Трипептидилпептидазы, способные воздействовать на связи с участием пролина, и их применения - RU2017117858A

1. Способ получения гидролизата, включающий:

(a) смешивание по меньшей мере одного белка или его части с:

(A) по меньшей мере одной эндопротеазой и

(B) (aʹ) по меньшей мере одной трипептидилпептидазой, cпособной воздействовать на связи с участием пролина, или ферментатом, содержащим трипептидилпептидазу, способную воздействовать на связи с участием пролина, преимущественно обладающую экзопептидазной активностью, где указанная трипептидилпептидаза, способная воздействовать на связи с участием пролина, способна к отщеплению трипептидов с N-конца пептидов, имеющих:

пролин в P1 и

аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1;или

(bʹ) по меньшей мере одной трипептидилпептидазой, способной воздействовать на связи с участием пролина, обладающей экзопептидазной активностью, где указанная трипептидилпептидаза, способная воздействовать на связи с участием пролина, способна к отщеплению трипептидов с N-конца пептидов, имеющих:

пролин в P1ʹ и

аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1ʹ; и

(b) извлечение гидролизата.

2. Способ получения гидролизата, включающий:

(a) смешивание по меньшей мере одного белка или его части, выбранных из группы, состоящей из растительного белка, белка молока или яичного белка, с:

(i) по меньшей мере одной эндопептидазой;

(ii) по меньшей мере одной экзо-трипептидилпептидазой семейства S53 и

(iii) одной или несколькими аминопептидазами, и

(b) извлечение гидролизата.

3. Применение (i) по меньшей мере одной эндопептидазы; (ii) по меньшей мере одной экзо-трипептидилпептидазы семейства S53 и (iii) одной или нескольких аминопептидаз в получении гидролизата по меньшей мере из одного белка или его части, выбранных из группы, состоящей из: растительного белка, белка молока или яичного белка, для снижения иммуногенности у субъекта, имеющего склонность к иммунной реакции на необработанный гидролизат, или для уменьшения горечи гидролизата.

4. Способ или применение по любому из пп. 1-3, где по меньшей мере один белок выбран из группы, состоящей из: растительного белка, где предпочтительно белок представляет собой один или несколько из глиадина, иммуногенного фрагмента глиадина, белка зерновых, глютена, соевого белка.

5. Способ или применение по любому из пп. 1-4, где по меньшей мере один белок выбран из группы, состоящей из: белка молока, где предпочтительно белок представляет собой один или несколько из казеина, например, бета-казеин; лактоглобулина, например, бета-лактоглобулин, или белка сыворотки молока.

6. Способ или применение по любому из пп. 1-5, где по меньшей мере один белок представляет собой яичный белок.

7. Способ по любому из пп. 2-6, где порядок осуществления смешивания на стадии (a) представляет собой определенный порядок, а именно, (i) осуществляют перед (ii) и/или (iii).

8. Способ или применение по любому из пп. 2-7, где трипептидилпептидаза в (ii) представляет собой трипептидилпептидазу, способную воздействовать на связи с участием пролина.

9. Способ или применение по п. 8, где трипептидилпептидаза, способная воздействовать на связи с участием пролина, преимущественно обладает экзопептидазной активностью и

a) способна к отщеплению трипептидов с N-конца пептидов, имеющих:

пролин в P1 и аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1;или

(bʹ) способна к отщеплению трипептидов с N-конца пептидов, имеющих: пролин в P1ʹ и аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1ʹ.

10. Способ или применение по любому из пп. 2-9, где указанная аминопептидаза представляет собой аминопептидазу, получаемую из Lactobacillus, более предпочтительно из Lactobacillus helveticus.

11. Способ или применение по любому из пп. 1-10, где указанная по меньшей мере одна трипептидилпептидаза или по меньшей мере одна экзо-трипептидилпептидаза семейства S53 способна к отщеплению трипептидов с N-конца пептидов, имеющих одну или несколько аминокислот в P1, выбранных из группы, состоящей из: лизина, аргинина и глицина.

12. Способ или применение по любому из пп. 1-11, где по меньшей мере одна трипептидилпептидаза, способная воздействовать на связи с участием пролина, или по меньшей мере одна экзо-трипептидилпептидаза семейства S53:

(a) содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID No. 29, SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 2, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No.6, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. 18, SEQ ID No. 19, SEQ ID No. 20, SEQ ID No. 21, SEQ ID No. 22, SEQ ID No. 23, SEQ ID No. 24, SEQ ID No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 30, SEQ ID No. 31, SEQ ID No. 32, SEQ ID No. 33, SEQ ID No. 34, SEQ ID No. 35, SEQ ID No. 36, SEQ ID No. 37, SEQ ID No. 38, SEQ ID No. 39, SEQ ID No. 40, SEQ ID No. 41, SEQ ID No. 42, SEQ ID No. 43, SEQ ID No. 44, SEQ ID No. 45, SEQ ID No. 46, SEQ ID No. 47, SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 49, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 52, SEQ ID No. 53, SEQ ID No. 54, SEQ ID No. 55, SEQ ID No. 98, SEQ ID No. 99 или ее функциональный фрагмент;

(b) содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70% идентична последовательности под SEQ ID No. 29, SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 2, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No.6, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. 18, SEQ ID No. 19, SEQ ID No. 20, SEQ ID No. 21, SEQ ID No. 22, SEQ ID No. 23, SEQ ID No. 24, SEQ ID No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 30, SEQ ID No. 31, SEQ ID No. 32, SEQ ID No. 33, SEQ ID No. 34, SEQ ID No. 35, SEQ ID No. 36, SEQ ID No. 37, SEQ ID No. 38, SEQ ID No. 39, SEQ ID No. 40, SEQ ID No. 41, SEQ ID No. 42, SEQ ID No. 43, SEQ ID No. 44, SEQ ID No. 45, SEQ ID No. 46, SEQ ID No. 47, SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 49, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 52, SEQ ID No. 53, SEQ ID No. 54, SEQ ID No. 55, SEQ ID No. 98, SEQ ID No. 99, или ее функциональный фрагмент;

(c) кодируется нуклеотидной последовательностью, содержащей последовательность под SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59, SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62, SEQ ID No. 63, SEQ ID No. 64, SEQ ID No. 65, SEQ ID No. 66, SEQ ID No. 67, SEQ ID No. 68, SEQ ID No. 69, SEQ ID No. 70, SEQ ID No. 71, SEQ ID No. 72, SEQ ID No. 73, SEQ ID No. 74, SEQ ID No. 75, SEQ ID No. 76, SEQ ID No. 77, SEQ ID No. 78, SEQ ID No. 79, SEQ ID No. 80, SEQ ID No. 81, SEQ ID No. 82, SEQ ID No. 83, SEQ ID No. 84, SEQ ID No. 85, SEQ ID No. 86, SEQ ID No. 87, SEQ ID No. 88, SEQ ID No. 89, SEQ ID No. 90, SEQ ID No. 91, SEQ ID No. 92, SEQ ID No. 93, SEQ ID No. 94, SEQ ID No. 95, SEQ ID No. 96 или SEQ ID No. 97;

(d) кодируется нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на приблизительно 70% идентична последовательности под SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59, SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62, SEQ ID No. 63, SEQ ID No. 64, SEQ ID No. 65, SEQ ID No. 66, SEQ ID No. 67, SEQ ID No. 68, SEQ ID No. 69, SEQ ID No. 70, SEQ ID No. 71, SEQ ID No. 72, SEQ ID No. 73, SEQ ID No. 74, SEQ ID No. 75, SEQ ID No. 76, SEQ ID No. 77, SEQ ID No. 78, SEQ ID No. 79, SEQ ID No. 80, SEQ ID No. 81, SEQ ID No. 82, SEQ ID No. 83, SEQ ID No. 84, SEQ ID No. 85, SEQ ID No. 86, SEQ ID No. 87, SEQ ID No. 88, SEQ ID No. 89, SEQ ID No. 90, SEQ ID No. 91, SEQ ID No. 92, SEQ ID No. 93, SEQ ID No. 94, SEQ ID No. 95, SEQ ID No. 96 или SEQ ID No. 97;

(e) кодируется нуклеотидной последовательностью, которая гибридизируется с последовательностью под SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59, SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62, SEQ ID No. 63, SEQ ID No. 64, SEQ ID No. 65, SEQ ID No. 66, SEQ ID No. 67, SEQ ID No. 68, SEQ ID No. 69, SEQ ID No. 70, SEQ ID No. 71, SEQ ID No. 72, SEQ ID No. 73, SEQ ID No. 74, SEQ ID No. 75, SEQ ID No. 76, SEQ ID No. 77, SEQ ID No. 78, SEQ ID No. 79, SEQ ID No. 80, SEQ ID No. 81, SEQ ID No. 82, SEQ ID No. 83, SEQ ID No. 84, SEQ ID No. 85, SEQ ID No. 86, SEQ ID No. 87, SEQ ID No. 88, SEQ ID No. 89, SEQ ID No. 90, SEQ ID No. 91, SEQ ID No. 92, SEQ ID No. 93, SEQ ID No. 94, SEQ ID No. 95, SEQ ID No. 96 или SEQ ID No. 97 в условиях средней жесткости; или

(f) кодируется нуклеотидной последовательностью, которая отличается от последовательности под SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59, SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62, SEQ ID No. 63, SEQ ID No. 64, SEQ ID No. 65, SEQ ID No. 66, SEQ ID No. 67, SEQ ID No. 68, SEQ ID No. 69, SEQ ID No. 70, SEQ ID No. 71, SEQ ID No. 72, SEQ ID No. 73, SEQ ID No. 74, SEQ ID No. 75, SEQ ID No. 76, SEQ ID No. 77, SEQ ID No. 78, SEQ ID No. 79, SEQ ID No. 80, SEQ ID No. 81, SEQ ID No. 82, SEQ ID No. 83, SEQ ID No. 84, SEQ ID No. 85, SEQ ID No. 86, SEQ ID No. 87, SEQ ID No. 88, SEQ ID No. 89, SEQ ID No. 90, SEQ ID No. 91, SEQ ID No. 92, SEQ ID No. 93, SEQ ID No. 94, SEQ ID No. 95, SEQ ID No. 96 или SEQ ID No. 97 в силу вырожденности генетического кода.

13. Способ или применение по любому из пп. 1-12, где указанная по меньшей мере одна трипептидилпептидаза, способная воздействовать на связи с участием пролина, или по меньшей мере одна экзо-трипептидилпептидаза семейства S53 кодируется нуклеотидной последовательностью, содержащей последовательность под SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59, SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62, SEQ ID No. 63, SEQ ID No. 64, SEQ ID No. 65, SEQ ID No. 66, SEQ ID No. 67, SEQ ID No. 68, SEQ ID No. 69, SEQ ID No. 70, SEQ ID No. 71, SEQ ID No. 72, SEQ ID No. 73, SEQ ID No. 74, SEQ ID No. 75, SEQ ID No. 76, SEQ ID No. 77, SEQ ID No. 78, SEQ ID No. 79, SEQ ID No. 80, SEQ ID No. 81, SEQ ID No. 82, SEQ ID No. 83, SEQ ID No. 84, SEQ ID No. 85, SEQ ID No. 86, SEQ ID No. 87, SEQ ID No. 88, SEQ ID No. 89, SEQ ID No. 90, SEQ ID No. 91, SEQ ID No. 92, SEQ ID No. 93, SEQ ID No. 94, SEQ ID No. 95, SEQ ID No. 96, SEQ ID No. 97, или нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична им, или последовательностью, которая гибридизируется с последовательностью под SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59, SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62, SEQ ID No. 63, SEQ ID No. 64, SEQ ID No. 65, SEQ ID No. 66, SEQ ID No. 67, SEQ ID No. 68, SEQ ID No. 69, SEQ ID No. 70, SEQ ID No. 71, SEQ ID No. 72, SEQ ID No. 73, SEQ ID No. 74, SEQ ID No. 75, SEQ ID No. 76, SEQ ID No. 77, SEQ ID No. 78, SEQ ID No. 79, SEQ ID No. 80, SEQ ID No. 81, SEQ ID No. 82, SEQ ID No. 83, SEQ ID No. 84, SEQ ID No. 85, SEQ ID No. 86, SEQ ID No. 87, SEQ ID No. 88, SEQ ID No. 89, SEQ ID No. 90, SEQ ID No. 91, SEQ ID No. 92, SEQ ID No. 93, SEQ ID No. 94, SEQ ID No. 95, SEQ ID No. 96 или SEQ ID No. 97 в условиях высокой жесткости.

14. Способ или применение по любому из пп. 1-13, где трипептидилпептидаза, способная воздействовать на связи с участием пролина, или по меньшей мере одна экзо-трипептидилпептидаза семейства S53 способна к отщеплению трипептидов с N-конца пептидов, имеющих:

(i) пролин в P1 и

аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1; и

(ii) пролин в P1ʹ и

аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1ʹ.

15. Способ или применение по любому из пп. 1-14, где трипептидилпептидаза, способная воздействовать на связи с участием пролина, или по меньшей мере одна экзо-трипептидилпептидаза семейства S53 дополнительно способна к отщеплению трипептидов с N-конца пептида, имеющего пролин в P1 и пролин в P1ʹ.

16. Способ по любому из пп. 1-15, где способ дополнительно включает смешивание извлеченного гидролизата по меньшей мере с одним кормовым или пищевым ингредиентом.

17. Способ по п. 1 или пп. 11-16, где стадию (A) и стадию (B) осуществляют одновременно.

18. Способ по любому из пп. 1-17, где по меньшей мере одна эндопротеаза и по меньшей мере одна трипептидилпептидаза, способная воздействовать на связи с участием пролина, или по меньшей мере одна экзо-трипептидилпептидаза семейства S53 являются активными в одинаковом диапазоне pH.

19. Способ или применение по любому из пп. 1-18, где эндопротеаза представляет собой кислую эндопротеазу.

20. Способ или применение по любому из пп. 1-19, где по меньшей мере одна эндопротеаза представляет собой щелочную эндопротеазу, предпочтительно выбранную из одного или нескольких из трипсина или химотрипсина.

21. Способ или применение по любому из пп. 1-20, где гидролизат характеризуется пониженной иммуногенностью по отношению к субъекту, имеющему склонность к возникновению иммунного ответа по меньшей мере на один белок или его часть.

22. Способ или применение по любому из п. 1 или пп. 11-21, где по меньшей мере один белок представляет собой белок животного происхождения или растительный белок, где предпочтительно белок представляет собой один или несколько из глиадина, бета-казеина, бета-лактоглобулина или иммуногенного фрагмента глиадина, бета-казеина, бета-лактоглобулина, белка сыворотки молока, белка рыбы, белка мяса, яичного белка, соевого белка, гордеина или белка зерновых.

23. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая:

(a) нуклеотидную последовательность, представленную в настоящей заявке под SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59, SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62, SEQ ID No. 63, SEQ ID No. 64, SEQ ID No. 65, SEQ ID No. 66, SEQ ID No. 67, SEQ ID No. 68, SEQ ID No. 69, SEQ ID No. 70, SEQ ID No. 71, SEQ ID No. 72, SEQ ID No. 73, SEQ ID No. 74, SEQ ID No. 75, SEQ ID No. 76, SEQ ID No. 77, SEQ ID No. 78, SEQ ID No. 79, SEQ ID No. 80, SEQ ID No. 81, SEQ ID No. 82, SEQ ID No. 83, SEQ ID No. 84, SEQ ID No. 85, SEQ ID No. 86, SEQ ID No. 87, SEQ ID No. 88, SEQ ID No. 89, SEQ ID No. 90, SEQ ID No. 91, SEQ ID No. 92, SEQ ID No. 93, SEQ ID No. 94, SEQ ID No. 95, SEQ ID No. 96 или SEQ ID No. 97;

(b) нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на приблизительно 70% идентична последовательности под SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59, SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62, SEQ ID No. 63, SEQ ID No. 64, SEQ ID No. 65, SEQ ID No. 66, SEQ ID No. 67, SEQ ID No. 68, SEQ ID No. 69, SEQ ID No. 70, SEQ ID No. 71, SEQ ID No. 72, SEQ ID No. 73, SEQ ID No. 74, SEQ ID No. 75, SEQ ID No. 76, SEQ ID No. 77, SEQ ID No. 78, SEQ ID No. 79, SEQ ID No. 80, SEQ ID No. 81, SEQ ID No. 82, SEQ ID No. 83, SEQ ID No. 84, SEQ ID No. 85, SEQ ID No. 86, SEQ ID No. 87, SEQ ID No. 88, SEQ ID No. 89, SEQ ID No. 90, SEQ ID No. 91, SEQ ID No. 92, SEQ ID No. 93, SEQ ID No. 94, SEQ ID No. 95, SEQ ID No. 96 или SEQ ID No. 97; или

(c) последовательность, которая гибридизируется с последовательностью под SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59, SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62, SEQ ID No. 63, SEQ ID No. 64, SEQ ID No. 65, SEQ ID No. 66, SEQ ID No. 67, SEQ ID No. 68, SEQ ID No. 69, SEQ ID No. 70, SEQ ID No. 71, SEQ ID No. 72, SEQ ID No. 73, SEQ ID No. 74, SEQ ID No. 75, SEQ ID No. 76, SEQ ID No. 77, SEQ ID No. 78, SEQ ID No. 79, SEQ ID No. 80, SEQ ID No. 81, SEQ ID No. 82, SEQ ID No. 83, SEQ ID No. 84, SEQ ID No. 85, SEQ ID No. 86, SEQ ID No. 87, SEQ ID No. 88, SEQ ID No. 89, SEQ ID No. 90, SEQ ID No. 91, SEQ ID No. 92, SEQ ID No. 93, SEQ ID No. 94, SEQ ID No. 95, SEQ ID No. 96 или SEQ ID No. 97 в условиях средней жесткости; или

(c) нуклеотидную последовательность, которая отличается от последовательности под SEQ ID No. 56, SEQ ID No. 57, SEQ ID No. 58, SEQ ID No. 59, SEQ ID No. 60, SEQ ID No. 61, SEQ ID No. 62, SEQ ID No. 63, SEQ ID No. 64, SEQ ID No. 65, SEQ ID No. 66, SEQ ID No. 67, SEQ ID No. 68, SEQ ID No. 69, SEQ ID No. 70, SEQ ID No. 71, SEQ ID No. 72, SEQ ID No. 73, SEQ ID No. 74, SEQ ID No. 75, SEQ ID No. 76, SEQ ID No. 77, SEQ ID No. 78, SEQ ID No. 79, SEQ ID No. 80, SEQ ID No. 81, SEQ ID No. 82, SEQ ID No. 83, SEQ ID No. 84, SEQ ID No. 85, SEQ ID No. 86, SEQ ID No. 87, SEQ ID No. 88, SEQ ID No. 89, SEQ ID No. 90, SEQ ID No. 91, SEQ ID No. 92, SEQ ID No. 93, SEQ ID No. 94, SEQ ID No. 95, SEQ ID No. 96 или SEQ ID No. 97 в силу вырожденности генетического кода.

24. Вектор (например, плазмида), содержащий нуклеиновую кислоту по п. 23.

25. Клетка-хозяин, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты по п. 23 или вектор по п. 24.

26. Клетка-хозяин по п. 25, где клетка-хозяин представляет собой клетку Trichoderma, предпочтительно клетку Trichoderma reesei.

27. Способ экспрессии трипептидилпептидазы, способной воздействовать на связи с участием пролина, преимущественно обладающей экзопептидазной активностью, где указанная трипептидилпептидаза, способная воздействовать на связи с участием пролина, способна к отщеплению трипептидов с N-конца пептидов, имеющих сайты расщепления консенсусной последовательности:

(i) пролин в P1 и

аминокислотa, выбраннaя из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1; или

(ii) пролин в P1ʹ и

аминокислотa, выбраннaя из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1ʹ,

включающий:

(a) трансформацию клетки-хозяина нуклеиновой кислотой или вектором, содержащими нуклеотидную последовательность, кодирующую трипептидилпептидазу, способную воздействовать на связи с участием пролина;

(b) экспрессию последовательности нуклеиновой кислоты или вектора из стадии (a) и

(c) получение трипептидилпептидазы, способной воздействовать на связи с участием пролина, или ферментата, содержащего указанную трипептидилпептидазу, способную воздействовать на связи с участием пролина, и необязательно выделение, и/или очистку, и/или упаковывание.

28. Способ по п. 27, где клетка-хозяин представляет собой клетку Trichoderma, предпочтительно клетку Trichoderma reesei.

29. Способ по п. 27 или п. 28, где клетку-хозяина трансформируют выделенной нуклеиновой кислотой по п. 23 или вектором по п. 24.

30. Применение по меньшей мере одной эндопротеазы и по меньшей мере одной трипептидилпептидазы, способной воздействовать на связи с участием пролина, или ферментата, содержащего трипептидилпептидазу, способную воздействовать на связи с участием пролина, где указанная трипептидилпептидаза, способная воздействовать на связи с участием пролина, преимущественно обладает экзопептидазной активностью и способна к отщеплению трипептидов с N-конца пептидов, имеющих:

(i) пролин в P1 и

аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1; или

(ii) пролин в P1ʹ и

аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1ʹ;

или которые являются получаемыми посредством любого из способов 19-21, в получении гидролизата для снижения иммуногенности у субъекта, имеющего склонность к иммунной реакции на необработанный гидролизат, или для уменьшения горечи гидролизата.

31. Способ по любому из п. 1 или пп. 11-29 или применение по п. 30, которые дополнительно включают добавление одной или нескольких дополнительных протеаз, выбранных из группы, состоящей из: аминопептидазы и карбоксипептидазы.

32. Способ или применение по п. 31, где по меньшей мере одна дополнительная протеаза представляет собой аминопептидазу, предпочтительно аминопептидазу, получаемую из Lactobacillus, более предпочтительно Lactobacillus helveticus.

33. Способ по любому из пп. 1-22 или пп. 31-32 или применение по любому из пп. 30-32, где по меньшей мере один белок или его часть смешивают по меньшей мере c одной эндопротеазой перед добавлением по меньшей мере одной трипептидилпептидазы, способной воздействовать на связи с участием пролина (и необязательно по меньшей мере одной дополнительной протеазы).

34. Гидролизат, содержащий по меньшей мере одну эндопротеазу и трипептидилпептидазу, способную воздействовать на связи с участием пролина, преимущественно обладающую экзопептидазной активностью, где указанная трипептидилпептидаза, способная воздействовать на связи с участием пролина, способна к отщеплению трипептидов с N-конца пептидов, имеющих:

(i) пролин в P1 и

аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1; или

(ii) пролин в P1ʹ и

аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1ʹ;

или может быть получена посредством любого из способов 27-29.

35. Гидролизат по п. 34, где гидролизат является, по сути, обогащенным одним или несколькими трипептидами.

36. Гидролизат по п. 34 или п. 35, где гидролизат представляет собой гидролизат белка молока, гидролизат глиадина или гидролизат соевого белка.

37. Композиция, содержащая по меньшей мере одну трипептидилпептидазу, способную воздействовать на связи с участием пролина, преимущественно обладающую экзопептидазной активностью, где указанная трипептидилпептидаза, способная воздействовать на связи с участием пролина, способна к отщеплению трипептидов с N-конца пептидов, имеющих:

(i) пролин в P1 и

аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1; или

(ii) пролин в P1ʹ и

аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1ʹ;

или может быть получена посредством любого из способов 27-29, и один или несколько ингредиентов, выбранных из группы, состоящей из: полиолов, таких как глицерин и/или сорбит; сахаров, таких как глюкоза, фруктоза, сахароза, мальтоза, лактоза и трегалоза; солей, таких как NaCl, KCl, CaCl₂, Na₂SO₄, или других солей для применения в пищевой промышленности; консерванта, например, бензоата натрия и/или сорбата калия; или их комбинаций.

38. Композиция по п. 37, где указанная композиция дополнительно содержит по меньшей мере одну эндопротеазу.

39. Способ получения кормового продукта или пищевого продукта, включающий приведение в контакт кормового компонента или пищевого компонента с гидролизатом по любому из пп. 34-36 или с композицией по п. 37 или п. 38.

40. Композиция пищевой добавки или композиция кормовой добавки, содержащая по меньшей мере одну трипептидилпептидазу, способную воздействовать на связи с участием пролина, где указанная трипептидилпептидаза, способная воздействовать на связи с участием пролина, преимущественно обладает экзопептидазной активностью и способна к отщеплению трипептидов с N-конца пептидов, имеющих:

(i) пролин в P1 и

аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1; или

(ii) пролин в P1ʹ и

аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1ʹ;

или может быть получена посредством любого из способов 27-29, или гидролизат по любому из пп. 32-34, необязательно дополнительно содержащий один или несколько ингредиентов, выбранных из группы, состоящей из: полиолов, таких как глицерин и/или сорбит; сахаров, таких как глюкоза, фруктоза, сахароза, мальтоза, лактоза и трегалоза; солей, таких как NaCl, KCl, CaCl₂, Na₂SO₄, или других солей для применения в пищевой промышленности; консерванта, например, бензоата натрия и/или сорбата калия; или их комбинаций.

41. Композиция пищевой добавки или композиция кормовой добавки по п. 40, где указанная композиция дополнительно содержит по меньшей мере одну эндопротеазу.

42. Композиция пищевой добавки или композиция кормовой добавки, содержащая гидролизат по любому из пп. 34-36.

43. Пищевой продукт или кормовой продукт, содержащий по меньшей мере одну трипептидилпептидазу, способную воздействовать на связи с участием пролина, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из последовательностей под SEQ ID No. 29, SEQ ID No. 1, SEQ ID No. 2, SEQ ID No. 3, SEQ ID No. 4, SEQ ID No. 5, SEQ ID No.6, SEQ ID No. 7, SEQ ID No. 8, SEQ ID No. 9, SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 12, SEQ ID No. 13, SEQ ID No. 14, SEQ ID No. 15, SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 17, SEQ ID No. 18, SEQ ID No. 19, SEQ ID No. 20, SEQ ID No. 21, SEQ ID No. 22, SEQ ID No. 23, SEQ ID No. 24, SEQ ID No. 25, SEQ ID No. 26, SEQ ID No. 27, SEQ ID No. 28, SEQ ID No. 30, SEQ ID No. 31, SEQ ID No. 32, SEQ ID No. 33, SEQ ID No. 34, SEQ ID No. 35, SEQ ID No. 36, SEQ ID No. 37, SEQ ID No. 38, SEQ ID No. 39, SEQ ID No. 40, SEQ ID No. 41, SEQ ID No. 42, SEQ ID No. 43, SEQ ID No. 44, SEQ ID No. 45, SEQ ID No. 46, SEQ ID No. 47, SEQ ID No. 48, SEQ ID No. 49, SEQ ID No. 50, SEQ ID No. 51, SEQ ID No. 52, SEQ ID No. 53, SEQ ID No. 54, SEQ ID No. 55, SEQ ID No. 98, SEQ ID No. 99, или их функционального фрагмента, или аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 70% идентична им,

или которая может быть получена посредством любого из способов 27-29; или гидролизат по любому из пп. 34-36 и необязательно по меньшей мере один пищевой или кормовой ингредиент.

44. Кормовой продукт или пищевой продукт по п. 43, где корм, кормовой продукт, пищевой продукт или продукт питания представляет собой молочный продукт, (предпочтительно продукт на основе молока), продукт на основе белка сыворотки молока, хлебобулочный продукт (предпочтительно хлебный продукт), продукт ферментации (предпочтительно продукт ферментации сои), продукт для спортивного питания, функциональный пищевой продукт, напиток, продукт для детского питания, продукт питания для лиц пожилого возраста, продукт питания для лиц, нуждающихся в медицинской помощи, коктейль или упаковку (предпочтительно упаковку для пива или молочных продуктов).

45. Набор, содержащий по меньшей мере одну трипептидилпептидазу, способную воздействовать на связи с участием пролина, где указанная трипептидилпептидаза, способная воздействовать на связи с участием пролина, преимущественно обладает экзопептидазной активностью и способна к отщеплению трипептидов с N-конца пептидов, имеющих:

(i) пролин в P1 и

аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1; или

(ii) пролин в P1ʹ и

аминокислоту, выбранную из аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина или синтетических аминокислот, в P1ʹ;

или может быть получена посредством любого из способов по пп. 27-29; по меньшей мере одну эндопротеазу и инструкции для их совместного введения.

46. Набор, содержащий:

(i) по меньшей мере одну эндопептидазу;

(ii) по меньшей мере одну экзо-трипептидилпептидазу семейства S53 и

(iii) одну или несколько аминопептидаз и инструкции для их совместного введения.

47. Продукт, не являющийся пищевым продуктом, содержащий гидролизат по любому из пп. 34-36, где продукт, не являющийся пищевым продуктом, представляет собой косметическое средство, лосьон или очищающее средство для применения на коже человека.

48. Гидролизат, обогащенный:

(a) трипептидом, имеющим пролин на своем N-конце; или

(b) трипептидом, имеющим пролин на своем N-конце и на своем C-конце.

49. Способ, применение, композиция кормовой добавки, корм, кормовой продукт, пищевой продукт или продукт питания, гидролизат, композиция, набор, нуклеиновая кислота, вектор, клетка-хозяин или продукт, не являющийся пищевым продуктом, описанные в настоящей заявке со ссылкой на описание, примеры и фигуры.