Растения с модифицированными признаками - RU2019109455A
Код документа: RU2019109455A
Формула
1. Способ получения пищевого продукта для животного, включающий стадии
(i) сбора вегетативных частей растений из растения вида Sorghum и/или Zea mays, имеющих общее содержание жирных кислот (TFA), включающее жирные кислоты, этерифицированные в форме триацилглицеринов (TAG), и жирные кислоты в форме липидов, отличных от TAG, где вегетативные части растений имеют содержание TFA приблизительно 5% (масс./масс. сухой массы) и предпочтительно, имеют соотношение TAG/TFA (TTQ) между 0,01 и 0,60, или между 0,60 и 0,84, или между 0,84 и 0,95, и одну или несколько из стадий
(ii) смешивания собранных частей растений по меньшей мере с одним другим кормовым ингредиентом,
(iii) упаковку в тюки собранных частей растений,
(iv) переработку собранных частей растений, предпочтительно, посредством рубки, нарезки, сушки, прессования или гранулирования частей растений, в форму, пригодную для употребления животным, и
(v) хранения собранных частей растений в условиях уменьшенного содержания кислорода в течение такого периода времени, что по меньшей мере некоторые из углеводов в частях растений подвергаются ферментации до органических кислот.
2. Способ по п. 1, в котором применяют один или несколько, или все из следующих признаков:
(i) вегетативные части растений собирают из растения между временем первого цветения растения и первого созревания семян,
(ii) растение вида Sorghum представляет собой растение Sorghum bicolor,
(iii) вегетативные части растений включают листья и стебли или их части,
(iv) вегетативные части растений имеют среднее содержание TFA приблизительно 6%, или приблизительно 8%, или приблизительно 9%, или приблизительно 10% (масс./масс. сухой массы),
(v) содержание TFA в вегетативных частях растений включает содержание олеиновой кислоты, которое увеличено по меньшей мере на 2% или по меньшей мере на 3% относительно содержания олеиновой кислоты в соответствующей вегетативной части растения дикого типа,
(vi) содержание TFA в вегетативных частях растений включает содержание пальмитиновой кислоты, которое увеличено по меньшей мере на 2% или по меньшей мере на 3% относительно содержания пальмитиновой кислоты в соответствующей вегетативной части растения дикого типа,
(vii) содержание TFA в вегетативных частях растений включает содержание α-линолеиновой кислоты (ALA), которое уменьшено по меньшей мере на 2% или по меньшей мере на 3% относительно содержания ALA в соответствующей вегетативной части растения дикого типа,
(viii) вегетативные части растений имеют увеличенное содержание растворимого белка по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(ix) вегетативные части растений имеют увеличенное содержание азота по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(x) вегетативные части растений имеют уменьшенное соотношение углерод:азот по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(xi) листья растения вида Sorghum и/или Zea mays имеют увеличенную способность к фотосинтезу по сравнению с соответствующими листьями дикого типа,
(xii) вегетативные части растений имеют уменьшенное общее содержание пищевых волокон (TDF) по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(xiii) вегетативные части растений имеют увеличенное содержание углерода по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(xiv) the вегетативные части растений имеют увеличенное содержание полипептида фактора транскрипции, по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа, где полипептид фактора транскрипции выбран из группы, состоящей из Wrinkled 1 (WRI1), листовой семядоли 1 (LEC1), LEC1-подобного, листовой семядоли 2 (LEC2), BABY BOOM (BBM), FUS3, ABI3, ABI4, ABI5, Dof4 и Dof11, или из группы, состоящей из MYB73, bZIP53, AGL15, MYB115, MYB118, TANMEI, WUS, GFR2a1, GFR2a2 и PHR1,
(xv) вегетативные части растений имеют увеличенное содержание полипептида ацилтрансферазы жирных кислот по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа, где ацилтрансфераза представляет собой диацилглицерин-ацилтрансферазу (DGAT) и/или фосфолипид:диацилглицерин-ацилтрансферазу (PDAT),
(xvi) вегетативные части растений имеют уменьшенное содержание полипептида TAG-липазы по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(xvii) вегетативные части растений имеют уменьшенное содержание полипептида тригалактозилдиацилглицерина (TGD) по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(xviii) вегетативные части растений имеют увеличенное содержание полипептида покрытия масляных телец (OBC) или ассоциированного с липидными капельками полипептида (LDAP) по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(xix) вегетативные части растений имеют увеличенное общее содержание белка по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(xx) вегетативные части растений имеют увеличенное содержание хлорофилла по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(xxi) вегетативные части растений имеют увеличенное содержание энергии в пересчете на массу по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(xxii) вегетативные части растений имеют увеличенное содержание фосфолипидов и/или галактолипидов, предпочтительно, увеличенное содержание моногалактозил-диглицерида (MDGD) и/или увеличенное содержание дигалактозил-диглицерида (DGDG), по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(xxiii) TTQ составляет приблизительно 0,1, или приблизительно 0,2 или приблизительно 0,3, или приблизительно 0,4 или приблизительно 0,5, или приблизительно 0,6, или приблизительно 0,65, или приблизительно 0,7, или приблизительно 0,75, или приблизительно 0,8, или приблизительно 0,81, или приблизительно 0,82, или приблизительно 0,83, или приблизительно 0,84, или приблизительно 0,85, или приблизительно 8,6, или приблизительно 8,7, или приблизительно 8,8, или приблизительно 8,9, или приблизительно 0,9, или приблизительно 0,91, или приблизительно 0,92, или приблизительно 0,93, или приблизительно 0,94, или приблизительно 0,95,
(xxiv) по меньшей мере один другой кормовой ингредиент содержит одно или несколько, или все из: съедобных питательных макровеществ, витаминов, минералов (таких как кальций, фосфор, магний и сера), сена, такого как люцерновое сено, пивной дробины, жмыховой муки (из канолы или сои), хлопчатника, мелассы, дополнительных аминокислот (таких как лизин и метионин) небелковых источников азота (таких как мочевина),
(xxv) период времени составляет между одной неделей и 52 неделями,
(xxvi) органические кислоты включают уксусную кислоту, пропионовую кислоту или масляную кислоту, или любую их комбинацию,
(xxvii) пищевой продукт представляет собой силос, гранулы или сено, и
(xxviii) вегетативные части растений хранят в течение некоторого периода времени перед смешиванием по меньшей мере с одним другим кормовым ингредиентом,
в каждом случае, когда соответствующую часть растения дикого типа собирают из растения вида Sorghum и/или Zea mays дикого типа на такой же стадии роста.
3. Способ по п. 1 или 2, в котором применяют один или несколько, или все из следующих признаков:
(i) вегетативные части растений представляют собой листья и/или стебли, или их части, имеющие одно или несколько из увеличенного содержания углерода, увеличенного содержания энергии, увеличенного содержания растворимого белка, уменьшенного содержания крахмала, уменьшенного общего содержания пищевых волокон (TDF) и увеличенного содержания азота, каждое в пересчете на массу по сравнению с соответствующим листом или стеблем дикого типа, или их частями, из растения вида Sorghum и/или Zea mays дикого типа на такой же стадии роста,
(ii) содержание TFA в вегетативных частях растений составляет по меньшей мере приблизительно 6%, по меньшей мере приблизительно 7%, по меньшей мере приблизительно 8%, по меньшей мере приблизительно 9%, по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 11%, по меньшей мере приблизительно 12%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 55%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 65%, по меньшей мере приблизительно 70%, между 8% и 75%, между 6% и 20%, между 10% и 75%, между 11% и 75%, между приблизительно 15% и 75%, между приблизительно 20% и 75%, между приблизительно 30% и 75%, между приблизительно 40% и 75%, между приблизительно 50% и 75%, между приблизительно 60% и 75%, или между приблизительно 25% и 50% (масс./масс. сухой массы) TFA,
(iii) жирные кислоты, этерифицированные в форме TAG, в вегетативных частях растений составляют по меньшей мере приблизительно 1%, по меньшей мере приблизительно 2%, по меньшей мере приблизительно 3%, по меньшей мере приблизительно 4%, по меньшей мере приблизительно 5%, по меньшей мере приблизительно 6%, по меньшей мере приблизительно 7%, по меньшей мере приблизительно 8%, по меньшей мере приблизительно 9%, по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 11%, по меньшей мере приблизительно 12%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 55%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 65%, по меньшей мере приблизительно 70%, между 6% и 20%, между 8% и 75%, между 10% и 75%, между 11% и 75%, между приблизительно 15% и 75%, между приблизительно 20% и 75%, между приблизительно 30% и 75%, между приблизительно 40% и 75%, между приблизительно 50% и 75%, между приблизительно 60% и 75%, или между приблизительно 25% и 50% (масс./масс. сухой массы),
(iv) вегетативные части растений имеют увеличенное содержание полипептида WRI1, увеличенное содержание полипептида DGAT и уменьшенное содержание полипептида SDP1, каждое по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(v) вегетативные части растений имеют увеличенное содержание полипептида WRI1, увеличенное содержание полипептида DGAT и увеличенное содержание полипептида LEC2, каждое по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(vi) вегетативные части растений имеют увеличенное содержание полипептида PDAT или DGAT, уменьшенное содержание полипептида TGD, и уменьшенное содержание полипептида SDP1, каждое по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа,
(vii) вегетативные части растений имеют уменьшенное содержание TAG-липазы, такой как TAG-липаза SDP1, уменьшенное содержание полипептида TGD, такого как полипептид TGD5, и необязательно, уменьшенное содержание полипептида TST, такого как полипептид TST1, где каждое уменьшение присутствует по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа.
4. Способ кормления животного, включающий предоставление животному вегетативных частей растений из растения вида Sorghum и/или Zea mays, имеющих общее содержание жирных кислот (TFA), включающее жирные кислоты, этерифицированные в форме триацилглицеринов (TAG), и жирные кислоты в форме липидов, отличных от TAG, где вегетативные части растений имеют содержание TFA приблизительно 5% (масс./масс. сухой массы), предпочтительно, между приблизительно 6% и приблизительно 20%, и предпочтительно, имеют соотношение TAG/TFA (TTQ) между 0,01 и 0,60, или между 0,60 и 0,84, или между 0,84 и 0,95.
5. Способ по п. 4, в котором
(i) вегетативные части растений содержатся в растении вида Sorghum и/или Zea mays, растущем в поле,
(ii) вегетативные части растений собирают из растения вида Sorghum и/или Zea mays, и/или смешивают по меньшей мере с одним другим кормовым ингредиентом,
(iii) вегетативные части растений перерабатывали после сбора, предпочтительно, посредством рубки, нарезки, сушки, прессования или гранулирования частей растений, в форму, пригодную для употребления животным,
(iv) собранные части растений хранили в условиях уменьшенного содержания кислорода в течение такого периода времени, что по меньшей мере некоторые из углеводов в частях растений подвергаются ферментации до органических кислот до предоставления животному, и
(v) собранные части растений хранят в течение некоторого периода времени между их сбором и предоставлением животному.
6. Способ по п. 4 или 5, где животное употребляет внутрь увеличенное количество азота, белка, углерода и/или энергетического потенциала, или уменьшенное количество крахмала или TDF, относительно того, когда животное употребляет внутрь такое же количество в пересчете на сухую массу соответствующего пищевого продукта, полученного с использованием эквивалентного количества растения дикого типа вида Sorghum и/или Zea mays, или его частей.
7. Способ по любому из пп. 4-6, в котором применяют один или несколько, или все из признаков по п. 2 или 3.
8. Пищевой продукт для животного, содержащий собранные вегетативные части растений из растения вида Sorghum и/или Zea mays, имеющие общее содержание жирных кислот (TFA), включающее жирные кислоты, этерифицированные в форме триацилглицеринов (TAG), и жирные кислоты в форме липидов, отличных от TAG, где вегетативные части растений имеют содержание TFA приблизительно 5% (масс./масс. сухой массы), предпочтительно, между приблизительно 6% и приблизительно 20%, и предпочтительно, имеют соотношение TAG/TFA (TTQ) между 0,01 и 0,60, или между 0,60 и 0,84, или между 0,84 и 0,95, где
(i) собранные части растений смешаны по меньшей мере с одним другим кормовым ингредиентом,
(ii) собранные части растений упакованы в тюки после сбора,
(iii) собранные части растений переработаны, предпочтительно, посредством рубки, нарезки, сушки, прессования или гранулирования частей растений, в форму, пригодную для употребления животным, и
(iv) собранные части растений хранили в условиях уменьшенного содержания кислорода в течение такого периода времени, что по меньшей мере некоторые из углеводов в частях растений подверглись ферментации до органических кислот.
9. Пищевой продукт по п. 8, который представляет собой силос, гранулы или сено.
10. Пищевой продукт по п. 8 или 9, в котором применяют один или несколько, или все из признаков по п. 2 или 3.
11. Клетка, предпочтительно клетка вида Sorghum или Zea mays, отличная от клетки семян, имеющая общее содержание жирных кислот (TFA), включающее жирные кислоты, этерифицированные в форме триацилглицеринов (TAG), и жирные кислоты в форме липидов, отличных от TAG, где клетка имеет содержание TFA приблизительно 5% (масс./масс. сухой массы), предпочтительно, между приблизительно 6% и приблизительно 20%, и предпочтительно, имеет соотношение TAG/TFA (TTQ) между 0,01 и 0,60, или между 0,60 и 0,84, или между 0,84 и 0,95.
12. Клетка, предпочтительно клетка вида Sorghum или Zea mays, имеющая увеличенное содержание полипептида WRI1, увеличенное содержание полипептида DGAT, и уменьшенное содержание полипептида SDP1, каждое по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа.
13. Клетка, предпочтительно клетка вида Sorghum или Zea mays, имеющая увеличенное содержание полипептида WRI1, увеличенное содержание полипептида DGAT, и увеличенное содержание полипептида LEC2, каждое по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа.
14. Клетка, предпочтительно клетка вида Sorghum или Zea mays, имеющая увеличенное содержание полипептида PDAT или DGAT, уменьшенное содержание полипептида TGD, предпочтительно, полипептида TGD5, и уменьшенное содержание полипептида SDP1, каждое по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа.
15. Клетка, предпочтительно клетка вида Sorghum или Zea mays, имеющая уменьшенное содержание TAG-липазы, такой как TAG-липаза SDP1, уменьшенное содержание полипептида TGD, такого как полипептид TGD5, и необязательно, уменьшенное содержание полипептида TST, такого как полипептид TST1, где каждое уменьшение присутствует по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа.
16. Клетка по любому из пп. 11-15, к которой применимы один или несколько, или все из следующих признаков:
(i) клетка находится в вегетативной части растения, собранной из растения, предпочтительно, растения вида Sorghum и/или Zea mays, между временем первого цветения растения и первого созревания семян,
(ii) клетка представляет собой клетку растения Sorghum bicolor,
(iii) клетка находится в листе или стебле, или его части,
(iv) клетка имеет общее содержание липидов приблизительно 8%, или приблизительно 9%, или приблизительно 10% масс.,
(v) содержание TFA в клетке включает содержание олеиновой кислоты, которое увеличено по меньшей мере на 2% или по меньшей мере на 3% относительно содержания олеиновой кислоты в соответствующей клетке дикого типа,
(vi) содержание TFA в клетке включает содержание пальмитиновой кислоты, которое увеличено по меньшей мере на 2% или по меньшей мере на 3% относительно содержания пальмитиновой кислоты в соответствующей клетке дикого типа,
(vii) содержание TFA в клетке включает содержание α-линолеиновой кислоты (ALA), которое уменьшено по меньшей мере на 2% или по меньшей мере на 3% относительно содержания ALA в соответствующей клетке дикого типа,
(viii) клетка имеет увеличенное содержание растворимого белка по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа,
(ix) клетка имеет увеличенное содержание азота по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа,
(x) клетка имеет уменьшенное соотношение углерод:азот по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа,
(xi) клетка имеет увеличенную способность к фотосинтезу по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа,
(xii) клетка имеет уменьшенное содержание крахмала и/или общее содержание пищевых волокон (TDF) по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа,
(xiii) клетка имеет увеличенное содержание углерода по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа,
(xiv) клетка имеет увеличенное содержание полипептида фактора транскрипции по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа, где полипептид фактора транскрипции выбран из группы, состоящей из Wrinkled 1 (WRI1), листовой семядоли 1 (LEC1), LEC1-подобного, листовой семядоли 2 (LEC2), BABY BOOM (BBM), FUS3, ABI3, ABI4, ABI5, Dof4 и Dof11, или из группы, состоящей из MYB73, bZIP53, AGL15, MYB115, MYB118, TANMEI, WUS, GFR2a1, GFR2a2 и PHR1,
(xv) клетка имеет увеличенное содержание полипептида ацилтрансферазы жирных кислот по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа, где ацилтрансфераза представляет собой диацилглицерин-ацилтрансферазу (DGAT) и/или фосфолипид:диацилглицерин-ацилтрансферазу (PDAT),
(xvi) клетка имеет уменьшенное содержание полипептида TAG-липазы по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа,
(xvii) клетка имеет уменьшенное содержание полипептида тригалактозилдиацилглицерина (TGD) по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа,
(xviii) клетка имеет увеличенное содержание полипептида покрытия масляных телец (OBC) или ассоциированного с липидными капельками полипептида (LDAP) по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа,
(xix) клетка имеет увеличенное общее содержание белка по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа,
(xx) клетка имеет увеличенное содержание хлорофилла по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа,
(xxi) клетка имеет увеличенное содержание энергии в пересчете на массу по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа,
(xxii) клетка имеет увеличенное содержание фосфолипидов и/или галактолипидов, предпочтительно, увеличенное содержание MDGD и/или увеличенное содержание DGDG, по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа,
(xxiii) TTQ содержит приблизительно 0,1, или приблизительно 0,2 или приблизительно 0,3, или приблизительно 0,4 или приблизительно 0,5, или приблизительно 0,6, или приблизительно 0,65, или приблизительно 0,7, или приблизительно 0,75, или приблизительно 0,8, или приблизительно 0,81, или приблизительно 0,82, или приблизительно 0,83, или приблизительно 0,84, или приблизительно 0,85, или приблизительно 8,6, или приблизительно 8,7, или приблизительно 8,8, или приблизительно 8,9, или приблизительно 0,9, или приблизительно 0,91, или приблизительно 0,92, или приблизительно 0,93, или приблизительно 0,94, или приблизительно 0,95, и
(xxiv) соотношение жирных кислот, этерифицированных в форме TAG, к жирным кислотам в форме липидов, отличных от TAG, составляет между 20:1 и 1,5:1 или между 5:1 и 2:1, или приблизительно 4, приблизительно 3,5, приблизительно 3, или приблизительно 2,5.
17. Клетка по любому из пп. 11-16, содержащая один или оба из
a) первого экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид фактора транскрипции, который увеличивает экспрессию одного или нескольких гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в вегетативных частях растений или клетке, предпочтительно, полипептид WRI1, и
b) второго экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, вовлеченный в биосинтез одного или нескольких неполярных липидов, предпочтительно,DGAT и/или PDAT, и в каждом случае, любое одно или два, или три, или все четыре из
c) первой генетической модификации, осуществляющей понижающую регуляцию эндогенной продукции и/или активности полипептида, вовлеченного в катаболизм триацилглицеринов (TAG) в клетке, по сравнению с соответствующей клеткой, лишенной генетической модификации, предпочтительно, TAG-липазы SDP1,
d) третьего экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который увеличивает экспорт жирных кислот из пластид клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, лишенной третьего экзогенного полинуклеотида, предпочтительно, полипептид ацил-ACP-тиоэстеразы,
e) четвертого экзогенного полинуклеотида, кодирующего второй полипептид фактора транскрипции, который увеличивает экспрессию одного или нескольких гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке, предпочтительно, полипептид LEC2, и
f) второй генетической модификации, осуществляющей понижающую регуляцию эндогенной продукции и/или активности полипептида, вовлеченного в импорт жирных кислот в пластиды клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, лишенной второй генетической модификации, предпочтительно, полипептид TGD,
где каждый экзогенный полинуклеотид является функционально связанным с промотором, способным управлять экспрессией полинуклеотида в клетке.
18. Клетка по любому из пп. 11-17, которая дополнительно содержит одно или оба из
a) пятого экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид покрытия масляных телец (OBC) или ассоциированный с липидными капельками белок (LDAP), и
b) третьей генетической модификации, осуществляющей понижающую регуляцию эндогенной продукции и/или активности полипептида, вовлеченного в продукцию диацилглицерина (DAG) в пластиде, по сравнению с соответствующей клеткой, лишенной третьей генетической модификации.
19. Клетка по любому из пп. 11-18, которая содержит первый экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид WRI1, второй экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид DGAT, и уменьшенное содержание полипептида TAG-липазы и/или уменьшенное содержание полипептида TGD по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа, где каждый экзогенный полинуклеотид является функционально связанным с промотором способным управлять экспрессией полинуклеотида в клетке.
20. Клетка по любому из пп. 11-18, которая содержит экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид PDAT или DGAT, увеличенное содержание полипептида PDAT или DGAT, уменьшенное содержание полипептида TGD и уменьшенное содержание полипептида TAG-липазы, каждое по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа, где экзогенный полинуклеотид является функционально связанным с промотором, способным управлять экспрессией полинуклеотида в клетке.
21. Клетка по любому из пп. 11-18, которая имеет уменьшенное содержание TAG-липазы, такой как TAG-липаза SDP1, уменьшенное содержание полипептида TGD, такого как полипептид TGD5, и необязательно уменьшенное содержание полипептида TST, такого как полипептид TST1, где каждое уменьшение присутствует по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа.
22. Клетка по любому из пп. 11-21, где клетка происходит из или находится в вегетативной части растения, предпочтительно, растения вида Sorghum и/или Zea mays.
23 Клетка по любому из пп. 11-22, к которой применимы один или несколько, или все из следующих признаков;
i) клетка имеет увеличенный синтез общих жирных кислот, по сравнению с соответствующей клеткой, лишенной первого экзогенного полинуклеотида, или уменьшенный катаболизм общих жирных кислот, по сравнению с соответствующей клеткой, лишенной первого экзогенного полинуклеотида, или оба, таким образом, что она имеет увеличенный уровень общих жирных кислот, по сравнению с соответствующей клеткой, лишенной первого экзогенного полинуклеотида,
ii) клетка имеет увеличенную экспрессию и/или активность ацилтрансферазы ацилов жирных кислот, катализирующей синтез TAG, DAG или MAG, предпочтительно TAG, по сравнению с соответствующей клеткой, имеющей первый экзогенный полинуклеотид и лишенной экзогенного полинуклеотида, который кодирует полипептид, вовлеченный в биосинтез одного или нескольких неполярных липидов,
iii) клетка имеет уменьшенную продукцию лизофосфатидиновой кислоты (LPA) из ацил-ACP и G3P в пластидах, по сравнению с соответствующей клеткой, имеющей первый экзогенный полинуклеотид и лишенной генетической модификации, осуществляющей понижающую регуляцию эндогенной продукции и/или активности полипептида, вовлеченного в продукцию диацилглицерина (DAG) в пластиде в клетке,
iv) клетка имеет измененное соотношение C16:3-C18:3 жирных кислот в содержании TFA и/или содержании галактолипидов, по сравнению с соответствующей клеткой, лишенной экзогенного полинуклеотида(полинуклеотидов) и/или генетической модификации(модификаций), предпочтительно, уменьшенное соотношение,
v) клетка находится в вегетативной части растения и имеет общее содержание неполярных липидов по меньшей мере приблизительно 8%, по меньшей мере приблизительно 9%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно 11%, по меньшей мере приблизительно 12%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно 55%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 65%, по меньшей мере приблизительно 70%, между 8% и 75%, между 6% и 20%, между 10% и 75%, между 11% и 75%, между приблизительно 15% и 75%, между приблизительно 20% и 75%, между приблизительно 30% и 75%, между приблизительно 40% и 75%, между приблизительно 50% и 75%, между приблизительно 60% и 75%, или между приблизительно 25% и 50% (масс./масс. сухой массы),
vi) клетка находится в вегетативной части растения и имеет содержание TAG по меньшей мере приблизительно 1%, по меньшей мере приблизительно 2%, по меньшей мере приблизительно 3%, по меньшей мере приблизительно 4%, по меньшей мере приблизительно 5%, по меньшей мере приблизительно 6%, по меньшей мере приблизительно 7%, по меньшей мере приблизительно 8%, по меньшей мере приблизительно 9%, по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 11%, по меньшей мере приблизительно 12%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 55%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 65%, по меньшей мере приблизительно 70%, между 6% и 20%, между 8% и 75%, между 10% и 75%, между 11% и 75%, между приблизительно 15% и 75%, между приблизительно 20% и 75%, между приблизительно 30% и 75%, между приблизительно 40% и 75%, между приблизительно 50% и 75%, между приблизительно 60% и 75%, или между приблизительно 25% и 50% (масс./масс. сухой массы),
vii) полипептид фактора транскрипции выбран из группы, состоящей из Wrinkled 1 (WRI1), листовой семядоли 1 (LEC1), LEC1-подобного, листовой семядоли 2 (LEC2), BABY BOOM (BBM), FUS3, ABI3, ABI4, ABI5, Dof4 и Dof11,
viii) олеиновая кислота составляет по меньшей мере 20% (моль %), по меньшей мере 22% (моль %), по меньшей мере 30% (моль %), по меньшей мере 40% (моль %), по меньшей мере 50% (моль %), или по меньшей мере 60% (моль %), предпочтительно приблизительно 65% (моль %) или между 20% и приблизительно 65% от содержания TFA в клетке,
ix) неполярный липид в клетке содержит одну или несколько полиненасыщенных жирных кислот, выбранных из эйкозадиеновой кислоты (EDA), арахидоновой кислоты (ARA), стеаридоновой кислоты (SDA), эйкозатриеновой кислоты (ETE), эйкозатетраеновой кислоты (ETA), эйкозапентаеновая кислота (EPA), докозапентаеновой кислоты (DPA), докозагексаеновая кислота (DHA), или комбинации двух или более из них,
x) один или несколько, или все из промоторов выбраны из конститутивного промотора, такого как промотор гена убиквитина или промотор гена актина, тканеспецифического промотора, такого как специфический для листьев и/или стеблей промотор, регулируемого развитием промотора, такого как специфический для старения промотор, например, промотор SAG12, индуцибельного промотора или регулируемого суточным ритмом промотора,
xi) клетка имеет содержание TFA, уровень олеиновой кислоты в котором увеличен по меньшей мере на 2% или по меньшей мере 3%, по сравнению с соответствующей клеткой, лишенной экзогенного полинуклеотида(полинуклеотидов) и/или генетической модификации(модификаций), и/или уровень α-линоленовой кислоты (ALA) в котором уменьшен по меньшей мере на 2% или по меньшей мере на 3%, по сравнению с соответствующей клеткой, лишенной экзогенного полинуклеотида(полинуклеотидов) и/или генетической модификации(модификаций),
xii) неполярный липид в клетке включает модифицированный уровень общих стеролов, предпочтительно свободных (неэтерифицированных) стеролов, стероильных сложных эфиров, стероилгликозидов, по сравнению с неполярным липидом в соответствующей клетке, лишенной экзогенного полинуклеотида(полинуклеотидов) и/или генетической модификации(модификаций),
xiii) уровень одного или нескольких неполярных липида(липидов) и/или общее содержание неполярных липидов в клетке по меньшей мере на 2% масс. больше, чем в соответствующей клетке, содержащей экзогенные полинуклеотиды, кодирующие WRI1 Arabidposis thaliana (SEQ ID NO:21) и DGAT1 Arabidopsis thaliana (SEQ ID NO:1).
24. Клетка по любому из пп. 16-23, где применяют один или несколько, или все из следующих признаков когда это уместно;
i) полипептид, вовлеченный в биосинтез одного или нескольких неполярных липидов представляет собой ацилтрансферазу жирных ацилов, вовлеченную в биосинтез TAG, DAG или моноацилглицерина (MAG) в клетке, такую как DGAT, PDAT, LPAAT, GPAT или MGAT, предпочтительно, DGAT или PDAT, или представляет собой полипептид PDCT или CPT, или полипептид PLC или PLD,
ii) полипептид, вовлеченный в катаболизм триацилглицеринов (TAG) в клетке, представляет собой липазу SDP1, полипептид Cgi58, ацил-CoA-оксидазу, такую как ACX1 или ACX2, или полипептид, вовлеченный в β-окисление жирных кислот в клетке, такой как пероксисомальный транспортер АТФ-связывающей кассеты PXA1, предпочтительно, липазу SDP1,
iii) полипептид покрытия масляных телец (OBC) представляет собой олеозин, такой как полиолеозин или калеозин, или ассоциированный с липидными капельками белок (LDAP),
iv) полипептид, который увеличивает экспорт жирных кислот из пластид в клетке, представляет собой тиоэстеразу C16 или C18 жирных кислот, такую как полипептид FATA или полипептид FATB, транспортер жирных кислот, такой как полипептид ABCA9, или длинноцепочечную ацил-CoA-синтетазу (LACS),
v) полипептид, вовлеченный в импорт жирных кислот в пластиды клетки, представляет собой транспортер жирных кислот, или его субъединицу или регуляторный полипептид, предпочтительно, полипептид TGD, более предпочтительно, полипептид TGD5, и
vi) полипептид, вовлеченный в продукцию диацилглицерина (DAG) в пластиде, представляет собой пластидную GPAT, пластидную LPAAT или пластидную PAP.
25. Клетка по любому из пп. 11-23, которая получена из листа или стебля растения, или находится в листе или стебле растения, до цветения растения, и имеет содержание TFA и/или общее содержание неполярных жирных кислот по меньшей мере приблизительно 6%, по меньшей мере приблизительно 7%, по меньшей мере приблизительно 8%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно 11%, между 8% и 15%, или между 9% и 12% масс., предпочтительно между 8% и 20%.
26. Клетка по любому из пп. 17-25, где каждая генетическая модификация независимо представляет собой мутацию эндогенного гена, которая частично или полностью инактивирует ген, такую как точечная мутация, инсерция, или делеция, или генетическая модификация представляет собой экзогенный полинуклеотид, кодирующий молекулу РНК, ингибирующую экспрессию эндогенного гена, где экзогенный полинуклеотид является функционально связанным с промотором, способным управлять экспрессией полинуклеотида в клетке.
27. Растение, предпочтительно, растение вида Sorghum и/или Zea mays, или его часть, содержащие вегетативную часть растения, общее содержание жирных кислот (TFA) в которой включает жирные кислоты, этерифицированные в форме триацилглицеринов (TAG), и жирные кислоты в форме липидов, отличных от TAG, где вегетативная часть растения имеет содержание TFA приблизительно 5% (масс./масс. сухой массы), предпочтительно между 6% и 20%, и предпочтительно, имеет соотношение TAG/TFA (TTQ) между 0,01 и 0,60 или между 0,60 и 0,84, или между 0,84 и 0,95.
28. Растение, предпочтительно, растение вида Sorghum и/или Zea mays, или его часть, содержащие вегетативную часть растения, имеющую увеличенное содержание полипептида WRI1, увеличенное содержание полипептида DGAT и уменьшенное содержание полипептида SDP1, каждое по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа.
29. Растение, предпочтительно, растение вида Sorghum и/или Zea mays, или его часть, содержащие вегетативную часть растения, имеющую увеличенное содержание полипептида WRI1, увеличенное содержание полипептида DGAT и увеличенное содержание полипептида LEC2, каждое по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа.
30. Растение, предпочтительно, растение вида Sorghum и/или Zea mays, или его часть, содержащие вегетативную часть растения, имеющую увеличенное содержание полипептида PDAT или DGAT, уменьшенное содержание полипептида TGD, предпочтительно, полипептида TGD5, и уменьшенное содержание полипептида SDP1, каждое по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения дикого типа.
31. Растение, предпочтительно, растение вида Sorghum и/или Zea mays, или его часть, содержащие вегетативную часть растения, имеющую уменьшенное содержание TAG-липазы, такой как TAG-липаза SDP1, уменьшенное содержание полипептида TGD, такого как полипептид TGD5, и необязательно, уменьшенное содержание полипептида TST, такого как полипептид TST1.
32. Растение или его часть по любому из пп. 27-31, содержащие одно или оба из
a) первого экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид фактора транскрипции, который увеличивает экспрессию одного или нескольких гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в растении или его части, предпочтительно, полипептид WRI1, и
b) второго экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, вовлеченный в биосинтез одного или нескольких неполярных липидов, предпочтительно, DGAT и/или PDAT, и в каждом случае, любое одно или два, или три, или все четыре из
c) генетической модификации, осуществляющей понижающую регуляцию эндогенной продукции и/или активности полипептида, вовлеченного в катаболизм триацилглицеринов (TAG) в растении или его части, по сравнению с соответствующими растением или его частью, лишенными генетической модификации, предпочтительно, TAG-липазы SDP1,
d) третьего экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который увеличивает экспорт жирных кислот из пластид клетки в растении или его части, по сравнению с соответствующей клеткой, лишенной четвертого экзогенного полинуклеотида, предпочтительно, ацил-ACP-тиоэстеразы,
e) четвертого экзогенного полинуклеотида, кодирующего второй полипептид фактора транскрипции, который увеличивает экспрессию одного или нескольких гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке в растении или его части, предпочтительно, полипептид LEC2, и
f) второй генетической модификации, осуществляющей понижающую регуляцию эндогенной продукции и/или активности полипептида, вовлеченного в импорт жирных кислот в пластиды клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, лишенной второй генетической модификации,
где каждый экзогенный полинуклеотид является функционально связанным с промотором способным управлять экспрессией полинуклеотида в растении или его части.
33. Растение или его часть по п.32, дополнительно содержащие одно или оба из
a) пятого экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид покрытия масляных телец (OBC) или ассоциированный с липидными капельками белок (LDAP), и
b) третьей генетической модификации, осуществляющей понижающую регуляцию эндогенной продукции и/или активности полипептида, вовлеченного в продукцию диацилглицерина (DAG) в пластидах, по сравнению с соответствующими растением или его частью, лишенными, третьей генетической модификации.
34. Растение или его часть по п. 32 или 33, где часть представляет собой вегетативную часть и один или несколько, или все из промоторов экспрессируются на более высоком уровне в вегетативной части, по сравнению с семенем растения.
35. Растение или его часть, по любому из пп. 27-34, имеющие один или несколько признаков, определенных в любом из пп. 19-26.
36. Популяция из по меньшей мере приблизительно 1000 растений, где каждое представляет собой растение по любому из пп. 27-35, растущее в поле, или коллекция из по меньшей мере приблизительно 1000 вегетативные части растений, где каждая представляет собой вегетативную часть растения по любому из пп. 27-35, где вегетативные части растений собраны из растений, растущих в поле.
37. Семя растения или семя, полученное из растения по любому из пп. 27-35.
38. Способ идентификации, отбора и/или получения растения, предпочтительно, растения вида Sorghum и/или Zea mays, или его части, с желательным фенотипом, включающий
i) получение множества растений-кандидатов или их частей, каждое из которых содержит один или оба из
a) первого экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид фактора транскрипции, который увеличивает экспрессию одного или нескольких гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в растении или его части, предпочтительно, полипептид WRI1 и
b) второго экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, вовлеченный в биосинтез одного или нескольких неполярных липидов, предпочтительно, полипептид DGAT и/или полипептид PDAT, и в каждом случае, любое одно или два, или три, или все четыре из
c) генетической модификации, осуществляющей понижающую регуляцию эндогенной продукции и/или активности полипептида, вовлеченного в катаболизм триацилглицеринов (TAG) в растении или его части, по сравнению с соответствующими растением, лишенным генетической модификации, предпочтительно, TAG-липазы SDP1,
d) третьего экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который увеличивает экспорт жирных кислот из пластид клетки в растении или его части, по сравнению с соответствующей клеткой, лишенной третьего экзогенного полинуклеотида, предпочтительно, ацил-ACP-тиоэстеразу,
e) четвертого экзогенного полинуклеотида, кодирующего второй полипептид фактора транскрипции, который увеличивает экспрессию одного или нескольких гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке в растении, предпочтительно, полипептид LEC2, и
f) второй генетической модификации, осуществляющей понижающую регуляцию эндогенной продукции и/или активности полипептида, вовлеченного в импорт жирных кислот в пластиды клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, лишенной второй генетической модификации,
где каждый экзогенный полинуклеотид является функционально связанным с промотором, способным управлять экспрессией полинуклеотида в растении.
ii) анализ липидов во множестве частей, или по меньшей мере, в части каждого растения во множестве растений-кандидатов, со стадии i),
iii) идентификацию, отбор и/или получение растения, или его части, содержащих вегетативную часть растения, общее содержание жирных кислот (TFA) в которой включает жирные кислоты, этерифицированные в форме триацилглицеринов (TAG), и жирные кислоты в форме липидов, отличных от TAG, и содержащих вегетативную часть растения, имеющую содержание TFA приблизительно 5% (масс./масс. сухой массы), предпочтительно, между приблизительно 6% и приблизительно 20%, и предпочтительно, имеющих соотношение TAG/TFA (TTQ) между 0,01 и 0,60 или между 0,60 и 0,84, или между 0,84 и 0,95.
39. Способ идентификации, отбора и/или получения растения, предпочтительно, растения вида Sorghum и/или Zea mays, или его части, имеющих увеличенное TTQ в общем содержание жирных кислот, включающий
i) получение множества растений-кандидатов или их частей, каждое из которых содержит одну или несколько генетических модификаций, обеспечивающих (a) уменьшенное содержание или активность полипептида TAG-липазы, предпочтительно, уменьшенное содержание или активность TAG-липазы SDP1, (b) уменьшенное содержание или активность полипептида TGD, предпочтительно уменьшенное содержание или активность полипептида TGD5, (c) увеличенное содержание полипептида OBC или a LDAP, (d) увеличенное содержание или активность полипептида, который увеличивает экспорт жирных кислот из пластид, предпочтительно, ацил-ACP-тиоэстеразы, (e) уменьшенное содержание или активность полипептида TST, предпочтительно уменьшенное содержание или активность полипептида TST1, (f) модифицированный уровень полипептида PDCT, и (g) модифицированный уровень или активность полипептида CPT, (h) увеличенное содержание или активность полипептида PLC, (i) увеличенное содержание или активность полипептида PLD, (j) увеличенное содержание или активность полипептида PDAT, и (k) увеличенное содержание или активность двух полипептидов DGAT,
ii) анализ липидов во множестве частей, или по меньшей мере, в части каждого растения во множестве растений-кандидатов, со стадии i),
iii) идентификацию, отбор и/или получение растения, или его части, имеющих увеличенное TTQ в общем содержании жирных кислот по сравнению с соответствующими растением или частью растения, лишенными генетических модификаций.
40. Способ по п. 39, дополнительно включающий стадию расчета TTQ для растений-кандидатов или их частей, после стадии ii).
41. Способ получения клетки по любому из пп. 11-26, включающий стадии:
i) введение в клетку, предпочтительно, клетку вида Sorghum или Zea mays, по меньшей мере одного экзогенного полинуклеотида и/или по меньшей мере одной генетической модификации, как определено по любому из пп. 11-26,
ii) экспрессии экзогенного полинуклеотида(полинуклеотидов) и/или генетических модификаций в клетке или в потомстве клетки,
iii) анализа содержания липидов в клетке или в потомстве клетки, и
iv) отбора или идентификации клетки по любому из пп. 11-26.
42. Способ получения растения, предпочтительно, растения вида Sorghum и/или Zea mays, в геном которого интегрирован набор экзогенных полинуклеотидов и/или генетических модификаций, как определено по любому из пп. 32-35, включающий стадии
i) скрещивания двух материнских растений, где одно растение содержит по меньшей мере один из экзогенных полинуклеотидов и/или по меньшей мере одну из генетических модификаций, как определено по любому из пп. 32-35, и другое растение содержит по меньшей мере один из экзогенных полинуклеотидов и/или по меньшей мере одну из генетических модификаций, как определено по любому из пп. 32-35, и при этом два материнских растения содержат набор экзогенных полинуклеотидов и/или генетических модификаций, как определено по любому из пп. 32-35,
ii) скрининга одного или нескольких растений-потомков скрещивания на предмет присутствия или отсутствия набора экзогенных полинуклеотидов и/или генетических модификаций, как определено по любому из пп. 32-35, и
iii) отбора растения-потомка, содержащего набор экзогенных полинуклеотидов и/или генетических модификаций, как определено по любому из пп. 32-35,
с получением таким образом растения.
43. Способ получения нефтепродукта, включающий стадии
(i) обработки в реакторе композиции, содержащей
(a) вегетативные части растений, предпочтительно, вегетативные части растений вида Sorghum или Zea mays, общее содержание жирных кислот (TFA) в которых включает жирные кислоты, этерифицированные в форме триацилглицеринов (TAG), и жирные кислоты в форме липидов, отличных от TAG, где вегетативная часть растения имеет содержание TFA приблизительно 5% (масс./масс. сухой массы), предпочтительно, по меньшей мере 10%, и предпочтительно, имеет соотношение TAG/TFA (TTQ) между 0,01 и 0,60 или между 0,60 и 0,84, или между 0,84 и 0,95,
(b) растворитель, который содержит воду, спирт или и то, и другое, и
(c) необязательно, катализатор,
где обработка включает нагревание композиции при температуре между приблизительно 50°C и приблизительно 450°C и давлении от 5 до 350 бар на протяжении периода от 1 до 120 минут в окислительной, восстановительной или инертной среде,
(ii) выделения нефтепродукта из реактора с выходом по меньшей мере 35% масс., в пересчете на сухую массу вегетативных частей растений,
с получением таким образом нефтепродукта.
44. Способ по п. 43, характеризующийся одним или нескольким, или всем из:
(i) вегетативные части растений имеют сухую массу по меньшей мере 1 кг,
(ii) вегетативные части растений имеют содержание TFA и/или общее содержание неполярных липидов по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, приблизительно 25%, приблизительно 30%, приблизительно 35%, или между 30% и 75% в пересчете на сухую массу,
(iii) концентрация твердых веществ в композиции составляет между 5% и 90%
(iv) катализатор содержит NaOH или KOH, или оба, предпочтительно в концентрации 0,1-2 М,
(v) время обработки составляет между 1 и 60 минут, предпочтительно между 10 и 60 минут, предпочтительно между 15 и 30 минут,
(vi) если растворитель представляет собой воду, способ обеспечивает выход нефтепродукта между минимум 36%, 37%, 38%, 39% или 40% и максимум 55% или 60% по массе в пересчете на сухую массу в вегетативных частях растений,
(vii) если растворитель содержит спирт, способ обеспечивает выход нефтепродукта между минимум 36%, 37%, 38%, 39% или 40% и максимум 65% или 70% по массе, в пересчете на сухую массу вегетативных частей растений,
(viii) если растворитель содержит приблизительно 80% воды, нефтепродукт содержит приблизительно 30% C13-C22 углеводородных соединений,
(ix) если растворитель содержит приблизительно 50% метанола, нефтепродукт содержит приблизительно 50% метиловых эфиров жирных кислот (FAME),
(x) содержание воды в выделенном нефтепродукте составляет менее чем приблизительно 15% по массе,
(xi) выход нефтепродукта по меньшей мере на 2% масс. больше, чем выход соответствующего способа с использованием соответствующих вегетативных частей растений, в которых содержание неполярных липидов составляет менее чем 2% в пересчете на сухую массу, и
(xii) вегетативные части растений на стадии (i)(a) физически обрабатывают посредством одного или нескольких из сушки, рубки, шинковки, помола, вальцевания, прессования, дробления или перетирания.
45. Способ по п. 43 или п. 44, дополнительно включающий одно или несколько из:
(i) гидродезоксигенации выделенного нефтепродукта,
(ii) обработки выделенного нефтепродукта водородом, с целью уменьшения уровней кетонов или сахаров в нефтепродукте,
(iii) получения синтетического газа из выделенного нефтепродукта, и
(iv) фракционирования выделенного нефтепродукта, с целью получения одного или нескольких из мазута, дизельного топлива, керосина или бензина.
46. Способ по любому из пп. 43-45, где вегетативные части растений включают листья, стебли растения или и то, и другое.
47. Способ производства промышленного продукта, включающий стадии:
i) получения клетки по любому из пп. 11-26, растения или его части по любому из пп. 27-35, или семени по п. 37, и
ii) либо
a) перевода по меньшей мере части липида в клетке, растении или его части, или семени со стадии i) в промышленный продукт, с применением нагревания, химических или ферментных средств или любой их комбинации, к липиду in situ в клетке, растении или его части, или семени, или
b) физической обработки клетки, растения или его части, или семени со стадии i), и одновременного или последующего перевода по меньшей мере части липида в обрабатываемой клетке, растении или его части, или семени в промышленный продукт, с применением нагревания, химических или ферментных средств или любой их комбинации к липиду в обрабатываемой клетке, растении или его части, или семени, и
iii) выделения промышленного продукта,
с получением таким образом промышленного продукта.
48. Способ по п. 47, где часть растения представляет собой вегетативную часть растения.
49. Способ по п. 47 или п. 48, дополнительно включающий стадии:
(a) экстракции по меньшей мере части неполярного липида, содержащегося в клетке, растении или его части, или семени, в форме неполярного липида, и
(b) выделения экстрагированного неполярного липида,
где стадии (a) и (b) выполняют до стадии перевода по меньшей мере части липида в клетке, растении или его части, или семени, в промышленный продукт.
50. Способ получения экстрагированного липида, включающий стадии:
i) получения клетки по любому из пп. 11-26, растения или его часть по любому из пп. 27-35, или семени по п. 37,
ii) экстракции липида из клетки, растения или его части, или семени, и
iii) выделения экстрагированного липида,
с получением таким образом экстрагированного липида.
51. Способ по п. 50, включающий экстракцию липида посредством одного или нескольких из сушки, вальцовки, прессованя, дробления или перетирания растения или его части, или семени, и/или очистки экстрагированного липида или масла из семян.
52. Способ по п. 51, включающий применение органического растворителя в процессе экстракции, для экстракции масла.
53. Способ по любому из пп. 50-52, включающий выделение экстрагированного липида посредством сбора его в емкость и/или одного или нескольких из дегуммации, дезодорирования, обесцвечивания, сушки, фракционирования экстрагированного липида, удаления по меньшей мере некоторых восков и/или сложных эфиров восков из экстрагированного липида, или анализа состава жирных кислот экстрагированного липида.
54. Способ по любому из пп. 50-53, где объем экстрагированного липида или масла составляет по меньшей мере 1 литр.
55. Способ по любому из пп. 50-54, где применяют один или несколько, или все из следующих признаков:
(i) экстрагированный липид или масло содержит триацилглицерины, где триацилглицерины составляют по меньшей мере 90%, предпочтительно, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 96%, экстрагированного липида или масла,
(ii) экстрагированный липид или масло содержит свободные стеролы, стероильные сложные эфиры, стероилгликозиды, воски или сложные эфиры восков или любую их комбинацию, и
(iii) общее содержание и/или состав стеролов в экстрагированном липиде или масле значительно отличается от содержания и/или состава стеролов в экстрагированном липиде или масле, полученном из соответствующего растения или его части, или семени.
56. Способ по любому из пп. 50-55, дополнительно включающий перевод экстрагированного липида в промышленный продукт.
57. Способ по любому из пп. 47-49 или 56, где промышленный продукт является углеводородным продуктом, таким как сложные эфиры жирных кислот, предпочтительно, метиловые сложные эфиры жирных кислот и/или этиловые сложные эфиры жирных кислот, алкан, такой как метан, этан или длинноцепочечный алкан, смесь алканов с более длинной цепью, алкен, биотопливо, газообразный монооксид углерода и/или водород, биоспирт, такой как этанол, пропанол, или бутанол, биоуголь, или комбинация монооксида углерода, водорода и биоугля.
58. Способ по любому из пп. 47-57, где часть растения представляет собой воздушную часть растения или зеленую часть растения, предпочтительно, вегетативную часть растения, такую как лист или стебель растения.
59. Способ по любому из пп. 47-58, где стадия получения растения или его части включает стадию сбора урожая растения или его части с помощью механического сборщика.
60. Способ по любому из пп. 47-59, где уровень липида в растении или его части, или семени, и/или в экстрагированном липиде или масле, поддается определению посредством анализа с использованием газовой хроматографии метиловых сложных эфиров жирных кислот, полученных из экстрагированного липида или масла.
61. Способ по любому из пп. 47-60, где часть растения представляет собой вегетативную часть растения, имеющую общее содержание TAG по меньшей мере приблизительно 11%, по меньшей мере приблизительно 12%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 35%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 45%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 55%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 65%, по меньшей мере приблизительно 70%, между 6% и 20%, между 8% и 75%, между 10% и 75%, между 11% и 75%, между приблизительно 15% и 75%, между приблизительно 20% и 75%, между приблизительно 30% и 75%, между приблизительно 40% и 75%, между приблизительно 50% и 75%, между приблизительно 60% и 75%, или между приблизительно 25% и 50% (масс./масс. сухой массы).
62. Способ получения семени, включающий:
i) выращивание растения по любому из пп. 27-35, и
ii) сбор урожая семени с растения.
63. Способ по п. 62, включающий выращивание популяции из по меньшей мере приблизительно 1500, по меньшей мере приблизительно 3000 или по меньшей мере приблизительно 5000 растений, и сбор урожая семени с популяции растений.
64. Выделенный или экстрагированный, или растворимый белок, который можно получать из клетки по любому из пп. 11-26, растения или его части по любому из пп. 27-35, семени по п. 37, или который можно получать посредством способа по любому из пп. 50-61.
65. Промышленный продукт, полученный способом по любому из пп. 47-49, 56-61, который является углеводородным продуктом, таким как эфиры жирных кислот, предпочтительно, метиловые сложные эфиры жирных кислот и/или этиловые сложные эфиры жирных кислот, алкан, такой как метан, этан или длинноцепочечный алкан, смесь алканов с более длинной цепью, алкен, биотопливо, газообразный монооксид углерода и/или водород, биоспирт, такой как этанол, пропанол, или бутанол, биоуголь или комбинация монооксида углерода, водорода и биоугля.
66. Применение клетки по любому из пп. 11-26, растения или его части по любому из пп. 27-35, семени по п. 37, или выделенного или экстрагированного липида по п. 65 для производства промышленного продукта.
67. Способ получения топлива, включающий:
i) проведение реакции липида по п. 64 со спиртом, необязательно в присутствии катализатора, с получением алкиловых сложных эфиров, и
ii) необязательно, смешивание алкиловых сложных эфиров с топливом на основе нефти.
68. Способ получения синтетического дизельного топлива, включающий:
i) перевод липида в клетке по любому из пп. 11-26, растении или его части по любому из пп. 27-35, или семени по п. 37 в бионефть посредством способа, включающего пиролиз или гидротермическую обработку, или в синтетический газ посредством газификации, и
ii) перевод бионефти в синтетическое дизельное топливо посредством способа, включающего фракционирование, предпочтительно, с отбором углеводородных соединений, которые конденсируются при температуре между приблизительно 150°C и приблизительно 200°C или между приблизительно 200°C и приблизительно 300°C, или перевод синтетического газа в биотопливо с использованием металлического катализатора или микробного катализатора.
69. Способ получения биотоплива, включающий перевод липида в клетке по любому из пп. 11-26, растении или его части по любому из пп. 27-35, или семени по п. 37, в бионефть посредством пиролиза, в биоспирт посредством ферментации или в биогаз посредством газификации или анаэробного расщепления.
70. Способ по п. 68 или 69, где часть представляет собой вегетативную часть растения.
