Быстрый способ детекции патогенов - RU2015135359A
Код документа: RU2015135359A
Формула
1. Способ детекции патогена в образце, включающий в себя стадии:
a) инкубации образца в жидкой среде предобогащения, содержащей питательный компонент, обеспечивающий медленный рост, средство, подавляющее рост, и поверхностно-активное вещество с бактериостатическим или бактерицидным действием, и, необязательно, средство, усиливающее рост, где инкубацию проводят при температуре примерно от 35 до 39°С в течение примерно от 6 до 24 ч;
b) инкубации аликвоты среды предобогащения со стадии (а) в отдельной жидкой среде обогащения, которая содержит питательный компонент, обеспечивающий быстрый рост, и цитрат железа аммония, где инкубацию проводят при температуре примерно от 15 до 50°С в течение примерно от 2 до 24 ч;
c) необязательно, очистка жидкой среды обогащения для повышения концентрации Salmonella и/или уменьшения примесей и
d) детекции присутствия или отсутствия патогена путем анализа аликвоты среды обогащения со стадии (b) и/или, если осуществляется, аликвоты очищенной среды обогащения со стадии (с).
2. Способ по п. 1, где питательный компонент, обеспечивающий медленный рост, представляет собой пептон.
3. Способ по п. 2, где пептон представляет собой пептон животного происхождения или пептон растительного происхождения.
4. Способ по любому из пп. 1-3, где концентрация поверхностно-активного вещества составляет примерно от 0,001 до 10,0% (об/об).
5. Способ по п. 4, где поверхностно-активное вещество представляет собой ионное поверхностно-активное вещество, цвиттерионное (амфотерное) поверхностно-активное вещество или неионное поверхностно-активное вещество.
6. Способ по любому из пп. 1-3, где концентрация средства, подавляющего рост, составляет примерно от 0,001 до 10,0% (об/об).
7. Способ по п. 6, где средство, подавляющее рост, представляет собой триарилметановый краситель.
8. Способ по любому из пп. 1-3, где среда предобогащения дополнительно содержит средство, стимулирующее рост.
9. Способ по п. 8, где средство, стимулирующее рост, представляет собой сидерофор.
10. Способ по любому из пп. 1-3, где объем аликвоты среды предобогащения на стадии (b) составляет примерно от 1/50 до 1/500 объема среды обогащения, используемой на стадии (b).
11. Способ по любому из пп. 1-3, где питательный компонент, обеспечивающий быстрый рост, представляет собой пептон.
12. Способ по п. 11, где пептон представляет собой пептон животного происхождения или пептон растительного происхождения.
13. Способ по любому из пп. 1-3, где концентрация питательного компонента, обеспечивающего быстрый рост, составляет примерно от 1,0 до 4,0% (об/об).
14. Способ по любому из пп. 1-3, где концентрация цитрата аммония железа составляет примерно от 0,1 до 5,0 мг/мл.
15. Способ по любому из пп. 1-3, где среда обогащения дополнительно содержит средство, стимулирующее рост.
16. Способ по п. 15, где средство, стимулирующее рост, представляет собой сидерофор.
17. Способ по любому из пп. 1-3, где стадию детекции (с) проводят с использованием сенсорного способа детекции, способа детекции на основе анализа нуклеиновых кислот, способа детекции на основе анализа белков, способа детекции на основе анализа активности или способа детекции на основе анализа роста.
18. Способ по п. 17, где сенсорный способ детекции представляет собой способ электрохимической детекции.
19. Способ по п. 18, где способ электрохимической детекции включает в себя применение ферментного биосенсора, ДНК-сенсора или иммуносенсора.
20. Способ по п. 17, где способ детекции на основе анализа нуклеиновых кислот включает в себя способ детекции на основе анализа ДНК, или способ детекции на основе анализа РНК.
21. Способ по п. 20, где способ детекции на основе анализа ДНК включает в себя саузерн-блоттинг, ПЦР, анализ последовательности, иммуноанализы или анализы гибридизации с использованием метода FRET, метода поляризации флуоресценции, и других флуоресцентных, хемилюминесцентных или биолюминесцентных методов детекции.
22. Способ по п. 21, где метод ПЦР включает в себя анализ ПЦР в режиме реального времени.
23. Способ по п. 17, где способ детекции на основе анализа белков включает в себя анализ с использованием геля, иммуноанализ или анализ белок-белкового взаимодействия.
24. Способ по п. 17, где способ детекции на основе анализа активности включает в себя анализ ферментативной активности или анализ функционирования белка.
25. Способ по п. 17, где способ детекции на основе анализа роста включает в себя культивирование с измерением образования колоний или измерение плотности клеток с помощью спектрофотометрических методов.
26. Способ по любому из пп. 1-3, где патоген представляет собой прион, вирус, бактерию, грибок, простейшее, гельминт или паразит.
27. Набор для анализа патогена, содержащий среду предобогащения и среду обогащения,
где среда предобогащения содержит питательный компонент, обеспечивающий медленный рост, средство, подавляющее рост, и поверхностно-активное вещество с бактериостатическим или бактерицидным действием, и,
где среда обогащения содержит питательный компонент, обеспечивающий быстрый рост, и цитрат железа аммония.
28. Набор для анализа патогена по п. 27, дополнительно содержащий раствор для детекции.
29. Набор для анализа патогена по п. 27, дополнительно содержащий электрохимический биосенсор.
30. Набор для анализа патогена по любому из пп. 27-29, дополнительно содержащий иммуномагнитные частицы, способные связывать представляющий интерес патоген.
31. Набор для анализа патогена по п. 30, дополнительно содержащий источник магнитного поля, предназначенный для улавливания иммуночастиц.
32. Набор для анализа патогена по любому из пп. 27-29, дополнительно содержащий прибор, с помощью которого можно измерять и/или анализировать потенциометрические, вольтаметрические, амперометрические, и/или импедиметрические/кондуктометрические параметры.
