Хроматографические способы - RU2010105312A

Реферат

1. Способ регенерации катионообменной хроматографической колонки после элюирования целевых веществ, включающий следующие шаги в представленной последовательности: ! элюирование адсорбированных полипептидов из колонки забуференным водным раствором, содержащим хлорид натрия в концентрации по меньшей мере 500 мМ, ! промывание колонки очищенной водой, ! введение в колонку 0,5 М раствора гидроксида натрия, ! промывание колонки очищенной водой, ! введение в колонку раствора, содержащего 0,5 М дигидрофосфата натрия и 1 М фосфорной кислоты, ! промывание колонки очищенной водой, ! введение в колонку 0,5 М раствора гидроксида натрия по меньшей мере на 4 ч и !регенерацию катионобменной колонки посредством промывания колонки очищенной водой. ! 2. Способ получения монопегилированного эритропоэтина, в котором один полиэтиленгликолевый остаток ковалентно связан с эритропоэтином по N-концу и/или внутреннему лизиновому остатку в форме, являющейся в существенной степени гомогенной, включающий следующие стадии: ! а) ковалентное связывание полиэтиленгликолевого остатка с эритропоэтином по N-концу и/или внутреннему лизиновому остатку с помощью активированного реагента для ковалентного связывания полиэтиленгликолевого остатка с молекулярной массой от 20 кДа до 40 кДа с эритропоэтином по N-концу и/или внутреннему лизиновому остатку, ! б) очистку получаемого на стадии а) эритропоэтина, в котором полиэтиленгликолевый остаток ковалентно связан с эритропоэтином по N-концу и/или внутреннему лизиновому остатку, с помощью двух последовательных катионообменных хроматографических стадий, где на первой и второй катионообменных хроматог