де RI, R
R,
RS, К0
водород, фтор, хлор, бром или нитрогруппа; как R.f или дополнительно
аминогруппа; водород, фтор, хлор, бром;
водород, хлор, бром, С ,-С 5-алкил или мето- ксигруппа;
t fo водород, галоген,
С -С j-алкил, нитрогруппа , гидроксильная,
карбоксильная или ме- токсильная группа; водород, хлор, бром,
С 1-е 5-алкил или мето- ксигруппа; водород, иод, хлор,
бром, .-алкил, нитрогруппа; М - лротон, ион лития,
натрия, кальция, тет- раметиламмония, три- бензиламмония или
бензилдизтиламмония при следующем соотношении компонентов,
мас.%:
Соединение формулы (1) 0,001-5 Водный буферный раствор
рН 3,5-8,5 До 1 мл
R,
R-,. R
17
11
Предлагаемое средство получают
путем смешивания активного ве1чества с водным буферным раствором в указанном соотношении.
„ ..С Н130/-0.
F)
Л
OR 13
(III)
0
5
0
5
0
5
группы
в химии
обычно
углегде X - галоген; R - защитные
применяемые водородов,
с последующим удалением защитных
групп известными приемами.
Пример 1. 1000 мкл водного
оксиэтилпиперазинэтансульфокислого буфера с рН 7, содержащего 0,001 или
0,1 мае.% указанного в табл.2 активного вещества, смешивают с 35 мкл
водного раствора / -В-галактозидазь. из E.coli (0,08 ед/мл) и при
фотометрическим путем определяют при 578 нм активность средства за счет
измерения изменения миллиэкстинкции в минуту ( 1 мэкс/мин) . При этом ход
процесса характеризуется окраской в красный или красно-фиолетовый (согласно изобретению) или в желтый
(согласно прототипу) цвет, рая становится все интенсивнее. В сравнительном опыте используют средство
, содержащее в качестве активного вещества соответствуюр(ий п-нитрофе-
нил- (b-D-галактозид, фотометрическое изменение осуществляют при А05 нм.
Результаты опытов сведены в табл.2.
Сравнение данных по мзкс/мин свидетельствует
о том, что предлагаемое средство обеспечивает более высокую степень определения /ь-В-гала тозидазы, чем известное средство,
П р и м е р 2, Повторяют пример 1 с той разницей, что используют 1000 мкл водного раствора натриево-
фосфатного буфера с рН 8,5, содержащего 1 или 5 мас.% указанного в табл.3 активного вещества.
Результаты опытов сведены в табл
Сравнение данных табл.3 свидетельствует
о том, что и при более высоком содержании в средстве активного вещества предлагаемое средство
обеспечивает более высокую степень определения /ъ-В-галактозидазы, чем известное средство.
II р и м е р 3. Повторяют пример 1 с той разницей, что используют
водный -буферный раствор с рН 3,5 ил 4,О,содержащий 0,5 мас,% указанного
в табл.4 активного вещества. При этом в случае рН 3,5 используют /ь-D-галактозидазу из бобов (опыт I
а в случае рН 4,0 - из AspergiHus niger (опыт II).
Результаты опытов сведены в
табл.4.
Сравнение данных табл.4 свидетельствует о том, что и при исполь-
зовании средства с буферным раствором с кислой величиной рН предлагаемое
средство обеспечивает более высокую степень определения энзима, чем известное средство.
Формула изобретени
Средство для определения )5- -D-
галактозидазы, содержащее активное вещество и водный буферный раствор, отличающееся тем, что,
с целью повьшения чувствительности средства, в качестве активного вещества используют соединение общей
снгон
де R. и К.
R.
Rj и Kg
R, и к
10
R2
-водород, фтор, хлор,
бром или нитрогруппа}
-как R или дополнительно
аминогруппа;
-водород, фтор, хлор, бром;
-водород, хлор, бром, -алкил или метоксигруппа;
-водород, галоген.
К Q и К
С -С5-алкил, нитрогруппа
, гидроксиль- ная, карбоксильная или метоксильная
группа;
водород, хлор, бром, С ,-С 5-алкил или метоксигруппа;
R-, и 1Ц, - водород, иод, хлор, бром, С -Сд-алкил, нитрогруппа;
М - протон, ион лдития, натрия, кальция, тетраметиламмония
трибензиламмония или бензилдиэтиламмония,
ри следующем соотношении компоненте
он, мас.%:
Соединение указанной формулы0,001-5 Водный буферный
раствор рН 3,5-8,5 До 1 мл.
т а в л н ц а 1
ЯМР eOOjJ - it): 3,1-3,9 (м.бН), 4,1-5,3 (к,4Н), 4,95 (n,J 7 ГЦ, IH), 6,2-6,6
(м,1Н)6,8-7,6 (м, 8Н), 7,8-8,0 (м, 1И).
Таблица2
& МЭКС/МИН при 0,001/0,1 мас,%
2
65/66 68/70 66/68
68/70 70/72 71/72 52/54
74/75 76/79 85/88
Пр одолже ние та бл.2
1
XI
XII
XIH
XIY
XY
XYI
XYII
XYIII
XIX
XX
XXI
XXII
80/83
88/90
105/106
98/101
102/105
123/124
118/119
102/104
115/116
98/100
96/99
120/121
9.1393: 22
Продолжение табл.2
