Способ очистки для удаления вариантов антител с сульфатированием тирозина; очищенные композиции - RU2019116216A
Код документа: RU2019116216A
Формула
1. Композиция, включающая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое включает:
вариабельный домен легкой цепи, включающий:
CDR-L1, которая включает аминокислотную последовательность: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38);
CDR-L2, которая включает аминокислотную последовательность: GASNLES (SEQ ID NO: 39); и
CDR-L3, которая включает аминокислотную последовательность: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40); и
вариабельный домен тяжелой цепи, включающий:
CDR-H1, которая включает аминокислотную последовательность: DYNVD (SEQ ID NO: 33);
CDR-H2, которая включает аминокислотную последовательность:
DINPNNGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 59);
DINPNSGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 60);
DINPNDGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 61);
DINPNQGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 62);
DINPNGGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 63); или
DINPNX1GGTIYX2QKFX3X4 (SEQ ID NO: 64), где X1= D,N,S или Q, X2= A или S, X3= Q или K, и X4= E или G; и
CDR-H3: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35); не содержащая определяемых уровней антител или фрагментов, которые включают сульфатированный тирозин на CDR-L1.
2. Композиция по п. 1, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент также не содержит определяемых уровней сульфатированного тирозина в одном или нескольких членах, выбранных из группы, включающей FR-L1, FR-L2, CDR-L2, FR-L3, CDR-L3, FR-L4, FR-H1, CDR-H1, FR-H2, CDR-H2, FR-H3, CDR-H3, FR-H4 и константный домен.
3. Композиция по любому из пп. 1-2, где антитело представляет собой Ab6, включающее аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 52 и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 51.
4. Композиция по любому из пп. 1-3, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент включает N-связанные гликаны CHO.
5. Композиция по любому из пп. 1-4, где антитело представляет собой Ab6, и композиция включает одну или несколько разновидностей гликозилированного антитела Ab6, имеющих молекулярные массы около 148590 Да, 148752 Да или 148914 Да.
6. Композиция по любому из пп. 1-5, где антитело представляет собой Ab6, в котором N-концевой глутамин в тяжелой цепи преобразован в пироглутамат и/или C-концевой лизин в тяжелой цепи удален.
7. Способ для удаления антител с сульфатированным тирозином или их антигенсвязывающих фрагментов из водной смеси, включающей антитела, в которых тирозин является сульфатированным и в которых тирозин не является сульфатированным, или их антигенсвязывающие фрагменты, включающий доведение pH смеси до около 6,5 - около 7,0, контактирование водной смеси с анионообменной смолой и сохранение не связанной со смолой водной фракции смеси из смолы.
8. Способ по п. 7, который дополнительно включает промывку смолы водной композицией в изократических условиях и удаление и сохранение промывочной композици из смолы.
9. Способ по любому из пп. 7, 8, включающий уравновешивание анионообменной хроматографической смолы, которая включает диметиламинопропильный анионообменный лиганд, в хроматографической колонке раствором 25 мМ фосфата натрия pH 6,5, доведение pH водной смеси до около 6,5, нанесение смеси на колонку, сбор проточной фракции из колонки, промывку смолы в колонке раствором 25 мМ фосфата натрия pH 6,5 и сбор проточной фракции из промывки.
10. Способ по любому из пп. 7, 8, включающий уравновешивание анионообменной хроматографической смолы, которая включает кватернизированный полиэтилениминовый анионообменный лиганд, в хроматографической колонке раствором 25 мМ фосфата натрия и 5 мМ NaCl pH 7,0, доведение pH водной смеси до около 7,0, нанесение смеси на колонку, сбор проточной фракции из колонки, промывку смолы в колонке раствором 25 мМ фосфата натрия и 5 мМ NaCl pH 7,0 и сбор проточной фракции из промывки.
11. Способ по любому из пп. 7-10, где осуществляют сбор проточной фракции анионообменной хроматографии при A280 поглощении, когда A280 сначала достигает по меньшей мере около 2,5 единиц оптической плотности/см, и продолжают до тех пор, пока A280 не падает ниже около 1,0 единиц оптической плотности/см.
12. Способ по любому из пп. 7-11, дополнительно включающий очистку антитела или антигенсвязывающего фрагмента катионообменной хроматографией, анионообменной хроматографией в режиме связывания-элюирования, хроматографией гидрофобных взаимодействий, хроматографией с протеином-A, хроматографией с протеином-L, хроматографией с протеином-G, хроматографией на гидроксиапатите, эксклюзионной хроматографией, фракционированным осаждением, фильтрованием, центрифугированием или вирусной инактивацией.
13. Способ по любому из пп. 7-12, где легкие цепи и тяжелые цепи иммуноглобулинов антител или антигенсвязывающих фрагментов экспрессированы в клетке яичника китайского хомячка.
14. Способ по любому из пп. 7-13, где антитела или антигенсвязывающие фрагменты включают:
вариабельный домен легкой цепи, включающий:
CDR-L1, которая включает аминокислотную последовательность: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38);
CDR-L2, которая включает аминокислотную последовательность: GASNLES (SEQ ID NO: 39); и
CDR-L3, которая включает аминокислотную последовательность: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40); и
вариабельный домен тяжелой цепи, включающий:
CDR-H1, которая включает аминокислотную последовательность: DYNVD (SEQ ID NO: 33);
CDR-H2, которая включает аминокислотную последовательность:
DINPNNGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 59);
DINPNSGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 60);
DINPNDGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 61);
DINPNQGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 62);
DINPNGGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 63); или
DINPNX1GGTIYX2QKFX3X4 (SEQ ID NO: 64), где X1= D,N,S или Q, X2= A или S, X3= Q или K, и X4= E или G; и
CDR-H3: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35).
15. Способ по любому из пп. 7-14, где антитела или антигенсвязывающие фрагменты представляют собой антитела, и где антитела с отсутствием определяемых уровней сульфатированного тирозина представляют собой разновидности гликозилированного Ab6 антитела, имеющие молекулярные массы около 148590 Да, 148752 Да и/или 148914 Да.
16. Способ по любому из пп. 7-15, где антитела включают аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 52 и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 51.
17. Способ по любому из пп. 7-15, где антитела включают аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 52 и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 51, где N-концевой глутамин в тяжелой цепи преобразован в пироглутамат и/или C-концевой лизин в тяжелой цепи удален.
18. Композиция, которая является продуктом способа по любому из пп. 7-17.
19. Способ для удаления антител с сульфатированным тирозином или их антигенсвязывающих фрагментов из водной смеси, включающей антитела, в которых тирозин является сульфатированным и в которых тирозин не является сульфатированным, или их антигенсвязывающие фрагменты, включающий доведение pH водной смеси до около 6,5 - около 7,5, контактирование смеси с анионообменной смолой и сохранение не связанной со смолой водной фракции смеси из смолы.
20. Способ по п. 19, который дополнительно включает промывку смолы водной композицией в изократических условиях и удаление и сохранение промывочной композиции из смолы.
21. Способ по любому из пп. 19, 20, включающий уравновешивание анионообменной хроматографической смолы, которая включает анионообменный лиганд, в хроматографической колонке раствором фосфата натрия около 10-50 мМ pH около 6,5-7,5, доведение pH водной смеси до около 6,5-7,5, нанесение смеси на колонку, сбор проточной фракции из колонки, промывку смолы в колонке раствором фосфата натрия около 10-50 мМ pH около 6,5-7,5 и сбор проточной фракции из промывки.
22. Способ по любому из пп. 19-21, где легкие цепи и тяжелые цепи иммуноглобулинов антител или антигенсвязывающих фрагментов экспрессированы в клетках яичников китайского хомячка.
23. Способ по любому из пп. 19-22, где антитела или антигенсвязывающие фрагменты включают:
вариабельный домен легкой цепи, включающий:
CDR-L1, которая включает аминокислотную последовательность: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38);
CDR-L2, которая включает аминокислотную последовательность: GASNLES (SEQ ID NO: 39); и
CDR-L3, которая включает аминокислотную последовательность: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40); и
вариабельный домен тяжелой цепи, включающий:
CDR-H1, которая включает аминокислотную последовательность: DYNVD (SEQ ID NO: 33);
CDR-H2, которая включает аминокислотную последовательность:
DINPNNGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 59);
DINPNSGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 60);
DINPNDGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 61);
DINPNQGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 62);
DINPNGGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 63); или
DINPNX1GGTIYX2QKFX3X4 (SEQ ID NO: 64), где X1= D,N,S или Q, X2= A или S, X3= Q или K, и X4= E или G; и
CDR-H3: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35).
24. Способ по любому из пп. 19-23, где антитела включают аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 52 и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 51.
25. Способ по любому из пп. 19-23, где антитела включают аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 52 и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 51, где N-концевой глутамин в тяжелой цепи преобразован в пироглутамат и/или C-концевой лизин в тяжелой цепи удален.
26. Способ по п. 25, где антитела с отсутствием определяемых уровней сульфатированного тирозина представляют собой разновидности гликозилированных антител, имеющие молекулярные массы около 148590 Да, 148752 Да и/или 148914 Да.
Комментарии