Растительная композиция для вакцинации против чумы свиней и способ ее приготовления - RU2018143831A
Код документа: RU2018143831A
Формула
1. Рекомбинантный вектор для получения антигенного белка pmE2 вируса классической чумы свиней, продуцируемого в растениях, включающий:
полинуклеотид, кодирующий белок GP55 вируса классической чумы свиней (CSFV); и
полинуклеотид, кодирующий белок домена, связывающего целлюлозу (CBD).
2. Рекомбинантный вектор по п. 1, отличающийся тем, что полинуклеотид, кодирующий белок GP55 из CSFV, представлен SEQ ID NO: 1.
3. Рекомбинантный вектор по п. 1, отличающийся тем, что полинуклеотид, кодирующий белок CBD, представлен SEQ ID NO: 2.
4. Рекомбинантный вектор по п. 1, отличающийся тем, что рекомбинантный вектор включает одно или несколько выбранных из группы, состоящей из промотора 35S CaMV; 5 ' UTR (M17); полинуклеотида, кодирующего шаперон-связывающий белок (BiP); и полинуклеотида, кодирующего белок His-Asp-Glu-Leu (HDEL).
5. Рекомбинантный вектор по п. 4, отличающийся тем, что 5' UTR (M17) включает нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 3.
6. Рекомбинантный вектор по п. 4, отличающийся тем, что полинуклеотид, кодирующий белок BiP, представлен SEQ ID NO: 4.
7. Рекомбинантный вектор по п. 1, отличающийся тем, что рекомбинантный вектор включает нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 5.
8. Рекомбинантный вектор по п. 1, отличающийся тем, что рекомбинантный вектор представлен следующей векторной картой:
Карта
9. Трансформированное растение для получения антигенного белка pmE2 вируса классической чумы свиней, продуцируемого в растениях, которое трансформируется любым из рекомбинантных векторов по пп. 1-8.
10. Антигенный белок pmE2 вируса классической чумы свиней, продуцируемый в растениях, экспрессируемый в трансформированном растении по п. 9.
11. Белок pmE2 по п. 10, отличающийся тем, что антигенный белок pmE2 вируса классической чумы свиней, продуцируемый в растениях, представляет собой слияние белка GP55 из CSFV и белка, связывающего целлюлозу (CBD).
12. Способ получения антигенного белка pmE2 вируса классической чумы свиней, продуцируемого в растениях, включающий:
(а) трансформацию Agrobacterium рекомбинантным вектором по п. 1;
(b) введение трансформированных Agrobacterium в растение; и
(c) выделение и очистка антигенного белка pmE2 вируса классической чумы свиней, продуцируемого растением, экспрессированного в растении.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что растение является одним или несколькими из группы, состоящей из Arabidopsis thaliana, пшеницы, ячменя, кукурузы, бобов, картофеля, красной фасоли, овса, сорго, риса, китайской капусты, дайкона, перца, клубники, помидора, арбуза, огурца, капусты, восточной дыни, тыквы, валлийского лука, лука, моркови, женьшеня, табака, хлопка, кунжута, сахарного тростника, свеклы, периллы, арахиса, рапса, яблони, груши, ююбы, персика, киви, винограда, мандарина, хурмы, сливы, абрикоса, банана, розы, гладиолуса, герберы, гвоздики, хризантемы, лилии, тюльпана, райграса, красного клевера, ежи сборной, люцерны, овсяницы тростниковой и многолетнего райграса.
14. Состав вакцины для предотвращения классической чумы свиней, включающий:
антигенный белок pmE2 вируса классической чумы свиней, продуцируемый в растениях, по п. 10 в качестве активного ингредиента.
15. Фармацевтическая композиция для предотвращения классической чумы свиней, включающая:
антигенный белок pmE2 вируса классической чумы свиней, продуцируемый в растениях, по п. 10 в качестве активного ингредиента.
16. Композиция корма для предотвращения классической чумы свиней, включающая:
антигенный белок pmE2 вируса классической чумы свиней, продуцируемый в растениях, по п. 10 в качестве активного ингредиента.
17. Композиция для диагностики вируса классической чумы свиней (CSFV), включающая:
антигенный белок pmE2 вируса классической чумы свиней, продуцируемый в растениях, по п. 10.
18. Набор для диагностики вируса классической чумы свиней (CSFV), включающий:
антигенный белок pmE2 вируса классической чумы свиней, продуцируемый в растениях, по п. 10.
19. Способ предотвращения классической чумы свиней, включающий:
введение животному вакцинной композиции по п. 14.
20. Способ детекции вируса классической чумы свиней (CSFV), включающий:
детектирование CSFV в образце с помощью реакции антиген-антитело с использованием антигенного белка pmE2 вируса классической чумы свиней, продуцируемого в растениях, по п. 10.
21. Способ по п. 20, отличающийся тем, что реакцию антиген-антитело детектируют с использованием одного или нескольких способов, выбранных из группы, включающей иммуноокрашивание тканей, радиоиммуноанализ (RIA), твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), вестерн-блоттинг, иммунопреципитационный анализ, иммунодиффузионный анализ, анализ фиксации комплемента, клеточный сортер с активацией флуоресценции (FACS) и анализ на белковом чипе.
22. Способ по п. 20, отличающийся тем, что образец является одним или несколькими из группы, состоящей из клеток, крови, мочи, слюны и ткани.
23. Способ определения пути продуцирования антител вируса классической чумы свиней (CSFV), включающий:
1) введение вакцинной композиции по п. 14 экспериментальному объекту и затем сбор крови у экспериментального объекта;
2) выделение сыворотки из крови, собранной на стадии 1); и
3) обработку сыворотки, выделенной на стадии 2), с использованием антигенного белка pmE2 вируса классической чумы свиней, продуцируемого растением, по п. 10 в качестве антигена для индукции реакции.
24. Способ по п. 23, отличающийся тем, что при реакции на стадии 3), когда антитела против белка GP55 из CSFV и белка домена, связывающего целлюлозу (CBD), детектируют вместе, антитела, образованные у экспериментального объекта, по-видимому, продуцируется из-за введения вакцинной композиции по п. 14.
25. Способ по п. 23, отличающийся тем, что при реакции на стадии 3), если обнаружены только антитела против белка GP55 из CSFV, то считается, что они продуцируются в ответ на инфекцию CSFV.
