Ферменты лактазы с улучшенными свойствами - RU2019134240A

1. Пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактоз ид азы, который имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, или его обладающие ферментативной активностью фрагменты, или аминокислотная последовательность любого из них, имеющая не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 аминокислотных замен, добавлений или делеций.

2. Димерный пептид, проявляющий ферментативную активность бета-галактозидазы, который состоит из двух пептидов, имеющих аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2 и 3; 5 и 6; 20 и 21; 23 и 24; 26 и 27; или 28 и 29; или его обладающие ферментативной активностью фрагменты, или аминокислотная последовательность любого из них, имеющая не более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 или 22 аминокислотных замен, добавлений или делеций.

3. Способ снижения содержания лактозы в композиции, содержащей лактозу, такой как молочные продукты, включающий стадию приведения указанной композиции в контакт с пептидом или димерным пептидом, проявляющим ферментативную активность бета-галактозидазы, где пептид имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1-33; или где димерный пептид состоит из двух пептидов, имеющих аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2 и 3, 5 и 6, 20 и 21, 23 и 24, 26 и 27, или 28 и 29; или их обладающими ферментативной активностью фрагментами, или любой последовательностью с по меньшей мере 80%-ной идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей или обладающих ферментативной активностью фрагментов; или с клеткой-хозяином, экспрессирующей любой из указанных пептидов или димерных пептидов, при рН в диапазоне 3-10 и при температуре в диапазоне 0°С-140°С.

4. Применение пептида или димерного пептида, проявляющего ферментативную активность бета-галактозидазы, где пептид имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1-33, или где димерный пептид состоит из двух пептидов, имеющих аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2 и 3, 5 и 6, 20 и 21, 23 и 24, 26 и 27, или 28 и 29; или последовательности с по меньшей мере 80%-ной идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей; или клетки-хозяина, экспрессирующей любой из указанных пептида или димерного пептида, для получения молочного продукта с пониженным содержанием лактозы.

5. Способ получения молочного продукта, включающий стадии:

а) обеспечения содержащего лактозу субстрата на молочной основе;

б) добавления к указанному содержащему лактозу субстрату на молочной основе пептида или димерного пептида, проявляющего активность бета-галактозидазы, где пептид имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1-33; или где димерный пептид состоит из двух пептидов, имеющих аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2 и 3, 5 и 6, 20 и 21, 23 и 24, 26 и 27, или 28 и 29; или последовательность с по меньшей мере 80%-ной идентичностью последовательности любой из указанных последовательностей; и

в) обработки указанного субстрата на молочной основе указанным пептидом или димерным пептидом, проявляющим активность бета-галактозидазы.

6. Способ по п. 5, где стадию (в) осуществляют при рН в диапазоне 3-10, например, в диапазоне 3-9, например, в диапазоне 3-8, например, в диапазоне 3-7, например, в диапазоне 3-6, например, в диапазоне 3-5, например, в диапазоне 3-4, например, в диапазоне 4-10, например, в диапазоне 4-9, например, в диапазоне 4-8, например, в диапазоне 4-7, например, в диапазоне 4-6, например, в диапазоне 4-5, например, в диапазоне 5-10, например, в диапазоне 5-9, например, в диапазоне 5-8, например, в диапазоне 5-7, например, в диапазоне 5-6, например, в диапазоне 6-10, например, в диапазоне 6-9, например, в диапазоне 6-8, например, в диапазоне 6-7.

7. Способ по любому из пп. 5-6, где стадию (в) или часть стадии (в) осуществляют при температуре не более чем примерно 25°С, например, не более чем примерно 20°С, например, не более чем примерно 18°С, например, не более чем примерно 16°С, например, не более чем примерно 14°С, например, не более чем примерно 12°С, например, не более чем примерно 10°С, например, не более чем примерно 8°С, например, не более чем примерно 7°С, например, не более чем примерно 6°С, например, не более чем примерно 5°С, например, не более чем примерно 4°С, например, не более чем примерно 3°С, например, не более чем примерно 2°С.

8. Способ по любому из пп. 5-7, где стадию (в) или часть стадии (в) осуществляют при температуре по меньшей мере примерно 25°С, например, по меньшей мере примерно 30°С, например, по меньшей мере примерно 35°С, например, по меньшей мере примерно 40°С, например, по меньшей мере примерно 45°С, например, по меньшей мере примерно 50°С, например, по меньшей мере примерно 55°С, например, по меньшей мере примерно 60°С, например, по меньшей мере примерно 65°С, например, по меньшей мере примерно 70°С, например, по меньшей мере примерно 75°С, например, по меньшей мере примерно 80°С, например, по меньшей мере примерно 85°С, например, по меньшей мере примерно 90°С, например, по меньшей мере примерно 95°С, например, по меньшей мере примерно 100°С, например, по меньшей мере примерно 110°С, например, по меньшей мере примерно 120°С, например, по меньшей мере примерно 130°С, например, по меньшей мере примерно 135°С, например, по меньшей мере примерно 140°С.

9. Способ по любому из пп. 5-8, где ингибирование галактозой указанного пептида или димерного пептида составляет менее 60%, например, менее 55%, например, менее 50%, например, менее чем примерно 45%, например, менее чем примерно 40%.

10. Способ по любому из пп. 5-9, где указанный молочный продукт представляет собой кисломолочный продукт, и указанную стадию (б) проводят во время или до ферментации.

11. Способ по п. 10, который не требует добавления дополнительного фермента после ферментации.

12. Способ по любому из пп. 5-10, где указанный молочный продукт представляет собой кисломолочный продукт, и указанную стадию (б) проводят сразу после ферментации.

13. Способ по любому из пп. 5-10, где указанный молочный продукт представляет собой свежее молоко, и указанную стадию (б) проводят до, в сочетании или сразу после стадии пастеризации.

14. Способ по любому из пп. 5-10, где указанный молочный продукт представляет собой ультрапастеризованное (UHT) молоко, и указанную стадию (б) проводят до, в сочетании или сразу после стадии ультрапастеризации.

15. Способ по любому из пп. 5-14, где стадию (в) начинают при температуре от 40°С до 100°С, например, при температуре от 50°С до 100°С, например, при температуре от 60°С до 100°С, например, при температуре от 70°С до 100°С, например, при температуре от 80°С до 100°С, например, при температуре от 40°С до 90°С, например, при температуре от 40°С до 80°С, например, при температуре от 40°С до 70°С, например, при температуре от 40°С до 60°С, например, при температуре от 40°С до 50°С.