Способы применения сериновой протеазы архей - RU2019132448A

1. Рекомбинантная конструкция, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую термостабильный полипептид, характеризующийся активностью сериновой протеазы, где указанная кодирующая нуклеотидная последовательность функционально связана с по меньшей мере одной регуляторной последовательностью, функциональной в продуцирующем хозяине, и нуклеотидная последовательность кодирует полипептид с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO: 3, или полипептид с аминокислотной последовательностью, которая на по меньшей мере 92% идентична ей;

и где указанная регуляторная последовательность является гетерологичной по отношению к кодирующей нуклеотидной последовательности, или указанные регуляторная последовательность и кодирующая последовательность расположены в порядке, отличном от того, в котором они вместе встречаются в природе.

2. Рекомбинантная конструкция по п. 1, где указанная кодирующая нуклеотидная последовательность представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO: 8, или полипептид с аминокислотной последовательностью, которая на по меньшей мере 89% идентична ей.

3. Рекомбинантная конструкция по п. 1 или 2, где указанная кодирующая нуклеотидная последовательность выбрана из группы, состоящей из:

i) нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO: 2, или полипептид с аминокислотной последовательностью, которая на по меньшей мере 86% идентична ей; или

ii) нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, изложенной под SEQ ID NO:5 или 14, или полипептид с аминокислотной последовательностью, которая на по меньшей мере 84% идентична ей.

4. Рекомбинантная конструкция по любому из пп. 1-3, где указанная по меньшей мере одна регуляторная последовательность содержит промотор.

5. Вектор, содержащий рекомбинантную конструкцию по любому из пп. 1-4.

6. Продуцирующий хозяин или клетка-хозяин, содержащие рекомбинантную конструкцию по любому из пп. 1-4.

7. Продуцирующий хозяин или клетка-хозяин по п. 6, где указанная клетка представляет собой бактериальную клетку, клетку археи, грибную клетку или клетку водоросли.

8. Способ получения термостабильной сериновой протеазы, при этом указанный способ предусматривает:

i) осуществление трансформации клетки-хозяина с помощью конструкции по любому из пп. 1-4 и

ii) культивирование трансформированной клетки-хозяина из стадии (i) в условиях, при которых продуцируется термостабильная сериновая протеаза.

9. Способ по п. 8, дополнительно предусматривающий извлечение термостабильной сериновой протеазы из клетки-хозяина.

10. Способ по п. 8 или 9, где указанная клетка-хозяин представляет собой бактериальную клетку, клетку археи, грибную клетку или клетку водоросли.

11. Культуральный супернатант, содержащий термостабильную сериновую протеазу, полученную с помощью способа по любому из пп. 8-10.

12. Способ гидролиза материала, полученного из кукурузы, при этом указанный способ предусматривает:

(a) приведение материала, полученного из кукурузы, в контакт с жидкостью с образованием затора и

(b) осуществление гидролиза по меньшей мере одного белка в заторе с образованием гидролизата путем приведения гидролизата в контакт со смесью ферментов, содержащей термостабильную сериновую протеазу, которая содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 3, или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 92% идентична последовательности под SEQ ID NO:3, и

(c) необязательно извлечение гидролизата, полученного на стадии (b).

13. Корм для животных, кормовой продукт, композиция на основе кормовой добавки или премикс, содержащие по меньшей мере один полипептид, который характеризуется активностью сериновой протеазы и является термостабильным, где указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 3, или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 92% идентична ей, и где указанные корм для животных, кормовой продукт, композиция на основе кормовой добавки или премикс необязательно дополнительно содержат (a) по меньшей мере один пробиотик, или (b) по меньшей мере один другой фермент, или (c) по меньшей мере один пробиотик и по меньшей мере один другой фермент.

14. Композиция на основе кормовой добавки по п. 13, где указанная композиция на основе кормовой добавки дополнительно содержит по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из белка, пептида, сахарозы, лактозы, сорбита, глицерина, пропиленгликоля, хлорида натрия, сульфата натрия, ацетата натрия, цитрата натрия, формиата натрия, сорбата натрия, хлорида калия, сульфата калия, ацетата калия, цитрата калия, формиата калия, ацетата калия, сорбата калия, хлорида магния, сульфата магния, ацетата магния, цитрата магния, формиата магния, сорбата магния, метабисульфита натрия, метилпарабена и пропилпарабена.

15. Композиция на основе кормовой добавки по п. 13 или 14, где указанная композиция на основе кормовой добавки является гранулированной и содержит частицы, полученные с помощью способа, выбранного из группы, состоящей из грануляции с высоким усилием сдвига, грануляции в барабане, экструзии, сферонизации, агломерации в псевдоожиженном слое, нанесения покрытия распылением в псевдоожиженном слое, высушивания распылением, сублимационной сушки, приллирования, охлаждения распылением, пульверизации с помощью вращающегося диска, коацервации, таблетирования или любой комбинации вышеуказанных способов.

16. Композиция на основе кормовой добавки п. 15, где среднее значение диаметра частиц составляет от 50 до 2000 микрон.

17. Композиция на основе кормовой добавки по п. 15 или 16, где указанная композиция на основе кормовой добавки представлена в форме жидкости, сухого порошка, или гранулы, или покрытия, или представлена в форме с нанесенным покрытием или в инкапсулированной форме.

18. Композиция на основе кормовой добавки по п. 17, где указанная композиция на основе кормовой добавки представлена в форме жидкости, которая является подходящей для высушивания распылением на кормовой пеллете.

19. Корм для животных по п. 13, где по меньшей мере один полипептид, характеризующийся активностью сериновой протеазы, присутствует в количестве от 1 до 20 г/тонна.

20. Способ получения продуктов ферментации из крахмалсодержащего материала, предусматривающий:

(a) разжижение крахмалсодержащего материала с помощью смеси ферментов, содержащей сериновую протеазу, которая содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 3, или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 92% идентична последовательности под SEQ ID NO:3;

(b) осахаривание продукта из стадии (а);

(c) ферментацию с помощью подходящего организма и

(d) необязательно извлечение продукта, полученного на стадии (с).

21. Способ по п. 20, где стадии (b) и (c) осуществляют одновременно.

22. Способ по п. 20 или 21, где добавление источника азота исключено или уменьшено на по меньшей мере 50% за счет применения 1-20 г сериновой протеазы/MT крахмалсодержащего материала, где сериновая протеаза содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 3,

или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 92% идентична последовательности под SEQ ID NO:3.

23. Способ по п. 22, где источник азота представляет собой мочевину.

24. Способ по п. 22 или 23, где продукт разжижения представляет собой этанол, и при этом кислый протеолитический фермент не требуется в случае применения 1-20 г термостабильной сериновой протеазы/MT крахмалсодержащего материала, где сериновая протеаза содержит аминокислотную последовательность, изложенную под SEQ ID NO: 3, или аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 92% идентична последовательности под SEQ ID NO:3.