Способ очистки сиалилированных олигосахаридов - RU2020108730A

1. Способ очистки сиалилированных олигосахаридов, которые были получены путем микробиологической ферментации или биокатализа in vitro, включающий следующие стадии:

1) отделение биомассы от ферментационного бульона;

2) удаление катионов из ферментационного бульона или реакционной смеси;

3) удаление анионных примесей из ферментационного бульона или реакционной смеси; и

4) удаление соединений, имеющих молекулярную массу ниже, чем молекулярная масса подлежащего очистке сиалилированного олигосахарида, из ферментационного бульона или реакционной смеси.

2. Способ по п. 1, дополнительно включающий одну или более стадий, выбранных из группы, состоящей из следующего:

5) повышение концентрации сиалилированного олигосахарида;

6) удаление нежелательных олигосахаридов;

7) удаление красителей;

8) удаление эндотоксинов;

9) стерилизация; и

10) распылительная сушка или кристаллизация сиалилированного олигосахарида.

3. Способ по п. 1 или 2, где сиалилированный олигосахарид представляет собой сиалилированный олигосахарид грудного молока, предпочтительно выбранный из группы, состоящей из 3'-SL, 6'-SL, LST-a, LST-b, LST-c, 3-F-SL, DS-LNT и F-LST-b.

4. Способ по любому из пп. 1-3, где удаление биомассы из ферментационного бульона осуществляют путем подвергания ферментационного бульона ультрафильтрации, предпочтительно ультрафильтрационному удалению биомассы и соединений, имеющих молекулярную массу, большую или равную 500 кДа, из ферментационного бульона, более предпочтительно ультрафильтрационному удалению биомассы и соединений, имеющих молекулярную массу, большую или равную 150 кДа, из ферментационного бульона и наиболее предпочтительно ультрафильтрационному удалению биомассы и соединений, имеющих молекулярную массу, большую или равную 100 кДа, из ферментационного бульона.

5. Способ по любому из пп. 1-4, где удаление катионов из ферментационного бульона осуществляют посредством катионообменной хроматографии.

6. Способ по любому из пп. 1-5, где удаление анионных примесей из ферментационного бульона осуществляют посредством анионообменной хроматографии.

7. Способ по любому из пп. 1-6, где удаление соединений, имеющих молекулярную массу ниже, чем молекулярная масса подлежащего очистке сиалилированного олигосахарида, осуществляют посредством фильтрации в тангенциальном потоке.

8. Способ по любому из пп. 1-7, где концентрацию подлежащего очистке сиалилированного олигосахарида повышают посредством нанофильтрации или выпаривания растворителя.

9. Способ по любому из пп. 1-8, где удаление красителей осуществляют путем обработки ферментационного бульона/раствора, содержащего требуемый сиалилированный олигосахарид, активированным углем.

10. Способ по любому из пп. 1-9, где удаление эндотоксинов осуществляют путем фильтрования раствора, содержащего требуемый олигосахарид, через фильтр с отсечением 6 кДа или фильтр с отсечением 3 кДа.

11. Способ по любому из пп. 1-10, где стерилизацию раствора осуществляют путем фильтрования раствора через фильтр с диаметром пор 0,2 мкм.

12. Способ по любому из пп. 1-11, дополнительно включающий стадию хроматографии с псевдодвижущимся слоем (SMB).

13. Способ по любому из пп. 1-12, дополнительно включающий стадию электродиализа.

14. Препарат сиалилированного олигосахарида, где указанный сиалилированный олигосахарид был очищен способом по любому из пп. 1-13.

15. Препарат по п. 14, где сиалилированный олигосахарид присутствует в указанном препарате с чистотой, большей или равной 80 мас.%.

16. Препарат по п. 14 или 15, где указанный препарат представляет собой жидкость или порошок, предпочтительно порошок, при этом частицы представляют собой аморфные или кристаллические частицы.

17. Применение препарата по любому из пп. 14-16 для приготовления питательной композиции, предпочтительно детской смеси.

18. Питательная композиция, содержащая по меньшей мере один сиалилированный олигосахарид, при этом указанный по меньшей мере один сиалилированный олигосахарид получен путем микробиологической ферментации или биокатализа, и при этом указанная питательная композиция представляет собой лекарственный состав, пищевую добавку, молочный напиток или детскую смесь.

19. Питательная композиция, содержащая по меньшей мере 5 олигосахаридов грудного молока (НМО), при этом указанные по меньшей мере 5 НМО выбраны из группы, состоящей из 2'-фукозиллактозы, 3-фукозиллактозы, лакто-N-тетраозы, лакто-N-неотетраозы, лакто-N-фукопентаозы I, 3'-сиалиллактозы и 6'-сиалиллактозы.

20. Питательная композиция по п. 18 или 19, где указанная питательная композиция содержит по меньшей мере один сиалилированный НМО и по меньшей мере один нейтральный НМО, и пробиотический микроорганизм.

21. Высушенный распылением, не содержащий генетически модифицированных организмов (GMO) порошок, состоящий по существу из сиалилированного олигосахарида с чистотой более 80% по сухой массе и содержащий воду в количестве менее 10 мас.%.

22. Порошок по п. 21, где сиалилированный олигосахарид выбран из группы, состоящей из 3'-сиалиллактозы, 6'-сиалиллактозы и смеси 3'-сиалиллактозы и 6'-сиалиллактозы.

23. Порошок по п. 22, где указанный порошок по существу состоит из смеси 3'-сиалиллактозы, 6'-сиалиллактозы и одного или более чем одного нейтрального НМО, при этом указанный один или более чем один нейтральный НМО выбран из группы, состоящей из 2'-фукозиллактозы, 3-фукозиллактозы, лакто-N-тетраозы, лакто-N-неотетраозы, лакто-N-фукопентаозы I.