Гены протеаз табака - RU2017105148A
Код документа: RU2017105148A
Формула
1. Мутантная, не встречающаяся в природе или трансгенная клетка растения табака, содержащая:
(i) полинуклеотид, содержащий последовательность, состоящий из последовательности или по существу состоящий из последовательности, выполненной с возможностью кодирования функциональной протеазы и характеризующейся по меньшей мере 96% идентичностью последовательности с любой из SEQ ID NO:1 - SEQ ID No: 80;
(ii) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, указанным в (i);
(iii) полипептид, содержащий последовательность, состоящий из последовательности или по существу состоящий из последовательности, выполненной с возможностью кодирования протеазы и характеризующейся по меньшей мере 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO:81 - SEQ ID No: 160; или
(iv) структуру, вектор или вектор экспрессии, содержащие выделенный полинуклеотид, указанный в (i),
и где экспрессия или активность указанной протеазы модулированы по сравнению с контрольной клеткой растения табака, в которой экспрессия или активность указанной протеазы не были изменены.
2. Клетка растения табака по п. 1, где экспрессия или активность указанной протеазы подверглись повышающей регуляции по сравнению с контрольной клеткой растения табака.
3. Клетка растения табака по п. 1, где экспрессия или активность указанной протеазы подверглись понижающей регуляции по сравнению с контрольной клеткой растения табака.
4. Клетка растения табака по любому из предыдущих пунктов, где модулированы экспрессия или активность протеазы, выбранной из:
по меньшей мере одной из SEQ ID NO: 1-16; или
по меньшей мере одной из SEQ ID NO: 30-41; или
по меньшей мере одной из SEQ ID NO: 17-22; или
по меньшей мере одной из SEQ ID NO: 42-44; или
по меньшей мере одной из SEQ ID NO: 45-61; или
по меньшей мере одной из SEQ ID NO: 62-80; или
по меньшей мере одной из SEQ ID NO: 23-29.
5. Клетка растения табака по п. 4, где экспрессия или активность протеазы, выбранной из по меньшей мере одной из последовательностей под SEQ ID NO: 30-41, модулированы в табаке восточного типа.
6. Клетка растения табака по п. 4, где экспрессия или активность протеазы, выбранной из SEQ ID NO: 17-22, модулированы в табаке типа Вирджиния.
7. Клетка растения табака по п. 4, где экспрессия или активность протеазы, выбранной из по меньшей мере одной из SEQ ID NO: 42-44, модулированы в табаке типа Берлей.
8. Клетка растения табака по п. 4, где экспрессия или активность протеазы, выбранной из по меньшей мере одной из SEQ ID NO: 45-61, модулированы в табаке типа Вирджиния или восточного типа.
9. Клетка растения табака по п. 4, где экспрессия или активность протеазы, выбранной из по меньшей мере одной из SEQ ID NO: 62-80, модулированы в табаке типа Берлей или восточного типа.
10. Клетка растения табака по п. 4, где экспрессия или активность протеазы, выбранной из по меньшей мере одной из SEQ ID NO: 23-29, модулированы в табаке типа Берлей или Вирджиния.
11. Клетка растения табака по любому из предыдущих пунктов, где указанная мутация(и) является мутацией в гетерозиготном или гомозиготном состоянии.
12. Клетка растения табака по любому из предыдущих пунктов, где экспрессия одной или нескольких протеаз повышена на приблизительно 10 - приблизительно 1000%.
13. Клетка растения табака по п. 12, где экспрессия одной или нескольких протеаз повышена по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 100%, по меньшей мере на 200%, по меньшей мере на 500%, по меньшей мере на 750% или до 1000%.
14. Мутантное, не встречающееся в природе или трансгенное растение, или его компонент, или часть, содержащие клетку растения по любому из предыдущих пунктов.
15. Растительный материал, включающий биомассу, семя, стебель, цветки или листья от растения по п. 14.
16. Табачный продукт, содержащий клетку растения по любому из пп. 1-13, по меньшей мере часть растения по п. 14 или растительный материал по п. 15.
17. Способ получения растения табака с модулированными уровнями протеазы, при этом указанный способ предусматривает стадии:
(а) обеспечения растения, содержащего (i) полинуклеотид, содержащий последовательность, состоящий из последовательности или по существу состоящий из последовательности, выполненной с возможностью кодирования функциональной протеазы и характеризующейся по меньшей мере 96% идентичностью последовательности по меньшей мере с одной из SEQ ID NO:1 - SEQ ID No: 80;
(b) введения одной или нескольких мутаций в полинуклеотид растения табака для создания мутантного растения табака; и
(c) сушки материала растения табака.
18. Способ по п. 17, где растение табака на стадии (b) представляет собой мутантное растение табака, предпочтительно, где указанное мутантное растение табака содержит одну или несколько мутаций в одной или нескольких дополнительных последовательностях, кодирующих функциональную протеазу и характеризующихся по меньшей мере 96% идентичностью последовательности по меньшей мере с одной из SEQ ID NO:1 - SEQ ID No: 80.
19. Способ по п. 17 или п. 18, где геном клетки растения табака модифицируют при помощи технологии редактирования генома или при помощи методик генной инженерии, выбранных из технологии CRISPR/Cas, мутагенеза, опосредованного нуклеазой с мотивом «цинкового пальца», химического или радиационного мутагенеза, гомологической рекомбинации, олигонуклеотид-направленного мутагенеза и мутагенеза, опосредованного мегануклеазой.
20. Способ получения высушенного растительного материала, предпочтительно сушеных листьев или цветков с измененным вкусовым профилем по сравнению с контрольным растительным материалом, включающий стадии:
(а) обеспечения растения по п. 14 или растительного материала по п. 15;
(b) необязательно сбора от него растительного материала и
(с) сушки растительного материала в течение некоторого периода времени так, что уровни по меньшей мере одной протеазы модулируют по сравнению с контрольным сушеным растительным материалом.
21. Применение
(i) полинуклеотида, содержащего последовательность, состоящего из последовательности или по существу состоящего из последовательности, выполненной с возможностью кодирования функциональной протеазы и характеризующейся по меньшей мере 96% идентичностью последовательности с любой из SEQ ID NO:1 - SEQ ID No: 80;
(ii) полипептида, кодируемого полинуклеотидом, указанным в (i);
(iii) полипептида, содержащего последовательность, состоящего из последовательности или по существу состоящего из последовательности, выполненной с возможностью кодирования протеазы и характеризующейся по меньшей мере 96% идентичностью последовательности с SEQ ID NO:81 - SEQ ID No: 160; или
(iv) конструкции, вектора или вектора экспрессии, содержащих выделенный полинуклеотид, указанный в (i),
для модуляции экспрессии или активности одной или нескольких протеаз в табаке во время процедуры сушки табака.
22. Применение по п. 21, где процедура сушки выбрана из группы, включающей воздушную сушку, огневую сушку, дымовую сушку и трубоогневую сушку.
