из которых приводит к образованию простагландинов и т0омбоксанов, и другой приводит к различным окислительным продуктам, называе- мышгзйкотриенами, которые обозначаются комбинацией буквы и цифры, например Б4, С4 и D4. Первый этап данного окислительно- го пути - это окисление арахидоновой кислоты под воздействием 5-липоксигенаэного фермента, фермента, который обычно инги- бируется соединениями (I), отвечающими данному изобретению, блокируя таким об- разом синтез всех лейкотриенов. Он как таковой обеспечивает механизм, позволяющий использовать данные соединения для лечения или предупреждения астмы (когда LTC4 и LTD4 являются медиаторами при воспалениях), apfptrra (когда LTB4 является медиатором при воспалении ), псориаза (когда UTB4 является медиатором ), язв (когда LTC4 и LTD4 являются медиаторами), и инфаркта миокарда (когда ТВ4 является медиатором). Повышение этой ингибирующей фермент активности проявляется в обычной способности данных соединений антагонизировать лейкотриен D4 (то есть блокировать рецепторы LTD4). Обычно данные соединения антагонизиру- ют также лейкотриен 84. Информацию по лейкотриенам можно получить в публикации:

Bailey и др., Ann, Reports Med. Chem.. с. 203-217(1982).

Активность соединений формулы (I) в условиях ин витро определяется при следующем испытании. Клетки RBL-1, сохраняемые в форме монослоя, выращиваются в течение 1 или 2 дней в тканевой культуре в минимальной основной среде (Eagle) с солью Earl плюс 15%-ной эмбриональной бычьей сыворотки, дополненной антибиоти- ческим противогрибковым раствором

(GIBCO). Клетки один раз промываются RPMIJ640 (GIBCO) и повторно суспензируются в PM11640 плюс I микромолярный глю- татион до клеточной плотности 1x10 клеток/мл 0,5 мл этой клеточной суспензии инкубируется при 30°С вместе с 0,001 мл диметоксисульфоксидного раствора лекарства в течение 10 мин. Реакция начинается при одновременном вводе 0,005 мл (14С) - арахидоновой кислоты в этаноле и 0,002 мл А23187 в диметилсульфоксиде до получения конечных концентраций соответственно 5,0 и 7,6 мкмол. После инкубирования в течение 5 мин при температуре 30°С реакция прекращается при вводе 0,27 мл ацетонитрила (уксусной кислоты (100/0,3). и данная среда осветляется путем центрифугирования. Осуществляется анализ распределения продукта путем инжекции 0.2 мл осветленного поверхностного слоя центрифугирования в колонку жидкостной хроматографии высокого разрешения. Разделение радиоактивных продуктов осуществляется в радиальной колонке PAXCN (внутренним диаметром 5 мм. Waters с использованием системы растворителей ацетонитрил (НаО) уксусная кислота (0,1%) с линейным ацето- нитрильным градиентом от 35 до 70% в течение 15 мин со скоростью 1 мл/мин. Количественное определение осуществляется с использовпнием регистрирующего устройства радиоактивности Бертольда, снабженного встроенным интегратором и ячейкой потока объемом 0,2 мл Омнифлер 2,4 мл/мин (NEN) с колонкой для потока. Суммарные единичные дозы для каждого продукта рассчитываются как процент от общих суммарных доз и затем сопоставляются со средними контрольными значениями . Данные результаты выражаются как процент подавления и выражаются в виде кривых зависимости от логарифма концент- рации лекарства. Значения fCso определяются графически.

Результаты приведены таблице.

Проводили испытание рецептора лей- котриена 4 (LTD4) с определением способно- сти соединения конкурировать с радиомеченным LTO4 для специфических точек рецептора LTD4 на легочных оболочках морской свинки. В этом испытании морские свинки в возрасте 3-4 недели акклиматизировались в стандартных условиях в течение 3 дней, после чего они умерщвлялись . Конечный возраст свинок составлял 24-31 дней. Морских свинок оглушали ударом по задней части шеи и обескровливали путем выреза сонной артерии. Раскрывали полость грудной клетки и легкое удалили, промывали в 50 ммол буфера трис (,0) и помещали в чистый буферный раствор. В данной и во всех последующих операциях все ткани и буферные растворы выдерживали на льду в процессе препарирования, и все операции центрифугирования осуществляли при 4°С. Ткани бронхов и соединительные ткани извлекали из легких. Данную ткань взвешивали и помещали в 50 мл поликарбонатные пробирки с буферным раствором в соотношении 1 г ткани / 3 мл буферного раствора. Ткань гомогенизировалась посредством устройства Тиссумайзера Текмана при полной скорости в течение 3 с и центрифугировалась во вращающемся устройстве Sovall SS-34 со скоростью вращения 3250 об/мин в течение 15 мин. Поверхностный слой центрифугировался со скоростью 19000 об/мин в течение 10 мин.

Полученный спрессованный осадок снова суспензировался в буферном растворе с использованием гомогенизатора Тиссумайзера со средней скоростью (позиция 75) в течение 10 с. Эта новая суспензия снова центрифугировалась со скоростью 19000 об/мин в течение 10 мин. Образующийся осадок снова суспензировался с использованием устройства Тиссумайзера с небольшой скоростью (позиция 50) в течение 10с в 1 мл буферного раствора на 1 г исходной ткани. Эта конечная суспензия перемешивалась при т-ре 4°С с одновременным отбором аликвот в полипропиленовые пробирки и выдерживалась при -70°С. В полистмроль- ную пробирку вводили следующие компоненты:

(1)25 мкл одного из следующих:

A.Диметилсульфоксид (для определения общего связывания).

B.1 мкмол LTD4 (для определения неспецифического связывания).

C.30 нмол - 100 мкмол соединения в диметилсульфоксиде.

(2)0,025 мл ЗН - LTD4 (с удельной активностью 30-60 С1 (ммоль) в 50 ммол буфера Трис (,0)+10 мкмол 2-цистеина (12000- 15000 срт 0,025 мл).

(3)0,2 мл разбавленного мембранного препарата (1 мг/мл) (препарат разбавляли в 50 мкмол буферного раствора Трис+М MgCh так, чтобы в 200 мкмол белка достигалась концентрация MgCte 10 мкмол).

Эти реакционные пробирки инкубировались при 25°С в течение 30 мин. В каждую пробирку вводили 4 мл холодного буферного раствора Трис+10 мкмол MgCte. Содержимое их быстро фильтровалось через фильтр Батмана GF/C в разделительном устройстве Yeda. Фильтр трехкратно промывали 4 мл буферного раствора Трис-МдСЬ.

Этот фильтр переносили в сцинцилля- ционную ампулу. В ампулу вводили ультрафлюоресцентную сцинцилляционную жидкость. Ампулу закрывали, подвергали завихряющему движению и подвергали детектированию в течение 3 ч. Процент специфического связывания рассчитывали с

помощью следующей формулы

%SB(x-NCBXTB-NSB),

где - отсчетов в минуту образца; ЫЗВ срт-отсчетов в минуту неспецифического связывания;

ТВ рт -отсчетов в минуту общего связывания .

Процент специфического связывания представлен графически как функция концентрации соединения. ICso является концентрацией , при которой имеет место 50% Sb.Ki рассчитывается по следующей формуле

KHIC5o)/ 1-KL/Kd),

где L - концентрация вводимого лиганда (микроМол)срт вода/срт 1 мкмол, ЗН LTD4 .

мкмол (константа диссоциации). Человеческие нейтрофильные лейкоциты используются для измерения конкуренции испытываемых молекул с 3HJ-LTB4 для

связывания в рецепторе LTB4. В данном испытании нейтрофилы отделяются от гепа- ринизированной человеческой периферической крови (обычно 100 мл) с использованием градиента Aypague-Ficoll

(плотностью 1,095 г/мл). Для повторного суспензирования клеток используется уравновешенный солевой раствор Хэнка (HBSS),. содержащий 0,1 г/100 мл альбумина бычьей сыворотки (HBSS-BSA). Этот одноэтапный

процесс Aypagua-Ficofl дает высокочистую популяцию нейтрофил (более, чем 95%). Клеточная жизнеспособность определяется по эксклюзии красителя трипанового синего (должно быть более 95%, и функциональное единство нейтрофил определяется по восстановлению нитросинего тетразолово- го (должно быть более, чем 85% положительных ). Подвергаемые испытанию соединения растворяются в диметилсульфоксиде до концентрации 100 мкмол. Эти растворы разбавляются в 500 раз с исполь- зованием HBSS-BSA. 100 мкмол концентрация лекарства достигается путем ввода разбавленного образца в а ликвоте (0,5 мл) в реакционную пробирку. Приготавливается

ряд разбавленных растворов 1-3 и (принятым образом), и аликвота (0,5 мл) этих разбавленных растворов вводится в инкубационную пробирку, В боросиликатные пробирки (12x75 мм) вводится (ЗН - LTB4 (МЕМ:удельная радиоактивность более чем 180 Ci/ммоль, 0,005 мл в абсолютном этаноле ). Затем вводится 0,5 мл лекарственного раствора (см. выше). Реакция связывания инициируется путем добавления 0,5 мл охлажденных льдом нейтрофилл с клеточной плотностью 5х106 клеток/мл, и продолжается при 4°С в течение 30 мин. Инкубация прекращается путем быстрой фильтрации через фильтр Ватман GF/C стекло с отделением свободного от связанного радиоактив- но меченного лиганда. Эти фильтры трехкратно промываются охлажденным льдом HBSS высушиваются, помещаются а 4 мл ультрафлюор и подвергаются индикации . Общее связывание определяется как СРМ, присутствующий на фильтре (клеточно ассоциированный), когда радиоактивно меченый лиганд инкубируется с нейтрофилами при отсутствии какого-либо конкурирующего агента. Неспецифическое связывание получается путем инкубации клеток с радиоактивно меченым лигандом плюс 1 мкмол. нерадиоактивно меченого LTB4. Специфическое связывание является суммарным связыванием СРМ, откорректированным на неспецифической связанный СРМ. Каждая пробирка корректируется на неспецифическое связывание. Точки полу-максимально- го смещения радиоактивно меченого лиганда определяются путем графического анализа полулогарифмической кривой процента специфического связывания (при отсутствии какого-либо конкурента) в зависимости от концентрации.

Для оценки соединений формулы (I) e условиях ин виво они испытываются путем так называемого анализа на летальность PAF.

Материалы для испытания:

Мыши: самцы разновидности CDI, все примерно одинакового веса {примерно по 26 г), по 12 штук на группу. Носитель для дозирования лекарства, вводимого орально: ЕЕЗ(5%-ный этанол, 5% эмульфор,-90%- ный солевой раствор). Выдерживается при комнатной температуре.

Лекарства: Для обычного отбора дозой 50 мг/кг, 20 мг лекарства растворяются в 4 мл EES, с использованием ультразвукового воздействия в ультразвуковой ванне или измельчения в измельчающем устройстве Теп Broeck для растворения лекарства, если это необходимо. Если растворимость все еще

остается проблемой, то лекарство используется в форме суспензии.

Носитель для внутривенной инъекции: Солевой раствор вместе с 2,5 мг/мл бычьего 5 сывороточного альбумина (BSA, Сигма #А4378) и 0.05 мг/мл пропанол (Сигма # Р0884). Ежедневно приготавливается свежая порция и выдерживается при комнатной температуре. Фактор активирования

0 тромбоцитов (PAF-): Приготавливается 10 мкмол. Основной раствор путем растворения 1 мг PAF/Calblochem # 429460) в 0,18 мл этанола. Этот раствор выдерживается при -20°С и разбавляется в носителе в день

5 использовании. Концентрация используемого PAF регулируется таким образом, чтобы при вводе дозой 0,1 мл/10 г тела, умерщвлялось примерно 80% необработанных контрольных организмов. Это обычно

0 составляет 0,028 г/кг (разбавление основного раствора от 1 до 2034). Раствор приготавливается в стеклянных емкостях и используется посредством стеклянных шприцов для уменьшения до минимума ад5 гезии PAF. Он выдерживается при комнатной температуре.

Положительный контроль: используется фенидон концентрацией 25 мг/кг (аппроксимация ED50).

0 Метод

За 45 мин до Инъекции PAF мышей обрабатывают путем орального ввода лекарства в количертве 0,1 мл/10 г тела. Через 35-40 мин их помещают под воздействие

5 обогревающей лампы для расширения хвостовой вены для инъекции PAF вводится путем внутривенной инъекции в количестве 0V1 мл/10 г массы тела, и смерть обычно наступает в течение 30 мин, редко по про0 шествии 60 мин. Результаты выражаются как процент смертности, в сравнении с контрольными результатами. Ввиду того, что данный анализ чувствителен к эндогенным катехоламинам) например, защита мышей

5 бета-агонистами), то для разрешения этой возможной проблемы используется пропанол . Он помогает также, если мыши а климатизируются к комнатным условиям до испытания я комнатные шумы и температу0 ра сохраняются умеренными и постоянными . Расстояние от нагревательной лампы должно устанавливаться таким, чтобы расширение сосудов происходило без создания видимого стресса на мышей. Голодание

5 мышей должно быть исключено, вариации:

1.Время для орального дозирования может быть изменено.

2.внутривенный ввод дозированного лекарства возможен за счет совместной

иньекции лекарства и PAF в том же объеме и в том же носителе, что указаны выше, для совместной иньекции, PAF приготавливается в двойной концентрации от желаемой концентрации в солевом растворе вместе с BSA и произволом, как указано выше, и лекарство приготавливается в двойной концентрации от желаемой концентрации в том же носителе. Оба препарата смешиваются в равных объемах непосредственно перед инъекцией.

Для использования с целью профилактики или лечения астмы, артрита, псориаза, язвы желудочно-кишечного тракта, у млекопитающих животных, в том числе человека, соединение формулы (I) дается в количестве, ингибирующем 5-липоксигеназу и/или блокирующем лейкотриеновый рецептор, составляющем примерно 0,5-50 мг/кг в день, в виде единичной или разделенных дневных доз. Более предпочтительный дозированный предел составляет от 2 до 20 мг/кг в день, хотя в отдельных случаях по решению лечащего врача могут потребоваться дозы за указанными пределами. Предпочтительным способом введения лекарства является оральный, но в отдельных случаях предпочтителен парэнтеральный ввод, например внутримышечный, внутривенный, внутри- кожный, в тех случаях, когда впитывание лекарства при оральном вводе снижается под влиянием заболевания или когда пациент не в состоянии проглотить лекарство.

Соединения, отвечающие данному изобретению , обычно вводятся в форме фармацевтических композиций, включающих по меньшей мере одно из соединений формулы 1, вместе с фармацевтически пригодным носителем или разбавителем. Также композиции обычно приготавливаются общеизвестным образом с использованием твердых или жидких носителей или разбавителей , как принято для подходящего способа ввода: для орального ввода - в форме таблеток , твердых или мягких желатиновых капсул , суспензий, гранул, порошков и т.д.; и для парентерального ввода - в форме инъекционных растворов или суспензий и т.д.

Данное изобретение иллюстрируется нижеследующими примерами, которые, однако , не ограничивают объем изобретения.

Пример Цис- и транс-2-бутил-1,2,3,4- тетра гидро-7-(2-хинол ил)метоксинафтол.

8 раствор(0°С)2,00 г{5,57 ммоль) конечного продукта предыдущего примера в 40 мл метанола вводят 1,26 г боргмдрида натрия . Реакционная смесь перемешивается в течение 2 ч при 0°С, и затем концентрируется во вращающемся выпарном аппарате. Остаточный продукт концентрирования

растворяется в смеси простого эфира и насыщенного NaCI. Органический слой высушивается над сульфатом магния и выпаривается до образования масла, которое очищается в колонке жидкостной хрома- тографии умеренного давления на силикагеле с элюированием смесью простой эфир: толуол в соотношении 1:3, и элю- ируются в последовательном порядке 1,0 г

0 (50%) щис-изоме а и 770 мг(38%) транс-изомера , оба изомера кристаллизуются из смеси простой эфир/гексан. Цис-изомер Температура плавления 78.5-80°С.

5 Масс-спектр (т/е) 361 (М4), 342. 286. 143. . 142 и 115. Спектр ИК (CHCIs) 3590. 3400, 1609, 1600, 1572см 1,

Спектр 1Н - ЯМР (CDCI3.300 МГц) дельта (ч/млн.): 0,89 (т., J-7 Гц, СНз). 1,2-1.7 (м.,

0 9Н). 2,55-2,82 (м„ CHz). 4.53 (д, ,0 Гц. ОН), 4,73 (ОН), 5.33 (с.. СН20), 6.85 (д.д. ,2 Гц, АгН). 6,98(м, 2А Н). 7,49 (д.д., ,8 Гц, АгН), 7,62 (д., Гц,, АгН), 7,68 (д.д,, ,8 Гц, АгН), 7,77 (д.. Гц, АгН), 8,03 (д., Гц;

5 АгН) и 8,13 (д., J-8 Гц, АгН). Элементный анализ

C24H27N02

Рассчитано, %: С 79,74; Н 7,53; N 3,87. Найдено, %: С 79,44; Н 7.42; N 3,81. 0 Транс-изомер

Т-ра плавления 70-72°С. . Масс-спектр (гф) 361 (М),286, 143, 142 и 115.

ИК-спектр () 3580. 3485, 1605, 5 1600,1575см 1.

Спектр 1Н-ЯМР(СОС1з, 300 МГц) дельта (ч/млн):

0,87 (т.. Гц, СНз), 1,1-1,8 (м.,8Н), 1,97

(м., 1 Н),2,66(м., СН2), 4,32 (т., ,98 Гц. СН),

0 5.33 (см ОСН2), 6,83 (д.д., ,2 Гц, АгН), 6,96

(д., Гц, АгН), 7,15 (д., Гц, АгН), 7,49

(д.д., 8; 8 Гц, АгН), 7,63 (д., Гц, АгН),

7,66 (д.д., 8 Гц, АгН). 7,77 (д., Гц,

АгН), 8,03 (д., Гц. АгН), и 8,13 (д., Гц,

5 АгН).

Элементный анализ

C24H27N02

Рассчитано, %: С 79,74; Н 7.53; N 3,87.

Найдено, %: С 79,38; Н 7,42; N 3,79. 0 П р и м е р 2. Цис- и транс-2-бутил- 1,2,3,4-тетрагидро-7-(2-пиридил)метокси-1 -нафтол.

Осуществляя процесс таким же образом , как и в примере 1, конечный продукт 5 предыдущего примера (2,29 г, 7.41 ммоль) превращается в данные желаемые соединения .

Цис-изомер

0,96 г (42%). т.пл. 101-103°С; менее полярный .

Масс-спектр (m/e) 311 (М4). 236,199,94. 93 и 92.

ИК-спектр (СНОз) 3592, 3437, 1610, 1594,1574 смЛ

Спектр 1Н-ЯМР (СОС1з, 300 МГц) дельта (ч/млн.):

0.87(м., СНз), 1.1-1,9(м.,9Н), 2,5-2,8(м.. СН2), 4.51 (шир., с, СН). 5,13 (с., СНаО), 6,80 (д.. J-8 Гц, АгН), 6,91 (шир.с.. АгН), 6,97 (шир. д., J-8 Гц. АгН). 7.14(д.д„ J-8 Гц, АгН), 7,44 (д.. J-8 Гц, АгН). 7.63 (д.д., J-8; 8 Гц, АгН) и 8,51 д., J-5 Гц, АгН).

Элементный анализ:

C20H25N02

Рассчитано, %: С 77,14; Н 8,09; N 4,50 Найдено. %: С 77,31: Н 7,94; N 4.46, Транс-изомер

1,12 г (49%). т-ра плавления 62-64°С:

более полярный.

Масс-спектр (m/e) 311 (М), 292. 236.

199.94 и 93 и 92. ИК-спектр (СНС1з) 3584, 3414. 1609.

1594, 1574 см 1

Спектр 1 Н-ЯМР (CDCts, 300 МГц) дельта (ч/млн.: 0,89 (м., СН), 1,1-2.1 (м„ 9Н). 2,67(м., СНа), 4,32 (шир.с., СН), 5,15 (с.. ОСН2), 6J9 (д.д„ J-8; 2 Гц, АгН), 6,96 (д.. J-8 Гц, АгН). 7.11 (д., J-2 Гц, АгН). 7,17 (д.д.. J-8; 8 Гц, АгН), 7,48 (д., J-8 Гц, АгН), 7,66 (д.д., J-8; 8 Гц, АЖ) и 8,53 (д., J-5 Гц, АгН)

(56)Патент US N: 4661596, кл. С 07 D 215/00.