Новые термостабильные фитазы с высокой каталитической эффективностью - RU2020109763A
Код документа: RU2020109763A
Формула
1. Фитаза, выбранная из
а) полипептида, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 2,
b) варианта полипептида, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 2, который
(i) сохраняет следующие аминокислотные положения E26, W84, V159, Y181, N207, W233, D277 и Y349 последовательности SEQ ID NO: 2 и предпочтительно включает одну или более дополнительных мутаций в положениях 57, 95, 129, 161, 179, 198, 201, 249, 275, 309,
(ii) содержит одну или более замен в положениях, отличных от E26, W84, V159, Y181, N207, W233, D277 и Y349 последовательности SEQ ID NO. 2,
c) варианта полипептида, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 2, который
(i) сохраняет следующие аминокислотные положения E26, W84, V159, Y181, N207, W233, D277 и Y349 последовательности SEQ ID NO: 2, а также
(ii) демонстрирует идентичность последовательности по меньшей мере 90% с SEQ ID NO. 2,
d) варианта белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO. 2, который
(i) сохраняет следующие аминокислотные положения E26, W84, V159, Y181, N207, W233, D277 и Y349 последовательности SEQ ID NO: 2, а также
(ii) содержит одну или более замен, добавлений или делеций аминокислот по сравнению с SEQ ID NO. 2,
e) белка, демонстрирующего одну или более замен, добавлений или делеций по сравнению с SEQ ID NO. 2.
2. Фитаза по п. 1, проявляющая термостабильность 50% при 75°С.
3. Фитаза по п. 1 или 2, проявляющая термостабильность 70% при 75°С.
4. Фитаза по любому из пп. 1-3, проявляющая термостабильность 50% при 95°С.
5. Фитаза по любому из пп. 1-4, выбранная из полипептида, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID NO.3, SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 5, SEQ ID NO.6, SEQ ID NO.7, SEQ ID NO.8, SEQ ID NO.9, SEQ ID NO.10, или SEQ ID NO.11.
6. Фитаза по п. 1b), в которой одна или более дополнительных мутаций выбраны из 57Y, 95P, 129G, 161R, 179R/S/N, 198P, 201K, 275Y, 249E, 275Y и 309S в SEQ ID NO. 2.
7. Фитаза по п. 6, в которой одна или более дополнительных мутаций находятся в положениях 47, 65 и/или 247, предпочтительно 47F, 65P и/или 247Y.
8. Фитаза по любому из пп. 1-7, которая экспрессируется в грибковой клетке-хозяине.
9. Фитаза по любому из пп. 1-7, которая экспрессируется в бактериальном хозяине.
10. Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая любую из фитаз по любому из пп. 1-7.
11. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 10.
12. Клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по п. 10 или вектор по п. 11.
13. Клетка-хозяин по п. 12, которая является грибковой клеткой-хозяином, предпочтительно дрожжевой клеткой-хозяином или бактериальной клеткой-хозяином, предпочтительно E. coli.
14. Применение фитазы по любому из пп. 1-7 для высвобождения фосфата из фитата.
15. Применение фитазы по любому из пп. 1-7 в качестве кормового ингредиента.
16. Способ получения фитазы по любому из пп. 1-7 путем рекомбинантной экспрессии фермента в клетке-хозяине по п. 12 или 13.
