Способ получения индуцированных нервных стволовых клеток, перепрограммированных из клеток, не являющихся нервными, с использованием hmga2 - RU2015144631A
Код документа: RU2015144631A
Формула
1. Набор для индукции перепрограммирования клетки, не являющейся нервной, в нервную стволовую клетку (NSC), содержащий:
(а) белок SRY (определяющий пол участок Y-хромосомы)-box 2 (SOX2) или молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую белок SOX2; и
(б) белок группы белков с высокой подвижностью с мотивом АТ-крюка 2 (HMGA2) или молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую белок HMGA2.
2. Набор по п. 1, где молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая белок SOX2, и молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая белок HMGA2, каждая независимо включена в экспрессионный вектор.
3. Набор по п. 1, где молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая белок HMGA2, является модулятором хроматина.
4. Способ получения индуцированной нервной стволовой клетки, перепрограммированной из клетки, не являющейся нервной, или нервной клетки, дифференцированной из этой клетки, включающий:
(а) доставку в клетку, не являющуюся нервной, белка SOX2 или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок SOX2; и белка HMGA2 или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок HMGA2, либо увеличение экспрессии белка SOX2 и белка HMGA2 в клетке, не являющейся нервной; и
(б) культивирование клеток на стадии (а).
5. Способ по п. 4, дополнительно включающий:
(в) выделение колоний клеток, подобных нервным стволовым клеткам, из культуры, полученной на стадии (б).
6. Способ по п. 4, где стадия (б) включает культивирование на среде для дифференцировки нервной клетки и характеризуется тем, что индуцированная нервная стволовая клетка образуется из клетки, не являющейся нервной, а нервная клетка образуется из индуцированной нервной стволовой клетки.
7. Способ по п. 4, где стадию (а) выполняют путем
добавления в культуральную среду для клетки, не являющейся нервной, белка SOX2 или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок SOX2; и белка HMGA2 или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок HMGA2;
добавления непосредственно в клетку, не являющуюся нервной, белка SOX2 или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок SOX2; и белка HMGA2 или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок HMGA2; или
инфицирования клетки, не являющейся нервной, с помощью вирусов, полученных из пакующей клетки, трансфицированной вирусным вектором, в который встроена молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая белок SOX2, и молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая белок HMGA2.
8. Способ по п. 4, где увеличение экспрессии белка SOX2 или белка HMGA2 в клетке, не являющейся нервной, характеризуется тем, что регуляторный фактор экспрессии SOX2 или HMGA2 вводят в клетку, не являющуюся нервной, соответственно.
9. Способ по п. 8, где регуляторный фактор экспрессии для HMGA2 представляет собой ингибитор кластера микроРНК let-7 или ингибитор PDE4D (ингибитор фосфодиэстеразы 4D).
10. Способ по п. 8, где регуляторный фактор экспрессии для SOX2 представляет собой ингибитор PDE4D.
11. Способ по п. 4, где клетка имеет происхождение от человека.
12. Способ по п. 4, где клетка, не являющаяся нервной, представляет собой соматическую клетку или взрослую стволовую клетку.
13. Способ по п. 12, где соматическая клетка представляет собой клетку крови.
14. Способ по п. 12, где взрослая стволовая клетка представляет собой мезенхимную стволовую клетку.
15. Индуцированная нервная стволовая клетка, полученная любым способом по пп. 4-14, или нервная клетка, дифференцированная из индуцированной нервной стволовой клетки.
16. Продукт для клеточной терапии для регенерации нервной клетки, содержащий в качестве активного ингредиента индуцированную нервную стволовую клетку или нервную клетку, дифференцированную из индуцированной нервной стволовой клетки, по п. 15.
17. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения заболеваний, обусловленных повреждением нервных клеток, содержащая в качестве активных ингредиентов
белок SOX2 или молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую белок SOX2, и
белок HMGA2 или молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую белок HMGA2.
18. Фармацевтическая композиция по п. 17, где заболевания, обусловленные повреждением нервных клеток, выбраны из группы, состоящей из болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, болезни Пика, болезни Гентингтона, бокового амиотрофического склероза, ишемической энцефалопатии, демиелинизирующего заболевания, рассеянного склероза, эпилепсии, дегенеративного неврологического заболевания и повреждения спинного мозга.
19. Способ скрининга стимулятора регенерации или ингибитора регенерации для нервной стволовой клетки или нервной клетки, включающий:
1) получение изолированной клетки, не являющейся нервной;
2) индуцирование образования индуцированной нервной стволовой клетки путем доставки в клетку, не являющуюся нервной, белка SOX2 или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок SOX2; и белка HMGA2 или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок HMGA2, либо увеличение экспрессии белка SOX2 и белка HMGA2 в клетке, не являющейся нервной;
3) возможно дифференцировку индуцированной нервной стволовой клетки, образованной на стадии 2), в нервную клетку; и
4) обработку веществом-кандидатом после стадии 1 или стадии 2 и определение, образуется ли индуцированная нервная стволовая клетка или нервная клетка, или уровня их образования в зависимости от обработки веществом-кандидатом.
20. Способ по п. 19, дополнительно включающий стадию определения вещества-кандидата в качестве стимулятора регенерации для нервной стволовой клетки или нервной клетки, если уровень образования индуцированной нервной стволовой клетки или нервной клетки увеличивается на стадии 4.
21. Способ по п. 19 или 20, где стимулятор регенерации, индивидуально подобранный для пациента, или ингибитор регенерации, индивидуально подобранный для пациента, для нервной стволовой клетки или
нервной клетки подвергают скринингу с использованием клетки, не являющейся нервной, выделенной от пациента.
22. Способ скрининга индивидуально подобранного для пациента терапевтического средства для нервной клетки, включающий:
1) получение изолированной клетки, не являющейся нервной;
2) индуцирование образования индуцированной нервной стволовой клетки путем доставки в клетку, не являющуюся нервной, белка SOX2 или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок SOX2; и белка HMGA2 или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок HMGA2, либо увеличение экспрессии белка SOX2 и белка HMGA2 в клетке, не являющейся нервной;
3) дифференцировку индуцированной нервной стволовой клетки, образованной на стадии 2), в нервную клетку; и
4) обработку клетки, не являющейся нервной, образованной на стадии 3, веществом-кандидатом и определение, является ли вещество-кандидат терапевтическим средством для нервной клетки, индивидуально подобранным для субъекта, от которого имеет происхождение клетка, не являющаяся нервной.
23. Композиция для стимуляции перепрограммирования клетки, не являющейся нервной, в нервную стволовую клетку (NSC), содержащую белок HMGA2 или нуклеиновую кислоту, кодирующую белок HMGA2, в качестве активного ингредиента.
24. Композиция для пролиферации клеток, содержащая белок HMGA2 или нуклеиновую кислоту, кодирующую белок HMGA2, в качестве активного ингредиента.
25. Композиция для ингибирования старения клетки, содержащая белок HMGA2 или нуклеиновую кислоту, кодирующую белок HMGA2, в качестве активного ингредиента.
26. Композиция по п. 24 или 25, где клетка представляет собой стромальную клетку, имеющую происхождение из крови пуповины.
27. Способ профилактики или лечения заболеваний, обусловленных повреждением нервных клеток, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, индуцированной нервной стволовой клетки или нервнойклетки, дифференцированной из индуцированной нервной стволовой клетки, по п. 15.
28. Способ профилактики или лечения заболеваний, обусловленных повреждением нервных клеток, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, белка SOX2 или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок SOX2; и белка HMGA2 или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей белок HMGA2.
